邵建富 王敬瑄 鄭寶軍 馮俊偉

胃癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一，在我國胃癌多年來一直是死亡率最高的惡性腫瘤。浸潤轉(zhuǎn)移是腫瘤的最重要惡性特征之一，是胃癌治療失敗導致死亡的主要原因。本課題應用免疫組化技術檢測正常胃組織、良性病變組織和胃癌組織中粘附分子CD44v6和ICAM-1的表達水平，并觀察它們與臨床病理特征尤其是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關系，旨在探討各指標在胃癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移中的作用，為胃癌的治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標本 取自2008年6月至2011年6月河北省唐山市人民醫(yī)院普外科及河北省唐山工人醫(yī)院腫瘤外科手術標本及胃鏡活檢標本共138例，其中胃癌組織78例，胃良性病變組織30例，正常胃組織30例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組45例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組33例，術前均未進行化療或放療，臨床資料完整。

1.2 方法 將標本經(jīng)10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋切片。采用免疫組化S-P法，鼠抗人CD44v6、ICAM-1單克隆抗體、SP人組織檢測試劑盒均購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司，以PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 診斷標準 切片中陽性表現(xiàn)為細胞膜和胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒。按陽性細胞數(shù)＜5%，5% ～25%，26% ～50%，＞50%分為－、+、++、+++四級。

1.4 統(tǒng)計學分析 應用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料采用χ2檢驗或Fisher精確檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 正常胃組織、良性病變和胃癌組織中粘附分子CD44v6和ICAM-1的表達 CD44v6蛋白陽性表達位于細胞膜上，在細胞膜周圍呈連續(xù)的棕黃色線狀或帶狀分布(圖1、2)。在正常胃組織及胃良性病變中有少量表達，陽性率分別為3.33%和10.00%，差異無統(tǒng)計學意義(P ＞0.05)。在胃癌組織中CD44v6表達陽性率為78.21%，明顯高于正常胃組織及胃良性病變組織(P ＜0.01)。

ICAM-1蛋白的陽性表達位于胞膜或胞漿，表現(xiàn)為胞膜或胞漿內(nèi)出現(xiàn)彌漫棕黃色顆粒(圖3、4)。ICAM-1蛋白在正常胃組織中陽性率為0，在胃良性病變中有極少量表達，陽性率為3.33%，差異無統(tǒng)計學意義(P ＞0.05);在胃癌組織中表達陽性率為65.38%，明顯高于正常胃組織及胃良性病變組織(P＜0.01)。見表 1。

表1 不同組織中粘附分子CD44v6和ICAM-1蛋白表達水平比較

圖1 正常胃組織中CD44v6陰性表達(SP×200)

圖2 胃癌組織中CD44v6強陽性表達(SP×200)

圖3 正常胃組織中ICAM-1陰性表達(SP×100)

圖4 胃癌組織中ICAM-1強陽性表達(B)(SP×200)

2.2 胃癌組織中粘附分子CD44v6和ICAM-1的表達與臨床病理特征的關系 胃癌組織中粘附分子CD44v6蛋白表達陽性率在低分化組為87.72%，明顯高于高、中分化組的50.00%和53.33%(P ＜0.05)，在 T3、T4 組為 92.59%和 93.33%，明顯高于 T1、T2 組的53.85%和 65.22%(P ＜0.05)，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為82.22%，明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的72.73%(P ＜0.05)，在 TNM 分期Ⅲ、Ⅳ組為 88.00%和 94.12%，明顯高于Ⅰ、Ⅱ組的57.14%和68.18%(P ＜0.05)。在不同發(fā)生部位、大體類型及高和中分化組、T1和T2組、T3和T4組、Ⅰ和Ⅱ組、Ⅲ和Ⅳ組之間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

胃癌組織中粘附分子ICAM-1蛋白表達陽性率在T3、T4組為 81.48% 和 86.67%，明顯高于 T1、T2 組的 30.77% 和52.17%(P ＜0.05)，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為 77.78%，明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的48.48%(P ＜0.05)，在TNM分期Ⅲ、Ⅳ組為76.00%和88.24%，明顯高于Ⅰ、Ⅱ組的42.86%和50.00%(P＜0.05)。在不同發(fā)生部位、大體類型、分化程度及 T1和T2組、T3和T4組、Ⅰ和Ⅱ組、Ⅲ和Ⅳ組之間差異無統(tǒng)計學意義(P ＞0.05)。見表2。

表2 粘附分子CD44v6和ICAM-1蛋白在胃癌組織中的表達水平與臨床病理特征的關系 例

2.3 胃癌組織中粘附分子CD44v6和ICAM-1蛋白的表達檢測胃癌轉(zhuǎn)移 胃癌組織中粘附分子CD44v6蛋白陽性表達檢測胃癌轉(zhuǎn)移的敏感度為82.22%，特異度為27.27%;ICAM-1蛋白高表達檢測胃癌轉(zhuǎn)移的敏感度為77.78%，特異度為51.52%;兩項并聯(lián)后檢測胃癌轉(zhuǎn)移的敏感度為97.78%，較之測定單項指標明顯提高(P ＜0.05)，特異度為15.15%;串聯(lián)后檢測胃癌轉(zhuǎn)移的敏感度為20.00%，特異度提高到90.91%，與測定單項指標相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表3。

