梁保華 (開封市第二人民醫(yī)院心胸外科，河南 開封 475002)

食管鱗癌發(fā)生與發(fā)展是多因素綜合作用的結(jié)果。近年研究表明食管鱗癌發(fā)生時機(jī)體基因和蛋白均出現(xiàn)明顯變化，并調(diào)節(jié)腫瘤發(fā)生發(fā)展〔1〕。黑色素瘤抗原(MAGE)是腫瘤特異性抗原，其編碼的蛋白經(jīng)抗原提呈細(xì)胞加工后，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生殺傷性T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的特異性抗腫瘤免疫應(yīng)答〔1〕。MAGE-A1和-A3是MAGE家庭中最有特征的代表，對多種腫瘤進(jìn)展均有促進(jìn)作用〔2〕。關(guān)于二者在食管鱗癌表達(dá)的關(guān)系尚未見報道。本實驗探討食管鱗癌組織MAGE-A1和-A3表達(dá)關(guān)系，關(guān)注其對判斷預(yù)后的價值。

1 材料與方法

1.1 臨床材料 我院2006年1月至2001年12月存檔的食管鱗癌標(biāo)本蠟塊83例為觀察組，年齡46～80(平均56.0)歲，臨床隨訪資料完整，手術(shù)前均未有任何放、化療。同時選取同期病理證實為正常食管黏膜組織52例為對照組，年齡45～79(平均55.6)歲。二組在一般資料的比較中，無明顯差別。隨訪3～60(平均21.2)個月。

1.2 方法 MAGE-A1和-A3試劑購自武漢博士德生物技術(shù)有限公司，檢測應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)SP法，具體步驟:切片后脫蠟，水化，應(yīng)用3%H2O2去離子水孵育約10 min;經(jīng)高壓修復(fù)后分別滴加MAGE-A1和-A3抗體，4℃過夜，PBS沖洗3次;加入二抗，室溫孵育20 min，PBS沖洗3次;加入辣根酶標(biāo)記的鏈霉卵白素，室溫孵育20～30 min，PBS沖洗3次;DAB顯色;沖洗、復(fù)染、脫水、透明、封片〔3〕。全部過程均由同一病理科的主管技師完成，避免人為誤差，嚴(yán)格質(zhì)控。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn) MAGE-A1和-A3陽性染色主要位于細(xì)胞質(zhì)，均為棕黃色細(xì)顆粒樣著色，于每張切片中均仔細(xì)選擇10個腫瘤細(xì)胞密度高的高倍鏡視野區(qū)，根據(jù)染色部位和染色細(xì)胞所占的百分比進(jìn)行綜合評分。不著色0分，著色淡1分，著色深2分;著色細(xì)胞占總計數(shù)細(xì)胞百分率＜5%為0分，5% ～25%1分，26% ～50%2分，＞50%3分。以每張切片著色強(qiáng)度得分乘以著色細(xì)胞百分率計為最終得分。＜2分陰性(-)，≥2分陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SAS6.12統(tǒng)計軟件，定性資料比較采用χ2檢驗，并進(jìn)行相關(guān)分析及生存分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組MAGE-A1和-A3表達(dá)比較 觀察組與對照組MAGE-A1〔68例(81.93%)vs 13例(25.00%)〕和-A3表達(dá)陽性率〔60例(72.29%)vs 16例(30.77%)〕差別顯著(χ2=43.170 2，P＜0.000 1;χ2=22.400 8，P＜0.000 1)。

2.2 MAGE-A1和-A3在觀察組中不同臨床特征中表達(dá)比較觀察組中MAGE-A1和-A3表達(dá)與Ki67表達(dá)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期均有密切相關(guān)。見表1。

表1 MAGE-A1和-A3在觀察組中不同臨床病理特征的表達(dá)〔n(%)〕

2.3 觀察組MAGE-A1和-A3表達(dá)關(guān)系 線性相關(guān)分析表明，觀察組MAGE-A1和-A3表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.49，P=0.031 1)。

2.4 食管鱗癌組織中MAGE-A1和-A3與生存的關(guān)系 食管鱗癌MAGE-A1和-A3表達(dá)與預(yù)后相關(guān)(P＜0.05)，即MAGEA1和-A3高表達(dá)患者預(yù)后差。

