任芳劉建峰張文娟

新生兒溶血病直抗結(jié)果探討

任芳①劉建峰①張文娟②

目的:探討直抗陰性和陽性結(jié)果與新生兒溶血病(HDN)病情的關(guān)系。方法:篩選確認(rèn)HDN患兒40例，根據(jù)直抗結(jié)果分為直抗陰性組(20例)和直抗陽性組(20例)，比較兩組患兒首次TBIL、DBIL、NSE結(jié)果。結(jié)果:兩組患兒TBIL、DBIL、NSE結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論:直抗陰性并不能排除HDN，且直抗結(jié)果不能用于區(qū)分病情嚴(yán)重程度。

新生兒溶血??； 直抗試驗

新生兒溶血病(Hemolytic Disease of the Newborn， HDN)是由于母嬰血型不合，妊娠期間母親血液中有較多的IgG類抗體，IgG抗體通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，發(fā)生同種免疫反應(yīng)導(dǎo)致胎兒或者新生兒的紅細(xì)胞破壞而引起溶血。HDN確診主要通過血清學(xué)實驗，其中確診HDN的新生兒直抗實驗理論上應(yīng)均為陽性，但是根據(jù)臨床上的結(jié)果統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)并非如此，特在此探討一下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取濱州市人民醫(yī)院就診患兒，根據(jù)《臨床診療指南-小兒內(nèi)科分冊》確診HDN[1]。選取母親為O型而患兒血型為A型或B型者，入院1～2 d內(nèi)檢查血常規(guī)(包括血紅蛋白、網(wǎng)織紅細(xì)胞或有核紅細(xì)胞)、血清總膽紅素、直接膽紅素，Coombs’試驗(抗人球蛋白試驗)等。

1.2 直抗游離放散實驗 長春博訊ABO標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞；長春博訊抗人球蛋白檢測卡(新生兒溶血病)；長春博訊新生兒ABO、RhD血型檢測卡(微柱凝膠)；長春博德酸放散試劑。生化檢測：Olympus 2700生化分析儀。

1.3 方法 放散實驗采用酸放散方法，其余實驗嚴(yán)格按照操作說明進(jìn)行。酸放散方法：(1)用生理鹽水洗滌待檢紅細(xì)胞4次，去除未結(jié)合的抗體。(2)取4體積的放散液A與1體積的放散液B混合均勻。(3)將1 ml待檢紅細(xì)胞與1 ml酸放散液混合均勻，室溫孵育1～2 min。(4)3000 r/min離心1 min。(5)立即將酸放散液轉(zhuǎn)移到另一支干凈的試管中，并加入紫紅色中和液調(diào)顏色至水粉色，使pH值接近中性，離心1 min取上清液。

2 結(jié)果

2.1 直抗陰性和直抗陽性兩組患兒微柱凝膠法結(jié)果(表1)，包括直抗陰性組20例，直抗陽性組20例。

表1 直抗陰性和直抗陽性兩組患兒微柱凝膠法結(jié)果 例

2.2 住院后1～2 d內(nèi)檢查血常規(guī)肝功等項目，對比兩組患兒首次膽紅素和NSE結(jié)果(表2、圖1、圖2、圖3)。通過比較，兩組患兒總膽紅素(TBIL)、直接膽紅素(DBIL)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)三項檢查結(jié)果差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，對比兩組患兒臨床癥狀和后續(xù)治療后病情變化，發(fā)現(xiàn)直抗結(jié)果對于確診為HDN的患兒病情程度并無意義。

表2 兩組患兒膽紅素和NSE結(jié)果比較(s)

表2 兩組患兒膽紅素和NSE結(jié)果比較(s)

組別 TBIL(μmol/L) DBIL(μmol/L) NSE(ng/ml)直抗陰性組 263.5±127.4 10.1±2.6 43.8±18.8直抗陽性組 256.5±115.2 10.6±4.3 44.6±19.9 P值 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05