表3 胃癌組織中粘附分子CD44v6和ICAM-1蛋白的表達檢測胃癌轉(zhuǎn)移情況

3 討論

CD44v6是含V6變異體的CD44拼接變異體，它通過與透明質(zhì)酸(HA)結(jié)合，影響腫瘤細胞之間以及腫瘤細胞與基質(zhì)的結(jié)合能力，增強腫瘤細胞的運動能力，促進腫瘤細胞的浸潤和轉(zhuǎn)移。本研究顯示粘附分子CD44v6在正常胃組織和胃良性病變組織中有少量表達，胃癌組織中表達明顯增加。證實了CD44v6在介導細胞-細胞間和細胞-基質(zhì)間的粘附，參與細胞移動、腫瘤生長、浸潤轉(zhuǎn)移等過程中的作用，促進了胃癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移［1］。有研究發(fā)現(xiàn)CD44v6的表達與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關，是判斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預后評估的重要指標［2－4］。本研究結(jié)果顯示，粘附分子CD44v6與胃癌的分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期密切相關，探討其機制可能為胃癌CD44v6蛋白的過度表達一方面介導了瘤細胞與細胞外基質(zhì)的粘附，另一方面可能激活體細胞內(nèi)某些信號的傳導機制，使瘤細胞分泌蛋白水解酶，加速細胞外基質(zhì)的降解，有利于癌細胞的播散轉(zhuǎn)移。CD44v6陽性細胞更易與毛細血管后小靜脈中的高柱狀內(nèi)皮細胞結(jié)合，使腫瘤更易進入淋巴系統(tǒng)及循環(huán)系統(tǒng)，同時HA降解產(chǎn)物還能啟動血管的發(fā)生，這些都使CD44v6陽性腫瘤細胞獲得更強的浸潤轉(zhuǎn)移能力。CD44v6蛋白強表達意味著胃癌有較惡的生物學行為和病期較晚，患者預后差，對CD44v6蛋白強陽性表達的胃癌應采用更為積極有效的綜合治療措施。

腫瘤細胞逃逸機體免疫系統(tǒng)對其破壞是因為腫瘤細胞下調(diào)了靶抗原的活性，ICAM-1就是其中最重要的輔助性分子之一［5］。ICAM-1在腫瘤細胞和附近的基質(zhì)細胞中表達，憑借其膜外區(qū)的淋巴細胞功能相關蛋白-1(LFA-1)結(jié)合部位，與LFA-1組成一對配/受體，共同參與免疫、炎癥及腫瘤轉(zhuǎn)移等一系列重要生理和病理過程。本研究結(jié)果顯示，在正常胃組織中無1例表達，在胃良性病變中有極少量表達，在胃癌組織中陽性表達率明顯提高。提示ICAM-1高表達可能與胃癌的發(fā)生有關。有研究證實ICAM-1的表達與胃癌的生長、轉(zhuǎn)移及TNM分期存在相關性［6］。本研究結(jié)果顯示，ICAM-1與胃癌的浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期密切相關。與文獻報道的結(jié)果一致，提示ICAM-1可能是反映胃癌侵襲轉(zhuǎn)移潛能的一個有效生物學指標。其機制可能為胃癌細胞ICAM-1過度活化可促使過多可溶性ICAM-1進入血液，競爭性抑制了血液循環(huán)中ICAM-1依賴的主要組織相容性復合物-1(MHC-1類抗原)對游離癌細胞的免疫識別作用，從而使癌細胞逃避免疫監(jiān)視，更容易發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。但具體作用機制尚不十分清楚，進一步研究ICAM-1在胃癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及機制，將會對胃癌的發(fā)生發(fā)展有新的認知，從而開辟胃癌診斷治療的新思路。

本研究結(jié)果還顯示:胃癌組織中粘附分子CD44v6和ICAM-1并聯(lián)檢測對檢測胃癌轉(zhuǎn)移的敏感度為97.78%，較之測定單項指標明顯提高;串聯(lián)檢測對檢測胃癌轉(zhuǎn)移的特異度提高到90.91%，與測定單項指標相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。因此綜合分析上述兩指標，能夠更準確的判斷胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況，可為胃癌的隨訪、輔助治療、判斷預后等提供有價值的參考資料。

1 Yamaguchi A，Goi T，Yu J，etal.Expression of CD44v6 in advanced gastric cancer and its relationship to hematogenousmetastasis and long term prognosis.JSurg Oncol，2002，79:230-235.

2 Joo M，Lee HK，Kang YK.Expression of E-cadherin，beta catenin，CD44s and CD44v6 in gastric adenocarcinoma:relationship with lymph nodemetastasis.Anticancer Res，2003，23:1581-1588.

3 Chen JQ，Zhan WH，He YL，et al.Expression of heparanase gene，CD44v6，MMP-7and nm23 protein and their relationship with the invasion and metastasis of gastric carcinomas.World JGastroenterol，2004，10:776-782.

4 Vizoso FJ，F(xiàn)ernandez JC，Corte MD，etal.Expression and clin ical significance of CD44V5 and CD44v6 in resectable colorectal cancer.JCancer Res Clin Oncol，2004，130:679-686.

5 Mayer B，Lorenz G，Babic R.Expession of leukocyte cell adhesion molecules on gastric carcinomas:possible of LFA 3 expression in the development of distantmetastases.Int JCancer，1995，64:415.

6 倪海濱，黃介飛，毛振彪，等.胃癌患者細胞間粘附分子-1表達意義的研究.交通醫(yī)學，2003，17:134-135.