何春年，肖蘇萍，田壯，曾燕，趙潤(rùn)懷，彭勇，肖培根*

（1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193；2.國(guó)家教育部中草藥物質(zhì)基礎(chǔ)與資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193；3.中國(guó)藥材公司，北京 100195）

不同干燥方法對(duì)黃芩葉中黃酮類(lèi)成分的影響研究△

何春年1，2，肖蘇萍3，田壯3，曾燕3，趙潤(rùn)懷3，彭勇1，2，肖培根1，2*

（1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193；2.國(guó)家教育部中草藥物質(zhì)基礎(chǔ)與資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193；3.中國(guó)藥材公司，北京 100195）

目的：比較不同干燥方法對(duì)黃芩葉有效成分含量的影響，優(yōu)選黃芩葉的最佳干燥方式。方法：以比色法測(cè)定總黃酮含量，HPLC法測(cè)定6種主要黃酮成分：野黃芩苷、黃芩苷、漢黃芩苷、芹菜素、黃芩素和漢黃芩素的含量，比較自然晾曬、室內(nèi)通風(fēng)陰干、烘箱鼓風(fēng)干燥、真空干燥和微波干燥等5種干燥方法處理黃芩葉的優(yōu)劣。結(jié)果：采用微波干燥的方式黃芩葉總黃酮含量最高，含量23.00%；野黃芩苷在黃芩葉中含量較高，其中以微波干燥最高（3.62%），真空干燥最低（2.77%）；微波連續(xù)加熱會(huì)導(dǎo)致總黃酮和野黃芩苷含量下降。結(jié)論：從成本、有效成分含量和實(shí)際操作綜合分析，黃芩葉應(yīng)采用自然曬干或自然晾干的方法。

黃芩葉；黃芩茶；干燥方法；總黃酮；野黃芩苷

黃芩茶為唇形科黃芩屬黃芩Scutellaria baicalensis、并頭 黃 芩S.scordifolia、滇 黃 芩［1］S.amoena和粘毛黃芩［2］S.viscidula的地上部分莖和葉加工而成，在我國(guó)北方各省及云南部分地區(qū)較為流行，已有近千年的歷史。具有清熱燥濕，瀉火解毒，消炎、促消化等作用，是民間用來(lái)消暑、待客的主要飲品，又稱(chēng)為黃芩茶、黃金茶等［3］。

黃芩茶傳統(tǒng)的加工方式是直接曬干備用，或用蒸籠蒸、晾數(shù)次。隨著現(xiàn)代人們對(duì)黃芩茶的關(guān)注，這種莖葉不分，外觀較差，飲用不方便的缺點(diǎn)需要改進(jìn)，以利于黃芩茶的商業(yè)化推廣。前人研究表明，黃芩茶具有保護(hù)心肌缺血——再灌注損傷、肝保護(hù)、解熱鎮(zhèn)痛、抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化、免疫增強(qiáng)、中樞神經(jīng)保護(hù)、降糖、降血脂和抗腫瘤等作用，其主要有效成分為黃酮類(lèi)成分［4-7］。本文以黃芩中主要黃酮類(lèi)成分為測(cè)定對(duì)象，比較不同干燥方式對(duì)黃芩茶中主要黃酮成分的含量和外觀的影響，為黃芩資源的合理利用和黃芩茶的開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 材料、儀器與試藥

1.1 材料

黃芩葉來(lái)源系北京市門(mén)頭溝區(qū)齋堂村黃芩種植基地的黃芩莖頂尖嫩葉，2012年6月上旬采摘，經(jīng)中國(guó)藥材集團(tuán)承德藥材有限責(zé)任公司張學(xué)文教授鑒定為黃芩Scutellaria baicalensisGeorgi的嫩葉。

