徐運杰

(荊州湘大駱駝飼料有限公司，湖北荊州434000)

飼料霉菌毒素污染是非常危險的，除了直接影響動物機體的健康外，毒素還可以轉(zhuǎn)移到奶、肉或其它動物副產(chǎn)品中，從而間接影響了人類的健康，如致癌、致畸、致突變等。赭曲霉毒素是由曲霉屬及青霉屬中的某些菌種產(chǎn)生的一類結(jié)構(gòu)相似的有毒次生代謝產(chǎn)物(見圖1、見表1)，其中以赭曲霉毒素A(OTA)的毒性最強，在高溫潮濕的熱帶地區(qū)主要由赭曲霉(A.ochraceus)、碳黑曲霉(A.carbonarius)和黑曲霉(A.niger)產(chǎn)生，而溫帶地區(qū)以Penicillium verrucosum為主要的產(chǎn)毒菌株，它也是青霉屬中唯一能產(chǎn)生赭曲霉毒素的青霉菌，此外，A.alliaceus、A.ostianus、A.sclerotiorum、A.sulphureus、A.melleus、A.petrakii、A.glaucus、A.awamori、A.foetidus 等 也能代謝產(chǎn)生OTA（J.varga等，1996）。本文主要論述了OTA對豬生產(chǎn)的影響。

1 赭曲霉毒素A的毒性

赭曲霉毒素A具有強有力的毒性，它可感染大麥、燕麥、黑麥、小麥及其它谷物，其中以大麥的可能性最大。OTA的毒性與黃曲霉毒素相當，腎是其主要的靶器官，幾乎對所有的動物都有腎毒性，尤其是人類。OTA通過破壞腎小管上皮細胞，從而導(dǎo)致血清尿素氮（BUN）升高，形成糠尿或蛋白尿；實際生產(chǎn)中，可通過檢測尿液中天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、乳酸脫氫酶（LDH）和異檸檬酸脫氨酶（ICDH）的濃度來判定腎毒性的強弱。除腎毒性外，OTA還有一定的肝毒性、免疫抑制、致畸和致癌性；OTA還具有遺傳毒性，可使細胞中染色體斷裂增加（Coronel等，2010）。OTA通過多種方式干擾細胞正常生理功能，這主要與苯基丙氨酸代謝的酶有關(guān)，能抑制參與苯基丙氨酸－tRNA復(fù)合物合成的酶的活性（Marquardt等，1992)。同時還可抑制線粒體中ATP的產(chǎn)生（Meisner等，1981），促進脂質(zhì)過氧化和誘導(dǎo)缺鐵性貧血（Rahimtula等，1988）。赭曲霉毒素還可代謝到動物的血液、乳汁和其它組織中（Marquardt等，1992），從而通過生物鏈效應(yīng)間接損害人類健康。據(jù)報道，一種名叫地方性巴爾干腎病的人類疾病就與赭曲霉毒素有關(guān)（Krogh，1987）。Elissalde等（1994）和 Gentles等（1999）研究了 OTA 對肉雞的影響，結(jié)果表明，與對照組比較，OTA降低了肉雞的采食量和體重，誘導(dǎo)血液白細胞減少，增加了肝、腎、嗉囔、脾臟、胰腺和前胃的相對重量，使血清中尿酸和甘油三酯濃度增加，總蛋白、白蛋白和膽固醇濃度降低，但對心臟和法氏囔的相對重量沒有影響。早在1982年，Oscar等用小白鼠研究了OTA的代謝，圖1和表2分別是OTA結(jié)構(gòu)圖及其在白鼠尿液和糞便中鑒定出的代謝產(chǎn)物。

表1 赭曲霉毒素的自然存在形式

表2 赭曲霉毒素A的代謝產(chǎn)物

由于霉菌毒素種類多，其中以黃曲霉毒素、赤霉烯酮、嘔吐毒素和赭曲霉毒素等最為常見。養(yǎng)殖過程中，需要通過仔細觀察動物中毒癥狀來有效判定是何種霉菌毒素中毒。除胃腸道黏膜壞死、腹瀉、采食量下降等共同特征外，黃曲霉毒素B1主要是肝毒性，中毒豬主要表現(xiàn)為肝腫大、肝小葉中心壞死、肝纖維變性、膽管增生、黃疸和出血性腸炎，BUN降低；OTA中毒就沒有這些癥狀，豬OTA中毒最主要的病理特征就是腎臟病變，腎小管（主要是近曲小管）擴張，上皮細胞壞死，多尿和BUN升高；豬赤霉烯酮中毒則主要表現(xiàn)為外陰紅腫和假發(fā)情。但實際生產(chǎn)中，飼料霉菌毒素污染往往是以某種毒素為主的混合感染，因此，當動物中毒時，經(jīng)常表現(xiàn)出綜合癥狀。

