劉匯，高曉晨

（1.吉林省延邊朝鮮族自治州食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 延吉 133000；2.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)研發(fā)中心，吉林 長(zhǎng)春 130117）

紫外分光光度法測(cè)定小兒化毒散中膽紅素的含量

劉匯1*，高曉晨2

（1.吉林省延邊朝鮮族自治州食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 延吉 133000；2.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)研發(fā)中心，吉林 長(zhǎng)春 130117）

目的：建立小兒化毒散中膽紅素的含量測(cè)定方法。方法：本實(shí)驗(yàn)采用紫外分光光度法測(cè)定膽紅素的含量，用重氮化試劑顯色，對(duì)樣品的提取檢測(cè)波長(zhǎng)為533 nm。結(jié)果：膽紅素濃度在0.010 3～0.050 0 mg·mL-1與吸收度呈良好的線性關(guān)系，r＝0.999 8（n＝5），平均回收率為99.33%，RSD＝0.54%（n＝6）。結(jié)論：該法簡(jiǎn)便、快速、穩(wěn)定、可靠，可用于測(cè)定小兒化毒散中膽紅素的含量。

小兒化毒散；人工牛黃；膽紅素；紫外分光光度法

小兒化毒散收載于 《中國(guó)藥典》2010年版一部，由大黃、冰片、人工牛黃、黃連、天花粉、珍珠、赤芍、川貝母等12味藥組成，具有清熱解毒，活血消腫功能，用于熱毒內(nèi)蘊(yùn)、毒邪未盡所致的口瘡腫痛、瘡瘍潰爛、煩躁口渴、大便秘結(jié)［1］。有報(bào)道對(duì)該藥中的大黃素以及芍藥苷進(jìn)行含量測(cè)定［2-3］，其中人工牛黃含有效成分膽紅素，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中未收載檢測(cè)方法，且未見(jiàn)測(cè)定小兒化毒散中膽紅素含量的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。為能更好地控制本制劑質(zhì)量，本文采用紫外-可見(jiàn)分光光度法（《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄V A）對(duì)膽紅素進(jìn)行含量測(cè)定［1］。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（美國(guó) Varian公司），BP211D型電子天平（德國(guó)Sartorius公司），電熱恒溫水浴鍋 （江蘇南通縣通海電器廠）。

1.2 試劑

膽紅素對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：10077-0101），水為蒸餾水，其他試劑均為分析純。小兒化毒散（廣西南珠制藥有限公司，批號(hào)：20100412，20100730，20100823，規(guī)格：0.6 g/瓶）。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取膽紅素對(duì)照品10 mg置100 mL棕色量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取5 mL置50 mL棕色量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得。

2.2 供試品溶液的制備［4］

取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，精密稱(chēng)取15 g裝量的樣品，置圓底燒瓶中，加三氯甲烷-乙醇（7∶3）混合溶液30mL、鹽酸1滴，搖勻，置水浴65℃中加熱回流30 min，放冷，過(guò)濾，至50 mL棕色量瓶中。容器用少量混合溶液洗滌，洗液并入同一量瓶中，加上述混合溶液至刻度，搖勻。精密量取上清液10 mL，置50 mL棕色量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得。

2.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

精密量取膽紅素對(duì)照品9 mL，置具塞試管中，精密加入重氮化溶液 （甲液：取對(duì)氨基苯磺酸0.1 g，加鹽酸1.5 mL與純化水適量使成100mL。乙液：取亞硝酸鈉0.5 g，用純化水溶解并稀釋至100 mL，置冰箱內(nèi)保存。臨用時(shí)取甲液10 mL、乙液0.3 mL，混勻）1 mL，搖勻，在15℃暗處放1 h，以相應(yīng)的試劑為空白，掃描，在400～800 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定吸收光譜。結(jié)果膽紅素對(duì)照品溶液在533 nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰，故以533 nm為測(cè)定波長(zhǎng)，見(jiàn)圖1。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取2.1項(xiàng)下對(duì)照品溶液1，2，3，4，5mL，置試管中，分別加乙醇至9 mL，按2.3項(xiàng)下自 “精密加入重氮化溶液”起依法操作，相應(yīng)試劑做空白，在533 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y＝6.441X+0.006 7，r＝0.999 8。膽紅素濃度在0.010 3～0.050 0 mg·mL-1與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