1.2 儀器與試藥

DGG-9070型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司），DZF-6020型真空干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司），WD700G型微波爐（格蘭仕集團(tuán)），UV-2550型紫外分光光度計(jì)（日本島津公司），Agilent1200高效液相色譜儀（G1322A型在線脫氣機(jī)、G1311A型液相泵、G1329A自動(dòng)進(jìn)樣器、G1316A柱溫箱、G1315B型DAD檢測(cè)器、Agilent色譜工作站）；梅特勒-托利多電子天平（AL204）；ULVAC薄膜真空泵（DTC-21）；C9860A超聲波清洗器（上海杰恩普超聲設(shè)備有限公司）。

野黃芩苷（1）、黃芩苷（2）、漢黃芩苷（3）、芹菜素（4）、黃芩素（5）和漢黃芩素（6）對(duì)照品（購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所）。甲醇、乙腈為色譜純（Fisher Scientific）；甲酸（CNW公司，德國(guó)）；純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)）；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 干燥方法

取鮮黃芩葉5份，每份精密稱(chēng)量100 g，攤開(kāi)，分別進(jìn)行自然晾曬、室內(nèi)通風(fēng)陰干、烘箱鼓風(fēng)干燥、真空干燥和微波干燥。干燥指標(biāo)：不同干燥方式均達(dá)到葉片質(zhì)硬而脆，相互之間重量差異在1 g以?xún)?nèi)。將樣品用粉碎機(jī)粉碎，過(guò)60目篩，備用。

2.1.1 自然曬干 將鮮黃芩葉置室外自然晾曬。

2.1.2 自然陰干 將鮮黃芩葉置室內(nèi)陰涼通風(fēng)處自然陰干。

2.1.3 烘箱干燥 根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道［8］，選擇60℃作為干燥溫度，同時(shí)為了加快干燥效率，采用鼓風(fēng)干燥。

2.1.4 真空干燥 為了與烘干方法對(duì)比，也選擇60℃作為干燥溫度，減壓真空干燥，當(dāng)見(jiàn)水蒸汽較多時(shí)打開(kāi)擦干，然后再繼續(xù)減壓干燥。

2.1.5 微波干燥 將鮮黃芩葉置于微波爐內(nèi)，于700 W下干燥4 min，每1 min取出翻動(dòng)，以釋放熱量。另外，為了考察微波時(shí)間對(duì)黃酮有效成分含量的影響，分別進(jìn)行連續(xù)2、3、4和5 min微波加熱處理。

2.2 總黃酮含量測(cè)定方法［9］

2.2.1 對(duì)照品溶液的配置 精密稱(chēng)取野黃芩苷約5.0 mg，置10 mL量瓶中，加70%的乙醇溶解，并定容至刻度，搖勻，即得對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取干燥的黃芩葉樣品，粉碎、過(guò)60目篩，精密稱(chēng)取粉末約0.5 g，加入50 mL 70%乙醇，精密稱(chēng)定，超聲提取30 min，放置室溫，精密稱(chēng)定，用70%乙醇補(bǔ)足減少的重量，0.45 μm濾膜過(guò)濾，作為供試品溶液。

2.2.3 最大吸收波長(zhǎng)的確定 取對(duì)照品溶液和供試品溶液適量，分別加入5%的AlCl3溶液5 mL，用70%乙醇定容到10 mL刻度，搖勻，室溫放置40 min，在紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上190～450 nm范圍進(jìn)行掃描，隨行空白。結(jié)果表明，兩者峰型相似，在299 nm處均有最大吸收（見(jiàn)圖1），故選擇299nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品溶液（102.8 μg·mL-1）0.2、0.4、0.8、1.6、2.0 mL，置10 mL量瓶中，加5%的AlCl3溶液5 mL，用70%乙醇定容到10 mL刻度，搖勻，室溫放置40 min，299 nm處測(cè)定吸收度。以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y＝0.042X+0.011 7（r＝0.999 9），線性范圍：20.56～200.56μg·mL-1。

2.2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一份樣品（微波干燥）6份，按供試品溶液制備方法制備，按上述測(cè)定方法測(cè)定樣品中總黃酮含量，得RSD＝2.87%。表明此方法的重復(fù)性良好。

