南 瑩，李齊激，馬 琳，張倩茹，楊小生

(1.遵義醫(yī)學(xué)院，貴州 遵義 563099;2.貴州省中國(guó)科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽(yáng) 550001)

刺梨 (Rosa roxbughii Tratt)為薔薇科薔薇屬多年生落葉叢生灌木，又名繅絲花、送春歸，主產(chǎn)于我國(guó)四川、貴州等地［1］，現(xiàn)湖北、廣東、江蘇等地亦有種植。其全株均可藥用，具有消食健脾，收斂止瀉等功效［2］，用于治療積食腹脹、痢疾、腸炎、高血壓血管破裂出血、維生素C缺乏癥等疾病，同時(shí)還能調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、延緩衰老、解毒、抗動(dòng)脈粥樣硬化和抗腫瘤等功能［3］。刺梨富含超氧化物歧化酶(superoxide dismutase ，SOD)［4］、維生素(維生素E、維生素 C)［5］、微量元素(Zn，Sr，Rb)［6］、刺梨多糖［7］及多種化學(xué)成分［8，9］。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，刺梨總?cè)坪涂傸S酮為其藥理活性成分［10］，本實(shí)驗(yàn)采用比色法對(duì)野生和栽培刺梨中總?cè)坪涂傸S酮進(jìn)行含量測(cè)定研究，比較其含量差異，提供了質(zhì)量控制方法技術(shù)基礎(chǔ)，研究結(jié)果對(duì)于有效利用我省豐富的刺梨資源具有重要意義。

1 材料與試藥

1.1 儀器 HP－8453雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(惠普公司)，F(xiàn)A114萬(wàn)分之一電子天平(上海?？惦娮觾x器廠)，電熱恒溫水浴鍋(北京永光明醫(yī)療儀器廠)。

1.2 試藥 蘆丁對(duì)照品(編號(hào)080－200306，中國(guó)食品藥品檢定研究院)，熊果酸對(duì)照品(編號(hào)110742－200415，中國(guó)食品藥品檢定研究院)。高氯酸為優(yōu)極純，香草醛、冰乙酸、無(wú)水乙醇、三氯化鋁、醋酸鉀均為分析純。

實(shí)驗(yàn)藥材2012年9月采自貴州龍里，經(jīng)貴州大學(xué)安華明教授鑒定為刺梨(Rosa roxburghii Tratt.fmalis Rehd.et Wils)的果實(shí)。

2 總?cè)坪繙y(cè)定

2.1 方法

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 取熊果酸對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，置50 mL量瓶中，加甲醇制成每1.0 mL含0.11 mg的溶液，稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.2 供試品溶液的制備 取刺梨鮮果和粗粉約1 g，精密稱(chēng)定，加75%乙醇40 mL加熱回流，提取3次，每次2 h，濾過(guò)，蒸干，分別用甲醇定容至50 mL和100 mL，備用。

2.1.3 顯色條件與波長(zhǎng)選擇 取供試品溶液適量于具塞試管中，100°C水浴蒸干，加0.40 mL香草醛－冰乙酸溶液和1.00 mL高氯酸，在60°C水浴加熱15 min后，移入冰水浴中，再加入5.00 mL冰乙酸，搖勻后置于室溫。掃描最大吸收波長(zhǎng)，對(duì)照品溶液和供試品溶液顯色后的最大吸收峰為545 nm，與文獻(xiàn)報(bào)道一致［11］，因此，選用545 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。紫外掃描圖譜(見(jiàn)圖1、2)。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)品UV－Vis掃描圖譜

圖2 刺梨樣品UV－Vis掃描圖譜

2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 精密量取對(duì)照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.6 mL，分別置具塞試管中，以吸收值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，質(zhì)量X為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸直線方程為:A=5.2684X+0.0061 ，r=0.9988，結(jié)果表明對(duì)照品含量在0.022～0.176 mg范圍內(nèi)與吸收值線性關(guān)系良好。

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液6份，按2.1.3項(xiàng)下操作，測(cè)定吸光度，平均吸光度為0.453%，RSD為1.04%。結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.2.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取約1 g刺梨粗粉，精密稱(chēng)定，按2.1.3項(xiàng)操作，測(cè)定吸光度，考察其穩(wěn)定性，RSD為1.64%。結(jié)果表明供試品溶液顯色后30 min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取刺梨粗粉6份，精密稱(chēng)定，按2.1.3項(xiàng)操作，測(cè)定吸光度，樣品總?cè)坪繛?1.25%，RSD為0.59%。結(jié)果表明本試驗(yàn)重復(fù)性良好。

