唐 菲，於建鵬，張 松

（湖北省黃石市第一醫(yī)院藥劑科，湖北 黃石 435001）

白芍為毛茛科植物芍藥的干燥根，具有養(yǎng)血斂陰等功效[1]。張仲景《傷寒論》中提及，白芍與桂枝配伍可以調(diào)和營(yíng)衛(wèi)，緩中和里[2]。近幾年，多于白芍的抗炎作用研究比較多，但仍有很多問題不清楚[3]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)角叉菜膠造模大鼠胸膜炎模型，檢測(cè)白芍與桂枝配伍的抗炎作用，并探討其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 100只昆明系小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量（30±5）g，動(dòng)物由錦州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（遼）2003～0007。

1.1.2 藥物及配制方法 白芍、桂枝均購(gòu)自廣州致信中藥飲片有限公司；彈性蛋白酶底物、磷酸二酯酶抑制劑、4-羥乙基哌嗪乙磺酸、角叉菜膠，均購(gòu)自Sigma公司；丙二醛（MDA）測(cè)定試劑盒，購(gòu)自南京建成生物工程研究所。白芍與桂枝飲片，加適量蒸餾水煎煮至沸騰，倒出煎液，放冷后，緩緩加入95%乙醇，4℃下放置24 h，取上清液。

賽多利斯電子分析天平、BIO-RAD 550型酶標(biāo)儀、紫外分光光度計(jì)、日立SCR20BA高速冷凍離心機(jī)。

1.2 方法

1.2.1 角叉菜膠大鼠胸膜炎造模及抗炎實(shí)驗(yàn)方法 100只SD大鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為5組：對(duì)照組（生理鹽水）、角叉菜膠組（1%角叉菜膠，0.05 mL）、白芍組（白芍，100 mg/kg）、桂枝組（桂枝，100 mg/kg）、配伍組（白芍與桂枝1 : 1，100 mg/kg）。各組給藥30 min后，分別注入0.05 mL角叉菜膠。造模5 h后，眼球采血檢測(cè)。

1.2.2 血漿丙二醛（MDA）含量的檢測(cè) 按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行具體操作，于532 nm波長(zhǎng)，檢測(cè)其吸光度。

1.2.3 血漿彈性蛋白酶含量檢測(cè) 血漿彈性蛋白酶的檢測(cè)方法，參考文獻(xiàn)進(jìn)行[4]。彈性蛋白酶標(biāo)準(zhǔn)品用PBS稀釋（μg/mL），做出標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算小鼠血漿彈性蛋白酶含量。

1.2.4 中性粒細(xì)胞環(huán)磷酸腺苷-磷酸二酯酶（CAMP-PDE）活性檢測(cè) 中性粒細(xì)胞Camp-PDE活性影響的檢測(cè)方法，參考張冰等的方法[5]。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠丙二醛（MDA）含量的變化

與對(duì)照組相比，角叉菜膠組丙二醛含量明顯升高（P＜0.05）。與角叉菜膠組相比，白芍組和桂枝組，抑制角叉菜膠組丙二醛含量的升高（P＜0.05）；白芍桂枝配伍組，明顯抑制角叉菜膠組丙二醛含量的升高（P＜0.01）。見表1和圖1。

2.2 各組小鼠彈性蛋白酶含量的變化

與對(duì)照組相比，角叉菜膠組彈性蛋白酶含量明顯升高（P＜0.05）。與角叉菜膠組相比，白芍組和桂枝組，抑制角叉菜膠組彈性蛋白酶含量的升高（P＜0.05）；白芍桂枝配伍組，明顯抑制角叉菜膠組彈性蛋白酶含量的升高（P＜0.01）。結(jié)果見圖2。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠丙二醛（MDA）含量的變化

