裴大為，王純潔，敖日格樂

（內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010018）

篦齒蒿（Neopallasia pectinata）即為櫛葉蒿，為一年生草本菊科植物櫛葉蒿的地上部分。其味苦性寒，具有清利肝膽、消炎、抗菌、抗病毒和止痛作用。其化學(xué)成分主要為植物甾醇和倍半萜類及其衍生物，其抗菌作用與所含的β－谷甾醇和倍半萜類及其衍生物有關(guān)［1－2］。本試驗測定了篦齒蒿的幾種提取物對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、沙門菌和鏈球菌的最低抑菌濃度（MIC）和最低殺菌濃度（MBC），以檢驗篦齒蒿提取物的體外抑菌效果。測定了篦齒蒿的幾種提取物對金黃色葡萄球菌和鏈球菌感染小鼠的保護率，檢驗體內(nèi)抗菌效果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物 篦齒蒿，從內(nèi)蒙古錫林郭勒盟草原采摘，陰干，粉碎，過40目篩。

1.1.2 實驗動物 純昆明種小鼠，體重20 g±2 g，雌雄兼用，購自內(nèi)蒙古大學(xué)實驗動物中心，許可證號SCXK（蒙2002－0001）。

1.1.3 菌株 大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌由課題組從呼和浩特地區(qū)奶牛場乳房炎患牛奶中分離并鑒定［3］，沙門菌由內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院微生物實驗室提供。

1.1.4 試劑 普通瓊脂、營養(yǎng)肉湯：廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，批號：20100622，均按常規(guī)方法配置。

1.2 方法

1.2.1 藥物的提取

1.2.1.1 篦齒蒿水提取物的制備 50 g粉碎后的篦齒蒿，加入200 mL蒸餾水浸泡1 h，煎煮15 min，過濾；殘渣再加入100 mL蒸餾水，煮沸后10 min，過濾，合并提取液，濃縮至50 mL，使?jié)舛冗_到1 g／mL。高壓滅菌，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.1.2 篦齒蒿醇提取物的制備 200 g粉碎后的篦齒蒿置于2 000 mL的燒瓶中，加入950 mL／L的乙醇800 mL，加熱回流提取，分別提取3次，每次1.5 h，過濾合并提取液，減壓濃縮成浸膏放入無菌瓶中4℃保存?zhèn)溆茫?］。將制備好的乙醇浸膏散于少量水中，以石油醚（1∶1）萃取3次，得石油醚萃取物；以同樣方法比例依次得到乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物組和最后留下的水母液［5－6］。減壓濃縮干燥，入無菌瓶中放置于4℃冰箱備用。

1.2.2 菌液制備 將經(jīng)過培養(yǎng)的單個菌落接種于營養(yǎng)肉湯中，于生化培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)18 h～24 h，用生理鹽水10倍系列稀釋，將與標準化濁度相當(dāng)?shù)淖鳛樵囼炗镁鷳乙?，存?℃冰箱備用［7］。

1.2.3 抗菌試驗

1.2.3.1 藥物的抑菌圈直徑的測定 采用牛津杯法，在無菌條件下，將0.5 mL菌液加入到普通營養(yǎng)瓊脂中，用玻璃涂布棒涂勻，為菌層。將牛津杯放入培養(yǎng)基中，分別加入1 g／mL的篦齒蒿水提物和醇提取物的萃取物各100μL，37℃培養(yǎng)24 h（鏈球菌48 h），測量其抑菌圈直徑，極度敏感為直徑大于15 mm，在10 mm～15 mm之間為高度敏感，8 mm～10 mm 為敏感，8 mm 以下為不敏感［8－9］。

1.2.3.2 藥物的最低抑菌濃度（MIC）及最低殺菌濃度（MBC）的測定 采用二倍稀釋法測定篦齒蒿水提物和萃取物組對4種菌的MIC。將5種藥液濃度分別配制成 1.0、0.5、0.25、0.125、0.062 5、0.031 25 g／mL，在上述試管中分別加入已制備好的菌液50μL，混勻，37℃培養(yǎng)24 h（鏈球菌48 h），以觀察未見細菌生長的藥物濃度為該藥液的MIC［10－11］；從未見細菌生長的試管中分別吸取50μL培養(yǎng)物接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)24 h（鏈球菌48 h），菌落數(shù)小于5個即為此藥液的MBC［12－13］。

