田艷春

（赤峰學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

赤霉素對金針菇菌絲生長的影響

田艷春

（赤峰學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

在金針菇固體培養(yǎng)基中加入不同濃度赤霉素作為刺激因子，測量赤霉素對金針菇菌絲生長的影響.實驗表明，赤霉素濃度在0～60ppm范圍時，金針菇菌絲日生長呈正相關(guān)，赤霉素濃度在60～80ppm范圍時，與金針菇菌絲日生長呈負相關(guān).綜合菌絲潔白度、菌絲密度等因素，赤霉素對金針菇菌絲生長影響最適濃度為60ppm.

金針菇；赤霉素；日生長速；日生長量

金針菇又稱毛柄金錢菌、樸菇、構(gòu)菌、冬菇、金菇等.在分類上隸屬真菌門，擔(dān)子菌亞門，傘菌目，口蘑科，金錢菌屬，學(xué)名為Flammulina velutiper（Fr.）Sing.金針菇以其脆嫩、營養(yǎng)豐富、味美適口而著稱于世.據(jù)測定，金針菇含有種類比較齊全的人體必需氨基酸成分.其中賴氨酸和精氨酸含量尤其豐富，對增強智力，尤其是對兒童的身高和智力發(fā)育有良好的作用，被譽為“增智菇”.常食金針菇，還能降低膽固醇，預(yù)防肝臟疾病和腸道胃潰瘍，增強機體免疫力，防病健身.最近有研究表明，金針菇中含有的樸菇素是一種相對分子質(zhì)量為24000的堿性蛋白，具有顯著的抗癌功能.因此規(guī)模化生產(chǎn)金針菇菌絲體所獲得的堿性蛋白應(yīng)用于食品對人類有很大益處.

赤霉素是一類屬于雙萜類化合物的植物激素.赤霉素可以提高植物體內(nèi)生長素的含量，而生長素直接調(diào)節(jié)細胞的伸長，另外對植物細胞的分裂、體積增大也有促進作用.近些年，赤霉素被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，取得良好效果，在食用菌生產(chǎn)上應(yīng)用較少，因此，研究赤霉素對金針菇菌絲培養(yǎng)的影響、以期獲得大量菌絲體就具有實際意義.

1 材料與方法

1.1 實驗材料與儀器

1.1.1 實驗菌種：金針菇玉雪22（由江蘇省江都市天達食用菌研究所提供）

1.1.2 刺激因子：赤霉素

1.1.3 實驗培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮）200g、葡萄糖20g、瓊脂粉18～20g、水 1000m L

高粱培養(yǎng)基：高粱99%、石灰粉1%、料水比1：（1.5～2.0）

1.1.4 主要儀器：電子天平，超靜工作臺，立式高壓滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱

1.2 刺激因子濃度設(shè)置：20ppm,40ppm,60ppm,80ppm，以0ppm為對照，每組設(shè)4個重復(fù).

1.3 實驗方法

1.3.1 PDA培養(yǎng)基的制備及檢測

選擇優(yōu)質(zhì)新鮮的馬鈴薯清洗干凈，切成2m m厚的薄片，稱重200g，加入1000m l蒸餾水,在電爐上煮沸，用玻璃棒不斷攪拌，煮沸10分鐘，然后用四至六層紗布過濾，濾液不足1000m l的需加水補足.然后加入瓊脂20g煮沸5分鐘至瓊脂徹底溶化,最后加入葡萄糖20g煮沸即可.制備好的培養(yǎng)基分裝于18m m×180m m的干燥試管中，一般裝入量為試管高度的1/5至1/4，用干凈的紗布擦去黏附在試管壁上的培養(yǎng)基，塞上棉塞，棉塞在管內(nèi)外長度約為2:1，分裝好的試管豎直放置.

塞好棉塞的試管每10支一捆，上面用兩層報紙包扎好，豎直放入立式高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，滅菌壓力為1.47×105Pa，溫度為 121℃，時間 20～30m i n.

當(dāng)滅菌鍋內(nèi)溫度降至60℃左右時，將試管取出，制備成斜面，斜面長度以占試管總長度的3/4為宜.待斜面培養(yǎng)基冷卻凝固后，隨機選取3～5支，放入恒溫培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)3d，培養(yǎng)基表面光滑無雜菌方可使用.

1.3.2 金針菇母種轉(zhuǎn)管擴大培養(yǎng)

轉(zhuǎn)管擴大培養(yǎng)工作在紫外燈殺菌環(huán)境的無菌超凈工作臺中進行.接種前，將斜面試管，接種工具，金針菇母種，酒精燈，酒精棉等放入超凈工作臺，封閉進行紫外燈照射消毒30m i n，然后關(guān)閉紫外燈，打開吹風(fēng)，進行擴繁.

擴繁過程中要注意無菌操作、接種塊大?。ㄐQ豆大?。?、接入位置（斜面中央），擴繁比例為1:15，將斜面試管放入恒溫箱內(nèi)25℃黑暗條件下培養(yǎng)7天，待菌絲長滿試管進行使用或保藏.