圖1 膽紅素的全波長(zhǎng)掃描圖

2.5 精密度試驗(yàn)

取供試品溶液，按2.3項(xiàng)依法重復(fù)測(cè)定6次吸光度，計(jì)算RSD＝1.17%。結(jié)果表明，本方法精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，分別于配制后0，3，6，9 h，按上述的方法測(cè)定吸光度，計(jì)算RSD＝1.08%，結(jié)果供試品溶液在9 h之內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

分別精密吸取供試品溶液6份，按2.3項(xiàng)下操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算RSD＝0.37%。結(jié)果表明，此方法有較好的重現(xiàn)性。

2.8 回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取樣品細(xì)粉約1瓶總量，置圓底燒瓶中，按2.2項(xiàng)下方法制備溶液6份，加膽紅素對(duì)照品0.05 mg，在533 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，計(jì)算膽紅素平均回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.9 樣品測(cè)定

取3批小兒化毒散（批號(hào)：20100412，20100730，20100823），每批一瓶樣品，按2.2項(xiàng)下方法平行制備3份供試品溶液，根據(jù)測(cè)定出的吸光度和標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)定含量，結(jié)果平均含量分別為41.7，42.3，42.1μg/瓶。

表1 小兒化毒散中膽紅素回收率試驗(yàn)

3 討論

按方法同時(shí)制備空白樣品溶液，在400～800 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，無(wú)紫外吸收，不干擾膽紅素的含量測(cè)定，故選擇533 nm波長(zhǎng)作為膽紅素含量測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)是合理的。

小兒化毒散的原標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)人工牛黃的含量測(cè)定，不能完整地控制該藥品的質(zhì)量。經(jīng)多次測(cè)定，小兒化毒散中膽紅素的含量限度不低于41.4μg/瓶。通過(guò)上述方法學(xué)考察，建立了小兒化毒散中膽紅素的含量測(cè)定方法，該方法簡(jiǎn)便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性、回收率好，能有效控制小兒化毒散中人工牛黃的質(zhì)量。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［S］.一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：478，附錄 30.

［2］黃澤中，何利華，尹雄章.小兒化毒散中芍藥苷含量測(cè)定［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，31（7）：916-917.

［3］孫新建，李志浩，吳進(jìn)，等.RP-HPLC測(cè)定小兒化毒散中大黃素和大黃酚的含量［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，16（10）：93-95.

［4］吳春敏，謝敏.紫外分光光度法測(cè)定片仔癀中膽紅素的含量［J］.中成藥，1995，17（6）：14-15.

UV Spectrophotometry Determ ination of Bilirubin in Xiao’er Huadu Powder

LIU Hui1，GAO Xiao-chen2
（1.Institute of Food and Drug，Yanbian Korean Autonomous Prefecture，Yanji133000，China；2.Development Center of Traditional Chinese Medicine and Bioengineering，Changchun University of Chinese Medicine，Changchun130117，China）

Objective：A method of determination of bilirubin in Xiao’er Huadu Powder.Methods：The content of Bilirubin in Bovis Calculus Artifactus was determined by UV spectrophotometry.The detection wavelength was 533 nm.Results：The linear ranged over 0.010 3～0.050 0 mg·mL-1（r＝0.999 8，n＝5）.The average recovery was 99.33%（RSD＝0.54%，n＝6）.Conclusion：The methods were proved to be simple，precise sensitive and reproducible.It can be used for quality control of Xiao’er Huadu Powder.

Xiao’er Huadu Powder；Bovis Calculus Artifactus；Bilirubin；UV spectrophotometry

2012-11-29）

*［通訊作者］劉匯，Tel：（0433）2265069，E-mail：liuhuiw5＠hotmail.com