苗向陽，羅 旭，付 逆，郭建橋，趙法亮，崔 偉

(遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院泌尿外科，貴州 遵義 563099)

膀胱移行細(xì)胞癌(BTCC)是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，具有多中心、浸潤性、易復(fù)發(fā)等生物學(xué)特性，所以，深入研究其生物學(xué)行為，預(yù)測膀胱癌預(yù)后和復(fù)發(fā)等問題已成為近年來研究的熱點(diǎn)。胎盤生長因子(Placenta growth factor，PLGF)在1991年由Maglione［1］從人的胎盤cDNA文庫中分離純化而得，其基因序列與VEGF基因有53%同源性。PLGF在絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞層中高度表達(dá)，在妊娠母體的血液中可以檢測到有免疫活性的PLGF，并能維持一定的水平。國內(nèi)外研究表明［1，3、5］PLGF 在多種腫瘤組織中呈高表達(dá)，但關(guān)于PLGF在膀胱癌組織中是否表達(dá)，國內(nèi)外文獻(xiàn)鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過檢測PLGF在膀胱移行細(xì)胞癌組織中的表達(dá)，以期探討PLGF在膀胱移行細(xì)胞癌不同病理分級(jí)和臨床分期中的表達(dá)變化及臨床意義。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 隨機(jī)抽取遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院泌尿外科2007～2008年手術(shù)切除證實(shí)為膀胱移行細(xì)胞癌的石蠟標(biāo)本30例，其中男性19例，女性11例，年齡33～92歲，平均64歲;按TNM分期，Tis 2例，Ta 3例，T1 12例，T2 9例，T3 3例、T4 1例，分期依據(jù)CT，病理檢查等;按WHO腫瘤分級(jí)，Ⅰ級(jí)10例，Ⅱ級(jí)11例，Ⅲ級(jí)9例;正常膀胱粘膜組織10例。正常呈陽性表達(dá)的胎盤組織1例。

1.2 主要試劑與方法 采用免疫組化SP兩步法，實(shí)驗(yàn)用一抗兔抗人PLGF，二抗辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗兔IgG，均為北京博奧森生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，工作濃度均為1:50;SP法實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。以PBS代替一抗，作為陰性對(duì)照，正常胎盤組織標(biāo)本作為陽性對(duì)照。用10%甲醛固定樣本、石蠟包埋、連續(xù)4μm厚切片，每份標(biāo)本切片6張，DAB染色。

1.3 結(jié)果判定 PLGF以胞漿出現(xiàn)均勻分布黃褐色或棕黃色顆粒為陽性。每例標(biāo)本隨機(jī)計(jì)數(shù)10個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞中陽性染色細(xì)胞數(shù)，以陽性染色細(xì)胞的百分率作為結(jié)果。陽性染色細(xì)胞數(shù)少于5%判定為陰性，陽性染色細(xì)胞數(shù)大于5%判定為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間比較采用檢驗(yàn)或fisher exact test法，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 在正常膀胱粘膜和BTCC組織中PLGF的表達(dá)(見表1)。

PLGF在正常膀胱粘膜和BTCC組織中，主要分布在細(xì)胞漿(見圖2、3)，在腫瘤間質(zhì)的血管內(nèi)皮細(xì)胞中也有少量表達(dá)(見圖4)。

表1 正常膀胱粘膜和BTCC組織中PLGF的表達(dá)

2.2 在BTCC組織不同病理分級(jí)中PLGF的表達(dá)(見表 2、圖 1)。

表2 在BTCC組織不同病理分級(jí)中PLGF的表達(dá)