圖1 野黃芩苷（A）和黃芩葉樣品（B）譜掃描圖

2.2.6 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的黃芩葉樣品6份，精密稱(chēng)定，每份約0.5 g，分別加入野黃芩苷對(duì)照品溶液適量，按照上述制備供試品溶液制備方法進(jìn)行制備，測(cè)定吸收度，計(jì)算平均加樣回收率為97.64%，RSD為3.02%。

2.2.7 樣品測(cè)定 分別精密稱(chēng)取5種干燥方法樣品約0.5 g，按照供試品溶液制備方法進(jìn)行制備，取樣品溶液100μL，加5%的AlCl3溶液5 mL，用70%乙醇定容到10 mL刻度，搖勻，室溫放置40 min，299 nm處測(cè)定總黃酮。結(jié)果見(jiàn)表2和表3。

2.3 黃酮成分含量測(cè)定方法

2.3.1 色譜條件 參照作者前期研究方法［10］，即：YMC-pack ODS-A色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇（A）、乙腈（B）和0.1%甲酸水（C），梯度洗脫，線性洗脫程序?yàn)椋?～60 min，A-B-C（15∶5∶80，v/v）到 A-B-C（80∶10∶10，v/v）。每針進(jìn)樣分析完畢用初始流動(dòng)相平衡15 min再進(jìn)行下一針?lè)治?。流速?.0 mL·min-1；柱溫30℃；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為278 nm；進(jìn)樣體積為10μL。用安捷倫工作站Chemstation software（B.02.01）采集數(shù)據(jù)并分析。

2.3.2 供試品溶液的制備 同 “2.2.2”項(xiàng)下。

2.3.3 對(duì)照品溶液的制備 分別精密稱(chēng)取6種對(duì)照品適量，置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，混合均勻，既得，6種對(duì)照品色譜圖見(jiàn)圖2。

2.3.4 線性關(guān)系的考察 分別精密量取各對(duì)照品溶液適量，置10 mL量瓶中，配成混合對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，再分別量取混合對(duì)照品儲(chǔ)備溶液適量，加甲醇稀釋成一系列不同濃度的混合對(duì)照品溶液，取10μL進(jìn)樣分析。以峰面積值和進(jìn)樣對(duì)照品濃度進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見(jiàn)表1，結(jié)果表明各對(duì)照品在線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖2 6個(gè)對(duì)照品的液相色譜圖

表1 6種對(duì)照品的線性關(guān)系

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取 “2.2.5”項(xiàng)下的供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定各對(duì)照品的含量，RSD值分別為：0.65%（1）、1.03%（2）、0.86%（4）和1.59%（6），漢黃芩苷（3）和黃芩素（5）因未檢出，故沒(méi)有計(jì)算RSD值。表明此方法的重復(fù)性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知含量的黃芩葉樣品6份，每份約0.5 g。分別加入適量的6種對(duì)照品溶液。按供試品溶液制備方法進(jìn)行，依上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率和 RSD值：98.94%（1，0.93%）、97.50% （2，1.52%）、97.38% （3，2.15%）、98.03% （4，2.61%）、97.84% （5，1.13%）和96.71%（6，2.58%）。

2.3.7 樣品含量測(cè)定 分別精密稱(chēng)取5種干燥方法樣品約0.5 g，按照 “2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法進(jìn)行處理。測(cè)定樣品6種黃酮成分的含量，結(jié)果見(jiàn)表2和表3，代表性樣品色譜圖見(jiàn)圖3。

圖3 不同干燥方法的黃芩葉色譜圖

表2 不同干燥方法黃芩葉中黃酮類(lèi)有效成分的含量（n＝3）/mg·g-1

表3 不同微波時(shí)間黃芩葉中黃酮類(lèi)有效成分的含量（n＝3）/mg·g-1

從表2結(jié)果可以看出，微波干燥總黃酮含量最高，自然陰干最低，其他3種干燥方式相差無(wú)幾；野黃芩苷在黃芩葉中含量較高，其中以微波干燥最高，真空干燥最低；黃芩苷含量也是以微波干燥最高，真空干燥最低；漢黃芩苷在5中干燥方式的樣品中均未檢測(cè)到；芹菜素以真空干燥最高，微波和曬干最低；黃芩素僅在真空干燥中檢測(cè)到；漢黃芩素含量以烘干和曬干較低。

