徐 菲，李順祥，周 晉，董治程，黃 丹

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)中藥現(xiàn)代化重點實驗室，湖南 長沙 410208；2.湖南省中醫(yī)藥研究院中藥新藥研究與開發(fā)省重點實驗室，湖南 長沙 410013）

百合是植物卷丹Lilium lancifolium Thunb、百合L.brownii F. E. Brown var. viridulum Baker和細(xì)葉百合Liliumm pumilum DC. 的干燥肉質(zhì)鱗莖，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，性味甘寒，具有潤肺止咳、清心安神、增強機體免疫力等功效[1,2]。通過現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)研究，進一步證實百合具有鎮(zhèn)咳、平喘、祛痰、助眠、抗疲勞、耐缺氧、抗癌等功效[3]。

硫熏是百合加工的傳統(tǒng)工藝，然而隨著人們對藥品安全意識的增強及國內(nèi)外二氧化硫殘留量標(biāo)準(zhǔn)要求的提高，傳統(tǒng)硫熏百合對人體的安全危害越來越受到人們的重視，因此對目前市場百合二氧化硫殘留量的研究是十分必要的。本文采用鹽酸副玫瑰苯胺法[4]對目前不同干燥工藝的百合硫殘量分析，為百合的安全用藥提供實驗依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 一般資料

1.1.1 儀器與試劑 AE240 型電天平（梅特勒-托利多儀器有限公司），F(xiàn)W-13粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司），UV-1601紫外可見-分光光度計（日本，島津公司）；所用試劑均為分析純，娃哈哈純凈水（杭州娃哈哈集團有限公司）。

1.1.2 實驗藥材 實驗百合藥材為龍山地區(qū)市場購買不同百合干燥樣品及自制不同干燥工藝百合樣品，經(jīng)湖南省中醫(yī)藥研究院中藥研究所謝昭明教授鑒定為植物卷丹Lilium lancifolium Thunb的肉質(zhì)鱗莖。

1.2 試劑的制備

四氯汞鈉吸收液：稱取13.6 g氯化高汞及6.0 g氯化鈉，溶于水中并稀釋至1 000 mL，放置過夜，過濾后備用。

氨基磺酸銨溶液（12 g/L）：稱取氨基磺酸銨1.2021 g溶于水中并稀釋至100 mL。

甲醛溶液（2 g/L）：吸取0.55 mL無聚合沉淀的甲醛（36%），加水稀釋至100 mL，混勻。

淀粉指示劑（10 g/L）：稱取1.01 g可溶性淀粉，用少許水調(diào)成糊狀，緩緩傾入100 mL沸水中，隨加隨攪拌，煮沸，放冷備用，此溶液臨用時現(xiàn)配。

碘溶液[c（I2）=0.100mol/L]：精密稱取KI 3.5051 g，I2 1.3017 g，用水定容至100 mL，溶解完全，搖勻，即得。

硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液[c（Na2S2O3·5H20）=0.100 mol/L]：精密稱取2.4803 g硫代硫酸鈉，水定容至100 mL，搖勻，即得。

1.3 對照品母液的制備及標(biāo)定

對照品母液的制備及標(biāo)定：稱取0.5021 g亞硫酸氫鈉，溶于200 mL四氯汞鈉吸收液中，放置過夜，上清液用定量濾紙過濾備用。吸取10.0 mL亞硫酸氫鈉-四氯汞鈉溶液于250 mL碘量瓶中，加100 mL水，準(zhǔn)確加入20.00 mL碘溶液（0.100mol/L）、5.0 mL冰乙酸，搖勻，放置于暗處，2 min后迅速以硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.100 mol/L）滴定至淡黃色，加0.5 mL淀粉指示劑，繼續(xù)滴至無色。另取l00 mL水，準(zhǔn)確加入碘溶液20.0 mL（0.1 mol/L）、5 mL冰乙酸，按同一方法做試劑空白試驗，經(jīng)標(biāo)定后對照品母液濃度為：0.986 mg/mL。

1.4 對照品溶液的制備

精密吸取1.0 mL上述對照品母液，用四氯貢鈉溶液定容至500 mL，即得濃度為1.972μL/mL對照品溶液。

1.5 供試品溶液的制備

取適當(dāng)百合樣品，粉碎并過40目篩，取本品約5.0 g，精密稱定，以少量水潤濕，置于100 mL容量瓶中，然后加入20 mL四氯汞鈉吸收液，以水定容至刻度，搖勻，放置7 h，過濾后備用。