圖1 兩組患兒TBIL結(jié)果

圖2 兩組患兒DBIL結(jié)果

圖3 兩組患兒NSE結(jié)果

3 討論

ABO血型抗體是“天然抗體”，多為IgM，而“免疫性抗體”常為IgG，IgG抗體，除可由紅細(xì)胞抗原刺激產(chǎn)生外，還可以由如血清、唾液、胃液、卵巢囊腫液、精液、羊水、汗液、尿液、淚液、膽汁等多種非特異性物質(zhì)中多種組織細(xì)胞及體液中存在的ABO血型物質(zhì)刺激產(chǎn)生，以及由于腸道寄生蟲感染，注射傷寒菌苗、破傷風(fēng)或白喉類毒素等非特異性刺激而引起免疫性抗體。A型和B型人血型抗體多為IgM，極少有IgG。IgM抗體分子量大不能通過胎盤，而O型母親體內(nèi)IgG抗體較多，免疫性抗A或抗B抗體(IgG)可通過胎盤，抗體進(jìn)入胎兒體內(nèi)后附著在胎兒紅細(xì)胞膜與對應(yīng)抗原發(fā)生免疫性溶血反應(yīng)，所以丈夫血型為A型、B型或AB型者，母親為O型者，容易引起HDN。而且由于存在上述因素均可使孕婦產(chǎn)生抗體，所以ABO溶血病可以在第一胎發(fā)病[2-3]。

直抗、游離、放散試驗對于輔助診斷HDN有重要的臨床價值。直接抗人球蛋白試驗為陰性，理論上應(yīng)該不需要再進(jìn)行游離和放散試驗。但是在臨床中發(fā)現(xiàn)并非如此，許多直抗陰性的患兒仍有許多確診為HDN。ABO新生兒溶血病(ABO HDN)的診斷常以直抗游離放散試驗結(jié)果而定，但是收到的檢驗報告中，直接抗人球蛋白試驗(DAT)常呈陰性結(jié)果，這給確診帶來一些困難。在本研究中，筆者對比直抗陰性和直抗陽性兩組患兒總膽紅素(TBIL)、直接膽紅素(DBIL)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)兩組數(shù)據(jù)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，說明直抗陰性實驗的患兒仍有可能發(fā)生HDN，不能被忽視。

HDN患兒黃疸易于生理性黃疸混淆，而且如搶救不及時，進(jìn)展迅速，嚴(yán)重者可致核黃疸，致后遺癥或死亡。而早期發(fā)現(xiàn)的HDN患兒根據(jù)《母嬰ABO血型不合溶血病臨床路徑》的標(biāo)準(zhǔn)治療[4]，如光療和換血療法等均可取得滿意的治療效果，并且無后遺癥。希望直抗檢測試驗?zāi)芴岣邔嶒炾栃月剩缤ㄟ^采用年輕、年老紅細(xì)胞分離方法提高DAT的敏感性，或者通過新的技術(shù)改良提高陽性率為臨床提供可信的實驗結(jié)果。

[1] 中華醫(yī)學(xué)會. 臨床診療指南：小兒內(nèi)科分冊[M].北京: 人民衛(wèi)生出版社，2005:1-476.

[2] 李勇，馬學(xué)嚴(yán).實用免疫血液學(xué)[M].第2版.西安:科學(xué)出版社，2006:562-570.

[3]盧磊，劉燕. 微柱凝膠技術(shù)在新生兒溶血病檢測中的應(yīng)用[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生，2010，48(13):38-39.

[4]衛(wèi)辦醫(yī)政.衛(wèi)生部辦公廳關(guān)于印發(fā)小兒內(nèi)科19個病種臨床路徑的通知[EB/OL]. http://www.ch-cp.org.cn/action-viewnews-itemid-149，2012-01-01.

The Discussion of the Direct Antiglobulin Experimental Results in HDN

/REN Fang， LIU Jian-Feng， ZHANG Wen-juan. //Medical Innovation of China，2012，9(22)：070-071

Objective: To investigate the difference of the direct antiglobulin negative results and the positive results for HDN.Method: Screened 40 cases of HDN children， and divided into the negative group (20 cases) and the positive group (20 cases) according to direct antiglobulin experimental results. Compared the first results of TBIL ，DBIL and NSE. Result： TBIL， DBIL and NSE results between the two groups of children were no significant difference(P＞0.05). Conclusion: The negative result of direct antiglobulin test can not use to exclude HDN， and can not be used to distinguish the severity of disease.

Hemolytic Disease of Newborns; Direct Antiglobulin Test

10.3969/j.issn.1674-4985.2012.22.042

2012-05-18) (本文編輯：車艷)

①山東省濱州市人民醫(yī)院 山東 濱州 256600

②山東省濱州市婦幼保健院

任芳

First-author’s address：Binzhou City People’s Hospital， Binzhou 256600，China