1.2.3.3 體內(nèi)抑菌試驗 將試驗小鼠隨機分為14組，每組10只，分為兩批陰性對照組、陽性對照組、水提取物組、石油醚提取物組、乙酸乙酯提取物組和正丁醇提取物組，水母液組。陰性對照組灌服無菌水20 g／kg；陽性對照組灌服9 g／L環(huán)丙沙星藥液0.1g／kg；其他組灌服對應(yīng)藥液2 g／kg。各組小鼠每天灌藥2次，灌服7 d。末次給藥1 h后分為兩大組，金黃色葡萄球菌和鏈球菌組，給各組小鼠腹腔注射80%最低致死量（MLD）的對應(yīng)致病菌。觀察感染后3 d內(nèi)各組小鼠的死亡情況，保護率計算方法為：（陰性對照組小鼠死亡數(shù)－處理組死亡數(shù)）／陰性對照組小鼠死亡數(shù)×100%［14－15］。

2 結(jié)果

2.1 藥物抑菌圈直徑的測定結(jié)果

由表1可知，篦齒蒿的乙酸乙酯萃取物對沙門菌、鏈球菌敏感，對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌高度敏感，正丁醇萃取物對金黃色葡萄球菌和鏈球菌高度敏感，水母液對金黃色葡萄球菌和鏈球菌敏感；水提取物僅對金黃色葡萄球菌極度敏感，石油醚萃取物不敏感。

表1 篦齒蒿5種提取物對4種細菌的抑菌效果Table1 The bacteriostasis diameter of the Neopallasia pectinata extracts

2.2 藥物的MIC和MBC測定結(jié)果

由表2可知，篦齒蒿乙酸乙酯萃取物對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌的MIC和MBC分別達到0.062 5、0.062 5和0.125、0.125 g／mL，有顯著抑菌效果，對沙門菌、鏈球菌次之。正丁醇萃取物和水母液對金黃色葡萄球菌和鏈球菌有顯著抑菌效果；石油醚萃取物對金黃色葡萄球菌有顯著效果，對大腸埃希菌次之；水提取物只對金黃色葡萄球菌有顯著效果，其 MIC和 MBC分別達到0.031 25和0.062 5 g／mL。

表2 篦齒蒿5種提取物對4種細菌的MIC和MBCTable2 MIC and MBC of the Neopallasia pectinata extracts in vitrog／mL

2.3 體內(nèi)抑菌試驗結(jié)果

由表3可知，篦齒蒿提取物對鏈球菌引起的病變療效較差，試驗組小鼠死亡保護率均高于陰性對照組，其中篦齒蒿乙酸乙酯提取物對金黃色葡萄球菌感染小鼠的保護率為75%，與陽性對照組相當(dāng)。

表3 篦齒蒿5種提取物對2種細菌感染小鼠的保護率Table3 The protection rate of Neopallasia pectinata extracts in mice infected with Staphyloccocus aureus and Streptococcus

3 討論

從試驗數(shù)據(jù)可以看出，篦齒蒿的各種提取成分對4種常見致病菌均有一定程度的抑菌效果，尤其對金黃色葡萄球菌作用明顯，5種不同提取物對金黃色葡萄球菌的MIC都在0.0625 g／mL或以上。乙酸乙酯萃取物對4種菌的MIC大于或等于0.125 g／mL，正丁醇萃取物對金黃色葡萄球菌和鏈球菌的MIC和 MBC分別達到0.031 25、0.062 5 g／mL和0.062 5、0.125 g／mL，抑菌效果顯著，表明乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物是體外抗菌的主要活性部分，水母液和石油醚萃取物略有抑菌作用。篦齒蒿提取物的體內(nèi)抗菌試驗表明，對金黃色葡萄球菌引起的病變較敏感，篦齒蒿體內(nèi)活性成分主要集中在乙酸乙酯提取物中，其他成分活性小。

試驗表明篦齒蒿提取物的體內(nèi)抗菌效果與體外抑菌效果并不一致，藥物在體內(nèi)、體外對致病菌的療效不同可能與藥物在體內(nèi)的代謝或者藥物進入體內(nèi)后可能參與或增強機體免疫力，增加或改變對致病菌的作用方式有關(guān)，具體機理有待進一步研究。

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