1.3.3 高粱培養(yǎng)基的制備

選擇無損壞的老式熟玻璃罐頭瓶，清洗干凈，用0.1%的高錳酸鉀溶液浸泡24小時，控干備用.選擇上年收獲的高粱，要求顆粒飽滿、無霉變、無蟲蛀.將選好的高粱在清水中浸泡24h，讓其吸足水分，將浸泡好的高粱用清水漂洗多遍，除去秕粒及其他雜質(zhì)等.高粱洗凈后放入鍋內(nèi)，文火煮，煮至熟而不爛，有1%高粱開花即可，高粱煮好后控凈表面水分，然后在谷粒中加入0.5%石灰粉和0.5%石膏粉，充分混合均勻，及時裝入清洗好的罐頭瓶中，裝料過程中一邊裝一邊輕輕震動，松緊適宜，不必用工具壓緊，以免影響通氣，裝至瓶肩，用手將料面輕輕壓緊撫平，最后用高錳酸鉀溶液將瓶口內(nèi)壁及外表擦干凈.用一張中間剪出一個直徑2cm孔的聚丙烯塑料薄膜封口，外面再封一張聚丙烯塑料無孔薄膜，最上面封蓋一層報紙，豎直放入立式高壓鍋滅菌，滅菌壓力為1.47×105Pa，溫度為121℃，時間1.5h，當(dāng)壓力降為零時，再次升溫至121℃，滅菌1.5h,自然冷卻.

檢測：隨機取3-5瓶，放入30±1℃恒溫箱中培養(yǎng)3d，檢查有無雜菌生長，如無雜菌產(chǎn)生方可使用，如有雜菌生長應(yīng)重新滅菌.

1.3.4 不同濃度赤霉素的添加

在制備好經(jīng)檢測無雜菌生長的PDA斜面培養(yǎng)基和高粱培養(yǎng)基內(nèi)添加不同濃度的赤霉素，設(shè)4個重復(fù)，然后在超靜工作臺內(nèi)向兩種培養(yǎng)基內(nèi)接入母種一塊，然后放入恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中每天觀察菌絲生長狀況，待其中一支試管或罐頭瓶長滿菌絲，停止培養(yǎng)，測量并計算菌絲生長速度及日生長量.

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度赤霉素對PDA培養(yǎng)基中金針菇菌絲生長的影響

表1 不同濃度赤霉素對PDA培養(yǎng)基中金針菇菌絲長勢的影響

由表1可以看出赤霉素濃度為60ppm時，金針菇菌絲顏色最白，菌絲密度最大.

2.2 不同濃度赤霉素對PDA培養(yǎng)基中金針菇菌絲日生長速的影響

圖1 不同濃度赤霉素對金針菇菌絲日生長速的影響

由圖1可以看出，當(dāng)赤霉素濃度在0～60ppm范圍時，赤霉素濃度與金針菇菌絲的日生長速呈正相關(guān).當(dāng)赤霉素濃度在60ppm時，菌絲日生長速的達到最大，比對照組高120.00%，當(dāng)赤霉素濃度介于60～80ppm時，雖然與菌絲的日生長速呈負相關(guān)，但是也高于對照組.

綜合菌絲潔白度、菌絲密度、菌絲日生長速等因素，赤霉素刺激金針菇菌絲生長最適濃度為60ppm.

2.3 不同濃度赤霉素對高粱培養(yǎng)基中金針菇菌絲長勢的影響

由表2可以看出，當(dāng)培養(yǎng)基內(nèi)赤霉素濃度為60ppm時，菌絲最白、菌絲密度最大.

2.4 不同濃度赤霉素對高粱培養(yǎng)基中金針菇菌絲日生長量的影響

由圖2可以直觀的看出，當(dāng)赤霉素濃度在0-60ppm時，赤霉素濃度與菌絲日生長量呈正相關(guān)，當(dāng)赤霉素濃度在60ppm時，菌絲日生長量的達到最大，比對照組高80.65%，當(dāng)赤霉素濃度在60～80ppm范圍時，赤霉素濃度與金針菇菌絲日生長量雖然呈負相關(guān)，但是也高于對照組.

表2 不同濃度赤霉素對高粱培養(yǎng)基中金針菇菌絲長勢的影響

圖2 赤霉素濃度對金針菇菌絲日生長量的影響

綜合菌絲潔白度，菌絲密度，菌絲日生長量三項指標，高粱培養(yǎng)基中赤霉素濃度為60ppm時，金針菇菌絲生長最佳.

3 結(jié)論

3.1 在固體培養(yǎng)基中加入適量濃度的赤霉素時，可以促進金針菇菌絲的生長.

3.2 當(dāng)赤霉素濃度在0-60ppm時,赤霉素濃度與菌絲的生長呈正相關(guān).

3.3 當(dāng)赤霉素濃度在60-80ppm時，赤霉素濃度與菌絲的生長呈負相關(guān).

3.4 當(dāng)培養(yǎng)基內(nèi)赤霉素濃度為60ppm時，菌絲生長速度、日生長量達到峰值.

綜合菌絲潔白度、菌絲密度、菌絲生長速率三項指標，筆者認為60ppm為最適合金針菇菌絲生長的濃度.

本實驗通過不同濃度赤霉素對金針菇生長速率影響的研究，得出了比較合理科學(xué)可信的結(jié)論，為以后快速培育金針菇菌絲體提供了一定的實驗基礎(chǔ).

〔1〕王桂芹，王秀艷.食用菌栽培.內(nèi)蒙古科學(xué)教育出版社，2001.

〔2〕周協(xié)光，李嘉翔.食用菌菌絲體的培養(yǎng)及其食品制作的研究[J].農(nóng)業(yè)現(xiàn)代化研究，1994，15（4）：247-257.

〔3〕柯麗霞，楊慶堯.金針菇中的抗腫瘤物質(zhì)[J].中國使用菌，1993,12（5）:5-6.

〔4〕魏華，謝俊杰，吳凌偉，等.金針菇的營養(yǎng)保健作用[J].食用菌報，1995,2（1）：59-64.

〔5〕黃燕琳，李伯邁.金針菇液體發(fā)酵中諸因素對菌絲體產(chǎn)量的影響[J].湖南微生物學(xué)通訊，1989（1）：43-45.

〔6〕品味食用菌.http://tech-food.com/news/viewnews.asp?ID=13257.

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1673-260X（2012）10-0026-02