3 討論

食管鱗癌侵襲和轉(zhuǎn)移是影響生物學(xué)行為最重要的因素〔4〕。但是其具體調(diào)節(jié)機(jī)制尚不明確。MAGE-A1和-A3是MAGE家族中最早發(fā)現(xiàn)的基因和蛋白，其編碼的蛋白產(chǎn)物在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)被蛋白水解酶裂解，形成兩個可被遞呈系統(tǒng)識別的與主要組織相容性復(fù)合體(MHC)分子相結(jié)合的肽段〔5〕。在機(jī)體中，參與抗腫瘤免疫排斥反應(yīng)的主要角色是T淋巴細(xì)胞，而T淋巴細(xì)胞活化依賴于對腫瘤特異性抗原的識別，MAGE-A3抗原在腫瘤細(xì)胞表面可和MHC類分子特異性結(jié)合成復(fù)合物，被自體抗原識別，誘發(fā)細(xì)胞增殖。但是，腫瘤細(xì)胞有異質(zhì)性，在同一腫瘤內(nèi)部，腫瘤細(xì)胞亞群不同而造成了腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性差異，使各亞群之間在浸潤、轉(zhuǎn)移潛能也有差異。因此，不同個體，不同腫瘤中MAGE-A1和-A3表達(dá)可能差別較大〔6〕。

本實驗結(jié)果提示腫瘤發(fā)生過程中，MAGE-A1和-A3可能起某種促進(jìn)作用，可影響腫瘤增殖及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程，也可能對調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附性的細(xì)胞外基質(zhì)的降解有一定影響，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤進(jìn)展〔7〕。由于Ki67表達(dá)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期是食管鱗癌預(yù)后相關(guān)的重要臨床因素，因此兩種蛋白高表達(dá)可能提示腫瘤預(yù)后不良，生存分析結(jié)果直接證實了此結(jié)論。本實驗顯示MAGE-A1和-A3蛋白具有正相關(guān)性，提示MAGE-A1和-A3有協(xié)同正向作用，由于MAGE-A1和-A3屬于同一家族，具有共同結(jié)構(gòu)和位點，因此其對腫瘤增殖及分化調(diào)控作用可能具有相似性，其也可能參與到人們已經(jīng)尋找到的5條以MAGE/抗原基因為基礎(chǔ)的腫瘤免疫治療途徑中，即抗原遞呈途徑、黑色素瘤接種途徑、基因轉(zhuǎn)染途徑、樹突細(xì)胞接種途徑、MAGE抗原肽接種途徑〔8〕，這些通道 MAGE-A1和-A3共同起作用的基礎(chǔ)。MAGE-A1和-A3聯(lián)合檢測為食管鱗癌預(yù)后判斷提供了新的方法，且免疫組化技術(shù)成熟，應(yīng)用簡單，臨床可以開展應(yīng)用。

1 Metzler P，Mollaoglu N，Schwarz S，et al.MAGE-A as a novel approach in the diagnostic accuracy of oral squamous cell cancer:a case report〔J〕.Head Neck Oncol，2009;16(1):39.

2 唐 艷，夏大文，李亞榮，等.以MAGE A1-A6亞型基軛mRNA為特異標(biāo)記檢測肺癌細(xì)胞〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2008;28(21):2123-5.

3 李德艷，劉愛東，高 峰.MMP-7和E-cad在胃癌組織中表達(dá)的臨床價值〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2011;31(2):185-6.

4 王 麗，陳奎生.MAGE-A3食管鱗癌組織中的表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系〔J〕.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2009;36(8):3600-1.

5 吳 晁，陳同鈺，樊祥山，等.食管鱗癌中癌-睪丸抗原NY-ESO-1及MAGE的表達(dá)〔J〕.實用癌癥雜志，2007;22(4):341-3.

6 李 佳，潘林娜，張志燕，等.MAGE-A1在食管癌中的表達(dá)及其與腫瘤細(xì)胞增殖的關(guān)系〔J〕.世界華人消化雜志，2007;15(7):706-11.

7 劉愛東，龐久玲，劉士生.胃癌中基質(zhì)金屬蛋白酶-9和CD105表達(dá)關(guān)系的研究〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2009;29(7):886-7.

8 裴 斐，李新明，史火喜，等.黑色素腫瘤抗原基因1、3在直腸癌肝轉(zhuǎn)移組織的表達(dá)〔J〕.咸寧學(xué)院學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2010;24(2):96-8.