馬進峰，王一農(nóng)，金 銳

1)銀川市第一人民醫(yī)院骨科 銀川 750004

2)寧夏人民醫(yī)院骨二科 銀川 750010

3)銀川市婦幼保健院生殖中心 銀川 750001

近年來，中草藥在治療骨質(zhì)疏松癥方面引起了廣泛關(guān)注。枸杞多糖是寧夏特產(chǎn)枸杞子的有效提取成分，中醫(yī)學把骨質(zhì)疏松歸于“虛勞”、“骨瘺”等，經(jīng)常用含有枸杞的方劑治療[1]。Ⅰ型膠原蛋白約占骨組織有機成分的80% ～90%[2-3]，對維持骨結(jié)構(gòu)的完整及骨生物力學特性具有十分重要的意義。該研究建立骨質(zhì)疏松癥大鼠模型，觀察在枸杞多糖干預下模型大鼠血清Ⅰ型前膠原羧基端前肽(pro-collagen type Ⅰ carboxy-terminal propertied，PICP)、Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽(carboxyterminal cross linked telopeptide of type Ⅰ collagen，ICTP)及鈣、磷、鎂、堿性磷酸酶等骨轉(zhuǎn)換生化指標水平的變化，以探討枸杞多糖治療骨質(zhì)疏松癥的具體作用機制。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器 枸杞多糖由寧夏啟元藥業(yè)提供，批號H22023655;已烯雌酚由天津市金耀氨基酸有限公司提供，批號H12020536;生理鹽水由寧夏啟元國藥有限公司提供，批號100221-1;PICP和ICTP酶聯(lián)免疫檢測試劑盒為銀川易琳燊科貿(mào)有限公司進口分裝產(chǎn)品。BIO-RAD1575型洗板機、Model-680型酶標儀、DHP-9082型電熱恒溫培養(yǎng)箱、Olympus AU2700全自動生化分析儀、TD5A-WS臺式低速離心機等由寧夏醫(yī)科大學提供。

1.2 實驗分組與造模方法 3月齡雌性SD大鼠45只，體質(zhì)量280～230 g，由寧夏醫(yī)科大學實驗動物中心提供。隨機數(shù)字表法分為5組，每組9只。30 g/L戊巴比妥鈉1 mL/kg腹腔注射麻醉大鼠，假手術(shù)組切除卵巢周圍少量脂肪組織;余4組均切除雙側(cè)卵巢，參照文獻[2]的方法制作骨質(zhì)疏松大鼠模型，常規(guī)飼養(yǎng)2個月后開始藥物干預。假手術(shù)組和模型組按5 mL/(kg·d)灌胃生理鹽水，枸杞多糖低、高劑量組分別按10、40 mg/(kg·d)灌胃枸杞多糖，已烯雌酚組按0.1 mg/(kg·3 d)腹腔注射已烯雌酚。藥物干預時間為3個月。

1.3 檢測指標 干預3個月后，各組大鼠麻醉后取心臟血 5 mL，3500 r/min離心 15 min，取血清，ELISA法測定樣品中PICP和ICTP水平，利用全自動生化分析儀測定鈣、磷、鎂和堿性磷酸酶水平。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 11.0處理，所有數(shù)據(jù)先行正態(tài)性和方差齊性檢驗。5組大鼠血清PICP、ICTP及鈣、磷、鎂、堿性磷酸酶水平的比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗，檢驗水準 α =0.05。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠血清PICP和ICTP水平比較 見表1。

表1 各組大鼠血清PICP、ICTP水平的比較

2.2 各組大鼠血清鈣、磷、鎂、堿性磷酸酶水平比較見表2。

表2 各組大鼠血清鈣、磷、鎂、堿性磷酸酶水平比較

3 討論

PICP是在原膠原形成過程中由內(nèi)切酶從前膠原的羧基端切下的附加肽段，其血清水平主要反映Ⅰ型膠原合成速率及骨轉(zhuǎn)換情況，其水平升高提示Ⅰ型膠原的合成速率加快，骨轉(zhuǎn)換活躍。Tahtela等[4]的研究表明，在對絕經(jīng)后婦女應(yīng)用雙磷酸鹽治療的監(jiān)測過程中，PICP是最有效的監(jiān)測指標。ICTP是Ⅰ型膠原分解過程中釋放的惟一免疫性蛋白，與Ⅰ型膠原蛋白以1∶1的比例釋放入血，由腎臟清除，反映骨吸收情況，在其他組織中含量很少，可特異地反映骨的病變[5]，也是目前國際上公認的代表骨吸收的生化指標[6]。堿性磷酸酶在以往常被用作評價骨代謝，但由于它是同工酶，血清中的堿性磷酸酶只有50%來源于骨組織，因此其對骨組織代謝的反映缺乏特異性和敏感性[7]。血清鈣、鎂、磷作為衡量骨礦化的常用指標，可以間接反映骨組織的代謝情況[8]。

該研究結(jié)果顯示:枸杞多糖低、高劑量組血清PICP、ICTP水平均較模型組顯著下降，且高劑量組下降更為顯著，表明枸杞多糖可以有效降低骨質(zhì)疏松大鼠骨膠原的代謝水平，抑制其骨代謝的高轉(zhuǎn)換狀態(tài)，從而對骨質(zhì)疏松大鼠的骨代謝起調(diào)節(jié)作用。枸杞多糖低、高劑量組血清鈣和鎂水平的變化表明枸杞多糖同樣可以影響骨質(zhì)疏松大鼠血清鈣、鎂水平值，對骨的礦化過程也有一定的調(diào)節(jié)作用。

綜上所述，枸杞多糖可以顯著降低高轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松癥的高代謝狀態(tài)，從而對骨質(zhì)疏松癥具有一定的調(diào)節(jié)作用，為進一步研究枸杞多糖治療骨質(zhì)疏松癥的作用機制提供了理論依據(jù)。

[1]汪婷婷，羅維早.治療骨質(zhì)疏松的中藥研究進展[J].現(xiàn)代中藥研究及進展，2007，22(2):59

[2]Oxlund H，Mosekilde Li，Orttoft G.Reduced concentration ofcollagen reducible cross links in human trabecular bone with respect to age and osteoporosis[J].Bone，1996，19(5):479

[3]Garnero P，Sornay-Rendu E，Chapuy MC，et al.Increased bone turnover in late postmenopausal women is a major determinant of osteoporosis[J].J Bone Miner Res，1996，11(3):337

[4]Tahtela R，Seppanen J，Laitinen K，et al.Serum tartrate resistant acid phosphates 5b in monitoring bisphosphonate treatment with clordronate:a comparison with urinary N-terminal telopeptide of typeⅠcollagen and serum typeⅠprocollagen amino-terminal propertide[J].Osteoporosis Int 2005，16(9):1109

[5]Charles P，Mosekilde L，Risteli L，et al.Assessment of bone remodeling using biochemical indicators of typeⅠcollagens synthesis and degradation:relation to calcium dinetics[J].Bone Miner，1994，24(2):81

[6]魏雅楠，苗懿德，劉忠厚，等.骨代謝生化標志物的臨床進展:不同國家和地區(qū)絕經(jīng)前后女性骨代謝標志物參考值回顧分析[J].中國骨質(zhì)疏松雜志，2007，13(7):455

[7]汪建龍.枸杞多糖藥理作用的研究進展[J].時珍國醫(yī)國藥，2005，16(10):1032

[8]余萍萍，潘晶晶，閆璇，等.大鼠卵巢去勢骨質(zhì)疏松模型的制作[J].濱州醫(yī)學院學報，2010，33(5):353