1.6 最大吸收波長選擇

分別吸取2.0 mL樣品溶液和2.0 mL對照品溶液于25 mL帶塞比色管中，加入四氯汞鈉吸收液至10 mL，然后再加入1.0 mL氨基磺酸銨溶液、1.0 mL甲醛溶液及1.0 mL鹽酸副玫瑰苯胺溶液，搖勻，放置20 min。以空白調(diào)節(jié)零點，于波長400～800 nm處掃描，經(jīng)測定后，選擇其最大吸收波長576 nm處為測定波長，見圖1。

圖1 二氧化硫測定紫外-可見圖譜

1.7 方法學(xué)考察

1.7.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及線性范圍考察 吸取0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、1.0 mL對照品溶液，分別置于25 mL帶塞比色管中，加入四氯汞鈉吸收液至10 mL，然后再加入1.0 mL氨基磺酸銨溶液、1.0 mL甲醛溶液及1.0 mL鹽酸副玫瑰苯胺溶液，搖勻，放置20 min，以空白調(diào)節(jié)零點，于波長576 nm處測定A值，并以平均吸光值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，含量M為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，y=0.0467X+0.0246，r=0.9994，在質(zhì)量為0.04～19.7 μg的范圍內(nèi)線性較好。

1.7.2 方法學(xué)考察結(jié)果 參照《中國藥典》2010年版一部方法學(xué)考察要求對二氧化硫含量測定的方法進行考察，符合定量要求，結(jié)果見表1。

表1 方法學(xué)考察結(jié)果

1.8 樣品含量測定

取適當(dāng)百合樣品，粉碎并過40目篩，取本品約5.0 g，精密稱定，以少量水潤濕，置于100 mL容量瓶中，然后加入20 mL四氯汞鈉吸收液，以水定容至刻度，搖勻，放置7 h，過濾后備用。

吸取供試品溶液2.0 mL，置于25 mL帶塞比色管中，加入四氯汞鈉吸收液至10 mL，然后再加入1.0 mL氨基磺酸銨溶液、1.0 mL甲醛溶液及1.0 mL鹽酸副玫瑰苯胺溶液，搖勻，放置20 min，以空白調(diào)節(jié)零點，于波長576 nm處測定A值，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算樣品含量，結(jié)果見表2。

表2 百合中二氧化硫含量（n=3）

9 小結(jié)與討論

本論文前期通過對有效成分的檢測，發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)曬干及曬干硫熏工藝對百合中總多糖的含量保留最大，含量集中在35%左右，而經(jīng)各種干燥工藝干燥后，百合干片中總多糖含量下降，但經(jīng)不同干燥工藝加工后百合干片總多糖含量相差不大，含量集中在25%左右，究其原因可能為多糖在一定溫度下會解聚，引起多糖結(jié)構(gòu)的改變，其中的五碳環(huán)或六碳環(huán)裂解導(dǎo)致多糖含量下降；而對于百合干片中總磷脂，總皂苷成分而言，所有干燥工藝與傳統(tǒng)硫熏工藝的含量均較穩(wěn)定，干燥工藝對其影響不大。

經(jīng)查閱，我國食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定，對于食品及藥材中，二氧化硫含量的規(guī)定，國家標(biāo)準(zhǔn)為：在國內(nèi)市場銷售，其含量必須≤50μg/g，而出口日韓等國的標(biāo)準(zhǔn)是≤30 μg/g，從實驗結(jié)果可以看出，經(jīng)傳統(tǒng)硫熏后的百合硫含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超標(biāo)，但是龍山地區(qū)，采用礁煤及以煤為燃料供熱風(fēng)循環(huán)的百合干片，二氧化硫含量也遠(yuǎn)遠(yuǎn)超標(biāo)含量是其他無煤工藝的45倍左右，其他無煤干燥工藝的二氧化硫含量相當(dāng)并且均低于7%，由此可見，以煤為燃料，烘房熱風(fēng)烤制的百合干片亦存在二氧化硫超標(biāo)的風(fēng)險，其安全性有待考究。

[1]中華人民共和國藥典2010年版(一部)[S].2010:123.

[2]童巧珍,周日寶,劉湘丹,等.藥用百合鱗葉中總DNA提取方法的研究[J].中國藥房,2008,(19)6:406-408.

[3]李天真.百合功能性因子的研究進展[J].食品科技,2007, (7):248-252.

[4]GB/T5009.34-2003.食品衛(wèi)生檢驗方法理化部分(一)[S].2003:267-273.