吳東峰 宋 霖 王永玲 孔 麗 蔡春芳

（蘇州大學醫(yī)學部基礎醫(yī)學與生物科學學院，江蘇蘇州 215123）

為了保障養(yǎng)殖動物正常生長和健康，需要向飼料中添加足量的維生素。但維生素是一種對其物理和化學環(huán)境相當敏感的生物學活性物質，其穩(wěn)定性受飼料加工和儲存過程中許多因子的影響，包括溫度、壓力、濕度、摩擦、氧化還原、光照等[1]。制粒過程中溫度和壓力越高，干燥時間越長，則損失的維生素越多。制?；蚺蚧髧娡考夹g，能夠避免或減少這些不利影響。后噴涂用的液體維生素在畜禽飼料中已有應用[2-3]，但在水產(chǎn)飼料中應用效果的研究報道還較少，為此，本文以異育銀鯽為對象對此進行初步研究。

1 材料和方法

1.1 飼料

試驗飼料以進口魚粉、豆粕、菜粕、棉粕為蛋白源，以魚油和豆油為脂肪源，以面粉為糖源配制而成，配方見表1。其中，對照組飼料添加1‰固體維生素預混料，試驗組分別添加0.8‰和0.5‰的納米級液體維生素預混料（納維素）。固體維生素和液體維生素配方相同，均由上海三智生物技術有限公司提供。對照組向飼料中添加多維后再制粒，并用95℃蒸汽熟化5 min。試驗組制粒后用95℃蒸汽熟化5 min，再噴涂納維素。

1.2 試驗魚

異育銀鯽購自蘇州市吳江養(yǎng)殖場，為當年池塘養(yǎng)殖魚種。經(jīng)一周馴養(yǎng)適應環(huán)境后，選取300尾大小均勻、體格健壯的魚種隨機分配到15個100 cm×50 cm×50 cm的PVC水族箱中，每箱20尾。鯽魚平均初重為(24.3±1.0)g。各試驗組按完全隨機化配置法分布以避免地理位置的差異造成的試驗誤差。

表1 試驗飼料配方及納維素在飼料中的添加量(%)

1.3 飼養(yǎng)管理

每種飼料投喂5箱鯽魚，視魚的攝食情況調整投喂量，投喂時間分別為8:30、12:30、17:00。所有水族箱在同一半開放式循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)中，自然光周期，以充分曝氣的自來水為水源，每天換水量為總水量的1/3。養(yǎng)殖水經(jīng)過濾、沉淀后流回蓄水池，經(jīng)過增氧、控溫后由水泵抽回各水族箱。養(yǎng)殖期間水質條件為：水溫(25±2)℃，DO＞4.5 mg/l,pH 值 7.5±0.2,NH4+-N(0.25±0.05)mg/l,NO2-N(0.04±0.01)mg/l，硫化物＜0.05 mg/l，各項指標均符合養(yǎng)殖水體要求。共飼養(yǎng)60 d。

1.4 采樣與分析方法

1.4.1 樣品采集與制備

養(yǎng)殖試驗結束后，停止喂食24 h，收集試驗魚，使用MS-222將魚麻醉，稱重。

血清制備：尾靜脈抽血，自然凝固后，以3 000 r/min冷凍離心20 min除去血細胞，取上清液即為血清。

黏液制備：用濾紙將魚體表面的水分吸干，用解剖刀從魚體背部一側刮取黏液，稱重，加5倍體積0.02 mol/l、pH值7.4的磷酸緩沖液，于玻璃勻漿器中勻漿，以10 000 r/min冷凍離心20 min，棄沉淀，取上清液即為粗酶液。

肝組織酶液制備：迅速取肝胰臟，稱重，液氮冷凍后-20℃保存。分析前加5倍體積生理鹽水，用FSH-2型可調高速勻漿器在冰浴中勻漿，隨后在4℃下以10 000 r/min離心20 min,棄沉淀,取上清液即為粗酶液。

1.4.2 血清生化指標測定

使用全自動血清生化分析儀(CHEMIX-800 Sysmex TRANSASIA)測定丙氨酸轉氨酶(ALT)、天門冬氨酸轉氨酶(AST)、血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(CHO)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)以及血糖(Glu)等指標。

1.4.3 SOD活力測定

參照謝衛(wèi)華（1988）的方法稍作改進，將4.5 ml 50 mmol/l、pH值8.2的Tris-HCl緩沖液(50 ml 0.1 mol/l Tris溶液與22.9 ml、0.1 mol/l鹽酸混勻后，加水稀釋至100 ml)于25℃保溫20 min，然后加入預熱的45 mmol/l鄰苯三酚10 μl（對照管用10 mmol/l HCl代替），迅速搖勻，倒入光徑1 cm的比色杯中，325 nm下，每隔30 s測A值一次。要求自氧化率控制在0.070/min左右。