5種干燥方法中，自然陰干耗時(shí)較長(zhǎng)（3 d），自然曬干也較慢（1.5 d），且這2中干燥方法受天氣影響最大，特別是曬干；由于本實(shí)驗(yàn)采用鼓風(fēng)烘干的方式，以及真空干燥不能及時(shí)去除水蒸汽的原因，使得烘干（3 h）比真空（6 h）干燥更快；微波干燥方式最快，只需間斷加熱4 min，但需要及時(shí)取出散熱。微波連續(xù)加熱2 min即可使黃芩葉達(dá)到干燥狀態(tài)，但連續(xù)微波會(huì)使樣品內(nèi)部溫度過(guò)高，總黃酮含量呈下降趨勢(shì)，野黃芩苷含量也隨著微波時(shí)間延長(zhǎng)而含量下降，但芹菜素和漢黃芩素含量卻有升高的趨勢(shì)（見(jiàn)表3）。

從經(jīng)濟(jì)成本和實(shí)際操作來(lái)看，自然陰干和曬干無(wú)需儀器設(shè)備，最經(jīng)濟(jì)，烘箱干燥真空干燥和微波干燥需要一定的儀器設(shè)備，投入成本較高，而且實(shí)際生產(chǎn)中，難以同時(shí)干燥大量樣品，規(guī)?；a(chǎn)受限。

3 討論

黃芩茶作為黃芩S.baicalensis地上部分的利用相對(duì)其根部做黃芩藥材來(lái)說(shuō)利用較少，過(guò)去，種植黃芩主要取其根部，地上部分沒(méi)有得到充分利用?，F(xiàn)在，黃芩茶已經(jīng)作為商品生產(chǎn)和銷(xiāo)售，黃芩莖葉也開(kāi)發(fā)出藥品，因此黃芩地上部分具有較好的利用前景。但是作為一種茶來(lái)生產(chǎn)銷(xiāo)售，卻沒(méi)有規(guī)范化的生產(chǎn)工藝，其質(zhì)量也難以得到保證，因而本文對(duì)黃芩茶的干燥工藝研究，為黃芩茶規(guī)范化生產(chǎn)工藝奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

本文比較了5種干燥工藝，從有效成分含量角度來(lái)比較，優(yōu)選順序?yàn)椋何⒉ǎ菊婵铡莺娓伞輹窀桑娟幐?，但需指出的是，這5種干燥方法對(duì)總黃酮含量影響并不是特別明顯，而對(duì)具體黃酮成分的影響稍大一些，因而不排除黃酮成分之間有相互轉(zhuǎn)化的可能。

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國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局要求加強(qiáng)含牛黃等藥材中成藥品種監(jiān)督管理

為加強(qiáng)含牛黃等藥材中成藥品種監(jiān)督管理，嚴(yán)格處方投料生產(chǎn)，日前，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)出通知，就有關(guān)事項(xiàng)做出明確。

通知指出，對(duì)于國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)處方中含牛黃的臨床急重病癥用藥品種及其他劑型或規(guī)格，可以將處方中的牛黃固定以培植牛黃或體外培育牛黃等量替代投料使用，但不得使用人工牛黃替代。通知附件所列品種及其他劑型或規(guī)格的現(xiàn)行藥品標(biāo)準(zhǔn)中處方項(xiàng)下為人工牛黃的，相關(guān)生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按修訂藥品標(biāo)準(zhǔn)的程序和要求于2013年12月31日前提出補(bǔ)充申請(qǐng)，并由國(guó)家藥典委員會(huì)審定。自國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)之日起，相關(guān)生產(chǎn)企業(yè)不得繼續(xù)使用人工牛黃投料生產(chǎn)。