2 赭曲霉毒素A的熱穩(wěn)定性

關(guān)于霉菌毒素的熱穩(wěn)定性研究的較多。早在1978年，伊冰研究了黃曲霉毒素M1的熱穩(wěn)定性，結(jié)果表明，90℃下處理30 min，黃曲霉毒素M1的平均回收率高達91%。但林克龍等（2006）研究表明，加熱可降低花生中的黃曲霉毒素的含量，并隨溫度升高和加熱時間的增加，毒素含量也明顯下降，且黃曲霉毒素G1的熱穩(wěn)定性較黃曲霉毒素B1差。與黃曲霉毒素一樣，OTA也具有很強的化學(xué)穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性。Hamid等（1995）研究了不同溫度、不同處理時間對干麥和濕麥中OTA熱穩(wěn)定性的影響，結(jié)果表明，100℃條件下，處理20 min，干麥和濕麥中OTA的降解率也只有2%，250℃條件下，處理2 min，OTA的降解率是30%，處理16 min，OTA的降解率是88%。Kitabatake等(1991)和 Trivedi等（1992）報道，OTA 污染的飼料經(jīng)熱處理后，其對豬等畜禽的毒性作用并沒有降低。由此可見，OTA的熱穩(wěn)定性相當強，飼料生產(chǎn)過程中，85～95℃的制粒溫度根本不能破壞OTA的結(jié)構(gòu)和降低OTA的毒性。

3 豬組織中赭曲霉毒素A的檢測

檢測OTA的方法有多種，主要有薄層色譜分析法、高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫吸附法、毛細管電泳法、膠體金試紙條法等（章英等，2006）。Dominigue等(1987)用基于單克隆抗體的放射免疫檢測法研究表明，用該法檢測豬腎臟中OTA的最小極限量是0.2 ng/g。

另有研究表明，血清中OTA濃度是動物OTA中毒的指示劑，也是動物霉菌毒素中毒的晴雨表（Hult等，1980）。Cesar等（2010）用高效液相色譜法檢測不同巴西地區(qū)豬血清中OTA的濃度，來間接監(jiān)測不同地區(qū)飼料受霉菌毒素污染的程度。具體步驟是：首先通過頸靜脈取50 ml血液，室溫下保存12 h，3 000 r/min離心15 min，然后分別取血清0.8、0.2 ml濃度15%的三氯乙酸和1ml二氯甲烷置于2 ml微管中，再漩渦攪拌 30 s，室溫下放置 4～48 h，再在 16 000 r/min條件下離心5 min，結(jié)果，微管中形成了3層，小心棄掉最底層的二氯甲烷，余下了轉(zhuǎn)置于1.5 ml微管中液氮凍干保存。用乙腈、水和醋酸（57： 41： 2，V/V）的混合溶液作流動相，流速是0.5～1 ml/min。計算公式如下，。式中，h1為樣品中OTA峰的高度(mm)；Vf為提取液的最終體積（μl）；M 為標準溶液中 OTA 的質(zhì)量；Vi為注入樣品的體積（μl）；Va為樣品的初始體積（μl）；h2為標準溶液峰的高度（mm）。

需要注意的是，流動相要即準即用，乙腈、水和醋酸采用層流混合，并用超聲波攪拌均勻。熒光檢測的激發(fā)光和熒光波長分別為330和460 nm，保留時間約5 min。

Mortensen等（1983）和 Signatovich等（1989）研究表明，豬腎臟、肝臟、脂肪組織、血液中OTA的殘留量與飼料中OTA的含量存在較好的相關(guān)性（見表3）。當豬采食了受OTA污染的飼料后，血液中OTA的殘留量明顯高于其它組織器官。

表3 豬組織器官中OTA殘留量與飼料中OTA含量的關(guān)系

4 結(jié)語

總之，OTA是一種常見的、熱穩(wěn)定性很強的腎毒性霉菌毒素，為了畜禽福利和人類健康，應(yīng)規(guī)避霉變原料和飼料喂養(yǎng)畜禽。有關(guān)OTA的研究雖然較多，但有關(guān)主要消化酶活性、腸黏膜上皮細胞更替速率、養(yǎng)分消化利用率、疫苗效價高低等與飼料中OTA含量之間的線性關(guān)系有待更的深入研究和完善。

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