2.3 在BTCC組織不同臨床分期中PLGF的表達(dá)(見表3、圖 2)。

表3 在BTCC組織不同臨床分期中PLGF的關(guān)系

2.4 在BTCC組織不同性別中PLGF的表達(dá)(表4)。

3 討論

膀胱移行細(xì)胞癌(BTCC)是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，對(duì)預(yù)測其預(yù)后和復(fù)發(fā)等問題已成為近年來研究的熱點(diǎn)。腫瘤能否形成新生血管取決于促血管因子和抑制血管生成因子二者之間的平衡。胎盤生長因子(PLGF)是血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)家族中的一員，其蛋白氨基酸序列與VEGF有53%的同源性。研究發(fā)現(xiàn)PLGFmRNA在絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞層中高表達(dá)，在整個(gè)妊娠過程中處于一定的水平，結(jié)果認(rèn)為PLGF在胎盤絨毛膜血管形成中起重要作用，對(duì)胚胎發(fā)育也起一定的作用［6，7］。而在多種腫瘤組織中PLGF呈高表達(dá)狀態(tài)，并認(rèn)為PLGF過表達(dá)導(dǎo)致腫瘤的生長和血管的形成［8－10］。

本研究結(jié)果表明，隨著膀胱移行細(xì)胞癌病理分級(jí)的升高，PLGF表達(dá)增加，G2、G3級(jí)組織中其表達(dá)均明顯高于G1級(jí)，但在G2、G3組織中其表達(dá)卻無明顯差異，究其原因，可能與本組病例較少有關(guān)。同時(shí)本研究發(fā)現(xiàn)，PLGF在浸潤性膀胱癌中的表達(dá)明顯高于非浸潤性膀胱癌，且無性別差異。因此，我們認(rèn)為PLGF可作為臨床初步判定膀胱癌惡性程度的一項(xiàng)檢測指標(biāo)。

［1］Fischer C，Jonckx B，Carmeliet P，et al.Anti－ PLGF inhibits growth VEGF(R)－inhibitor－resistant tumors without affecting healthy vessels［J］.Cell，2007，131(3):463－475.

［2］Matsumoto K，Suzuki K，Koike H，et al.Prognostic significance of plasma placental growth factor levels in renal cell cancer:an association with clinical characteristics and vascular endothelial growth factor levels［J］.Anticancer Res，2006，23(6):4953 －4958.

［3］Parr C，Watkins G，Boulton M，et al.Placenta growth factor is o－verexpressed and has prognostic value in human breast cancer［J］.Eur J Ca － ncer，2005，41(18):2819 －2827.

［4］Berse B，Brown L F，Van deWater L，et al.Vascular permeability factor(vascular endothelial growth factor)gene is exressed differentially in normal tissues，macrophages and tumors［J］.MolBiol Cell，1992，3:1237 － 1245.

［5］梁培禾，靳風(fēng)爍，張克勤，等.膀胱移行細(xì)胞癌VEGFR－2表達(dá)與血管生成的研究［J］.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，28(10):1095 －1096.

［6］Vuorela P，Hatva E，Lymboussaki A，et al.Expression of vascular en－dothelial growth factor and placenta growth factor in human placenta［J］.Biol Reprod，1997，56(2):489－494.

［7］Clark D E，Smith S K，Licence D ，et al.Comparison of expression patterns for placenta growth factor，vascular endothelial growth factor(VEGF)，VEGF－2B and VEGF－ 2C in the human placenta throughout gestation［J］.J E－ Ndocrinol，1998，159(3):459 －467.

［8］Kodama J，Seki N ，Tokumo K，et al.Placenta growth factor is abundantly expressed in human cervical squamous cell carcinoma［J］.Eur J Gynaecol Oncol，1997，18(6):508－410.

［9］Donnini S，Machein M R ，Plate KH ，et al.Expression and localization of placenta growth factor and PlGF receptors in human meningiomas［J］.J Pathol，1999 ，189(1):66－71.

［10］Adini A，Kornaga T，F(xiàn)iroozbakht F ，et al.Placental growth factor is asurvival factor for tumor endothelial cells andmacrophages［J］.Cancer Res，2002，62(10):2749－2752.