通知明確，允許使用天然麝香投料生產(chǎn)的品種及企業(yè)，應(yīng)符合國(guó)家林業(yè)局、國(guó)家工商行政管理總局和國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局的相關(guān)要求，并按要求進(jìn)行專(zhuān)用標(biāo)識(shí)管理。凡生產(chǎn)中使用培植牛黃、體外培育牛黃、人工牛黃替代牛黃，以及使用人工麝香替代天然麝香的品種，其說(shuō)明書(shū)及標(biāo)簽中 【成份】項(xiàng)下應(yīng)準(zhǔn)確標(biāo)明培植牛黃、體外培育牛黃、人工牛黃或人工麝香；涉及說(shuō)明書(shū)及標(biāo)簽變更的，應(yīng)按要求向所在地省 （區(qū)、市）食品藥品監(jiān)督管理部門(mén)備案。

通知要求，藥品生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)嚴(yán)格按照藥品標(biāo)準(zhǔn)投料生產(chǎn)，嚴(yán)禁擅自以其他藥材或原料等替代。各省 （區(qū)、市）食品藥品監(jiān)督管理部門(mén)應(yīng)將上述要求及時(shí)通知本行政區(qū)域內(nèi)相關(guān)藥品生產(chǎn)企業(yè)，并督促做好有關(guān)工作，切實(shí)加強(qiáng)監(jiān)督管理。

（信息來(lái)源：國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局網(wǎng)）

The Effect of Different Drying Methods on Contents of Flavonoids of Scutellaria baicalensis Georgi Leaves

HE Chun-nian1，2，XIAO Su-ping3，TIAN Zhuang3，ZENG Yan3，ZHAO Run-huai3，PENG Yong1，2，XIAO Pei-gen1，2
（1.Institute of Medicinal Plant Development，Chinese Academy of Medical Science，Peking Union Medical College，Beijing100193，China；2.Key Laboratory of Bioactive Substances and Resources Utilization of Chinese Herbal Medicine，Ministry of Education，Beijing100193，China；3.China National Corporation of Traditional＆Herbal Medicine Beijing100195，China）

Objective：To compare the effect of different drying methods on contents of active ingredients from leaves ofScutellaria baicalensis，and find out optimum dryingmethod forS.baicalensis.Methods：The leaves ofS.baicalensiswas processed by five dryingmethods including natural drying in the sun，natural drying in the shade，oven drying under 60℃，vacuum drying and microwave drying.Total flavonoids and 6 flavonoids constituents including scutellarin，baicalin，wogonoside，apigenin，baicalein and wogonin were determined by using UV and HPLCmethod，respectively.Results：The content of total flavonoidswas the highest（average contentwas23.00%）bymicrowave drying.The content of Scutellarin was higher in leaves ofS.baicalensis，which was the highest by microwave drying（3.62%）and was the lowest by vacuum drying（2.77%），respectively.However，the contents of total flavonoids and scutellarin were decreased by microwave in long time heating.Conclusion：On the basis of comprehensively analyzing，the content of flavonoids and actual operation，natural dry in the sun or natural air-dry method should be used in drying the leaves ofS.baicalensis.

Leaves ofScutellaria baicalensisGeorgi；Skullcap tea；Dryingmethods；Total flavonoids；Scutellarin

2012-08-30）

中藥材產(chǎn)地加工技術(shù)平臺(tái)子課題-河北道地藥材黃芩產(chǎn)地加工技術(shù)示范研究［（工信部消費(fèi)（2011）340）］；中醫(yī)藥行業(yè)科研專(zhuān)項(xiàng)——黃芩道地藥材特色栽培及加工技術(shù)整理、規(guī)范及應(yīng)用（201107009）

*［通訊作者］肖培根，Tel：（010）62894462，E-mail：xiaopg＠public.bta.net.cn