與對(duì)照組相比，角叉菜膠組丙二醛含量明顯升高（P＜0.05）。與角叉菜膠組相比，白芍組和桂枝組，抑制角叉菜膠組丙二醛含量的升高（P＜0.05）；白芍桂枝配伍組，明顯抑制角叉菜膠組丙二醛含量的升高（P＜0.01）。見表1和圖1。

2.2 各組小鼠彈性蛋白酶含量的變化

與對(duì)照組相比，角叉菜膠組彈性蛋白酶含量明顯升高（P＜0.05）。與角叉菜膠組相比，白芍組和桂枝組，抑制角叉菜膠組彈性蛋白酶含量的升高（P＜0.05）；白芍桂枝配伍組，明顯抑制角叉菜膠組彈性蛋白酶含量的升高（P＜0.01）。結(jié)果見圖2。

2.3 各組對(duì)中性粒細(xì)胞CAMP-PDE活性的影響

3 討論

發(fā)生炎癥時(shí)，活化的白細(xì)胞促使活性氧自由基的生成，誘發(fā)組織細(xì)胞的脂質(zhì)過(guò)氧化。丙二醛作為脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程中的主要產(chǎn)物，丙二醛增多，可以造成細(xì)胞毒性，使細(xì)胞功能受損。而且，丙二醛含量，通過(guò)作為機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化程度的反應(yīng)指標(biāo)， 間接反應(yīng)細(xì)胞損傷的程度。本研究結(jié)果表明（見圖1），致炎因子（角叉菜膠）可以使機(jī)體產(chǎn)生過(guò)量的氧自由基。白芍抑制模型小鼠血漿MDA含量的升高，表明白芍的抗炎作用與此有關(guān)。桂枝也抑制模型小鼠血漿M D A含量的升高，表明桂枝的抗炎作用也與此有關(guān)。而且，白芍與桂枝（1 : 1）配伍，明顯抑制丙二醛含量的升高，可能抑制炎癥細(xì)胞CAMP-PDE活性，從而抑制炎癥細(xì)胞功能。彈性蛋白酶能夠較為準(zhǔn)確地反映該組織臟器損傷的嚴(yán)重程度[6]。本研究中結(jié)果表明（見圖2），白芍與桂枝配伍，與抑制中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的釋放有關(guān)。

表1 各組對(duì)中性粒細(xì)胞CAMP-PDE活性的影響（n=100）

圖1 各組小鼠的丙二醛含量變化

圖2 各組小鼠彈性蛋白酶含量變化

現(xiàn)代藥理學(xué)證實(shí)，桂枝能夠擴(kuò)張血管，改善血液循環(huán)。白芍的主要活性成分為芍藥苷，能夠增強(qiáng)心肌對(duì)缺血缺氧的耐受力作用。白芍與桂枝配伍，寒溫結(jié)合，具有啟發(fā)心陽(yáng)，以及益陰止汗的功效。本研究結(jié)果表明，白芍和桂枝配伍后，抗炎作用顯著增強(qiáng)，兩者具有協(xié)同作用。

[1]陳鏡宇,吳華勛,陳 尹,等.膠原性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜組織G蛋白偶聯(lián)受體激酶的表達(dá)及白芍總苷對(duì)其的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2008,24(6):715-717.

[2]林躍虹,李惠民,張曉民,等.白芍配伍桂枝抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志,2008,12(7):22-24.

[3]張大昌,葉海林,朱電波.白芍苦苷聯(lián)合來(lái)氟米特治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎40例療效觀察[J].蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2007,32(3):307.

[4]姜代勛,鞏忠福,陳益山,等.白芍注射液抗炎效果觀察[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志,2009,45(11):90-91.

[5]張 冰,姜代勛,陳 武,等.犬中性粒細(xì)胞磷酸二酯酶活性及清熱藥對(duì)其影響的觀察[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志,2009,45(2):85-87.

[6]陳桂敏,代林剛,賀 金.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)機(jī)制研究進(jìn)展[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2007,13(3):292.