樣品酶活性測定方法與測定鄰苯三酚自氧化速率相同，在加入鄰苯三酚前加入待測SOD樣液。按下列公式計算酶活性：

1.4.4 樣品體積肝組織總抗氧化活力（T-AOC）測定

采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒進行測定。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗結果采用“平均值±標準差”表示，所有統(tǒng)計分析采用SPSS17.0軟件，用Duncan's多重比較法分析試驗結果的差異顯著性，顯著水平為0.05。

2 結果

2.1 不同來源維生素對異育銀鯽生長性能的影響（見圖1）

在60 d的飼養(yǎng)期內，異育銀鯽生長和攝食正常。對照組增重率為94.5%，飼料系數(shù)為1.82，0.8‰和0.5‰納維素組增重率有所提高。增重率和飼料系數(shù)，各組之間差異不顯著。

2.2 不同來源維生素對異育銀鯽血清生化指標的影響（見表2）

表2 固體維生素和納維素對異育銀鯽血清生化指標的影響

血清生化指標顯示 ALT、AST、CHO、HDL-C 以及Glu差異不顯著(P＞0.05)，但TG存在差異，0.8‰納維素組顯著低于對照組（P＜0.05），0.5‰納維素組與對照組相比差異不顯著(P＞0.05)。

2.3 不同來源維生素對異育銀鯽抗氧化性能指標的影響（見表 3）

表3 固體維生素和納維素對異育銀鯽血清、黏液和肝SOD活力以及肝T-AOC的影響

血清和肝組織中SOD活力均是0.8‰納維素組顯著高于對照組(P＜0.05)，黏液SOD活力各組間差異不顯著。肝組織中T-AOC活力0.8‰納維素組顯著高于對照組(P＜0.05)。0.5‰納維素組與對照組相比差異不顯著(P＞0.05)。

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)，使用0.8‰的納維素可以顯著提高血液和肝胰臟中抗氧化酶活性，降低血清TG水平。而使用0.5‰的納維素組異育銀鯽的生長、抗氧化活力、血清指標都與對照組相比差異不顯著。

水產(chǎn)飼料加工過程中，為了改善飼料適口性和糖類可利用性，越來越傾向于采用擠壓工藝。但這也導致一些敏感性養(yǎng)分，如維生素[4]受制粒機、膨化機、膨脹器等熱加工設備的大量破壞，反而增加了這些成分的補償添加量，從而增加飼料成本。因此，液體維生素的后噴涂技術得到了大量關注。翟洪玲等[5]報道，后噴涂技術可以顯著提高維生素的活性保存率，亦可獲得較好的顆粒間均勻性。液體維生素的優(yōu)點主要表現(xiàn)在可以避免應用過程中的粉塵損失，有利于在飼料中的均勻分布，可以有效避免因高溫造成的損失。這可以解釋本研究中0.5‰納維素組與對照組相比差異不顯著的現(xiàn)象。

維生素A、C、E等具有抗氧化性質，本試驗發(fā)現(xiàn)，0.8‰納維素組抗氧化能力顯著高于對照組，應該與這些維生素的存在有關。此外，液體維生素因其顆粒小，比表面積大，擴散迅速，因而更有利于動物的吸收利用。這可能也是0.8‰納維素組抗氧化力顯著高于對照組的一個重要原因。從本試驗結果看，0.8‰納維素組效果優(yōu)于1‰固體維生素組。

液體維生素后噴涂技術雖然避免了維生素在加工過程的破壞，但由于這些維生素直接噴灑于飼料顆粒表面，直接接觸外界環(huán)境，因而受光照、濕度等環(huán)境因子的影響比較大，其損失速度有待于進一步研究。對于水產(chǎn)動物來說，飼料需投入水中，其溶失也會影響維生素的利用效率。本試驗中由于鯽魚是比較容易馴飼的魚類，飼料顆粒入水即被食用，因而影響可能較少。但對于抱食的水產(chǎn)動物以及攝食速度比較慢的水產(chǎn)動物，其溶失率也需要研究確認。

[1]葛建東,楊凌.飼料工藝對預混料中維生素的影響[J].飼料研究,1998(1):15-17.

[2]張紅崗，韓一超，武守艷，等.納米級液體型維生素E-硒合劑對羊硒缺乏的營養(yǎng)調控研究[J].中國畜牧獸醫(yī)文摘,2011,27（2）：139-141.

[3]張雅琴，翟長富.雞用液體維生素飼喂試驗[J].飼料與畜牧：新飼料，1989(4):34-35.

[4]Coelho M.Vitamin Stability in Premixes and Feeds A Practical Approach in Ruminant Diets[J].Proceedings 13th Annual Florida Ruminant Nutrition Symposium,2002:127-145.

[5]翟洪玲,王紅英，薛松堂,等.對顆粒飼料真空后噴涂液體維生素的試驗研究[J].農業(yè)工程學報，2005，21（12）：89-92.