2.2.4 加樣回收試驗(yàn) 取約0.5g已知總?cè)坪繛?2.485%的刺梨粗粉6份，精密稱(chēng)定，按比例精密加入對(duì)照品溶液，按2.1.3項(xiàng)制備供試品溶液，顯色后測(cè)定A545nm吸光度，計(jì)算回收率，平均回收率為103.14%，RSD為1.73%，表明方法準(zhǔn)確性好。加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(見(jiàn)表1)。

表1 加樣回收試驗(yàn)(n=6)

2.3 總?cè)坪繙y(cè)定 取野生和栽培刺梨，按2.1.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定吸光度，計(jì)算含量，測(cè)定結(jié)果(見(jiàn)表2)。

表2 總?cè)坪繙y(cè)定結(jié)果

3 總黃酮含量測(cè)定

3.1 方法

3.1.1 對(duì)照品溶液的制備 取蘆丁對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，置25 mL量瓶，加乙醇定容。精密吸取10.0 mL，加乙醇定容于25 mL量瓶，稀釋至刻度，搖勻，即得每1.0 mL含0.24 mg的溶液。

3.1.2 供試品溶液的制備 取刺梨鮮果和粗粉約1 g，精密稱(chēng)定，加75%乙醇40 mL加熱回流，提取3次，每次2 h，濾過(guò)，蒸干，分別用乙醇定容至25 mL和50 mL，備用。

3.1.3 顯色條件與波長(zhǎng)選擇 取適量供試品溶液于具塞試管中，用乙醇稀釋至5 mL，分別精密加入3.0 mL 2.5%AlCl3溶液及5.0 mL10%KAc 溶液，搖勻后室溫放置40 min依法測(cè)定。掃描最大吸收波長(zhǎng)，蘆丁對(duì)照品溶液和供試品溶液顯色后的最大吸收峰為420 nm，與文獻(xiàn)報(bào)道一致［12］，因此，選用420 nm最為檢測(cè)波長(zhǎng)。紫外掃描圖譜(見(jiàn)圖3、4)。

圖3 標(biāo)準(zhǔn)品UV－Vis掃描圖譜

圖4 刺梨樣品UV－Vis掃描圖譜

3.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 精密量取對(duì)照品溶液0.2，0.4，0.8，1.2，1.6 mL，分別置具塞試管中，以吸收值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，質(zhì)量X為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸直線方程為:A=2.3453X+0.0411，r=0.9984，結(jié)果表明蘆丁含量在 0.048 ～0.384 mg范圍內(nèi)與吸收值線性關(guān)系良好。

3.2 方法學(xué)考察

3.2.1 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液6份，按3.1.3 項(xiàng)操作，測(cè)定 A420nm，平均吸光度為 0.3263，RSD為0.63%。結(jié)果表明儀器精密度良好。

3.2.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取約1g刺梨粗粉，精密稱(chēng)定，按 3.1.3 項(xiàng)操作，測(cè)定，計(jì)算，RSD 為 0.47%。結(jié)果表明供試品溶液在顯色后30 min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.2.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取刺梨粗粉6份，精密稱(chēng)定，按3.1.3項(xiàng)操作制備供試品溶液，測(cè)定，計(jì)算樣品總黃酮含量為0.45%，RSD為0.59%。結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)重復(fù)性良好。

3.2.4 加樣回收試驗(yàn) 取約0.5 g已知總黃酮含量為0.72%的刺梨粗粉6份，精密稱(chēng)定，按比例精密加入蘆丁對(duì)照品溶液，按3.1.3項(xiàng)制備供試品溶液，顯色后測(cè)定A420nm吸光度，計(jì)算回收率，平均回收率為100.60%，RSD為1.53%，表明方法準(zhǔn)確性好。加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(見(jiàn)表3)。

表3 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

3.3 總黃酮含量測(cè)定 取野生和栽培刺梨，按3.1.3項(xiàng)制備供試品溶液，測(cè)定吸光度，計(jì)算含量。含量測(cè)定結(jié)果(見(jiàn)表4)。

表4 含量測(cè)定結(jié)果

4 討論

對(duì)野生與栽培刺梨總?cè)坪涂傸S酮的含量進(jìn)行測(cè)定，兩品種所含總黃酮無(wú)明顯變化，分別為0.746%，0.721%?？?cè)苿t以野生刺梨較高，為16.990%，栽培刺梨的含量略低，為12.485%。從活性物質(zhì)總?cè)坪涂傸S酮的含量來(lái)看，野生刺梨資源與栽培資源均可具有開(kāi)發(fā)價(jià)值。另外，刺梨干品與鮮品質(zhì)量折算比例約為1∶5，即5 kg鮮品可得1 kg干品。在進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)，可按此比例進(jìn)行預(yù)估。

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