楊 弘 徐起群 樂貽榮 祝璟琳 肖 煒 李大宇 鄒芝英

(1.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心，農(nóng)業(yè)部淡水漁業(yè)和種質(zhì)資源利用重點實驗室，無錫 214081;2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)漁業(yè)學(xué)院，無錫 214081)

尼羅羅非魚(Oreochromis niloticus)又稱非洲鯽魚，是隸屬于鱸形目(Perciformes)麗魚科(Cichlidae)羅非魚屬(Tilapia)的熱帶魚類，具有生長快、產(chǎn)量高、繁殖力強(qiáng)、對環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng)等特點，已經(jīng)成為我國南方地區(qū)(廣東、海南、廣西、福建)的主要養(yǎng)殖品種之一[1-2]。目前關(guān)于尼羅羅非魚的蛋白質(zhì)需求量已有一些文獻(xiàn)報道。El-Sayed等[3]研究發(fā)現(xiàn)尼羅羅非魚對蛋白質(zhì)的需求量受魚體規(guī)格的影響，尼羅羅非魚魚苗(初始體質(zhì)量為15 mg)的蛋白質(zhì)需求量為45%;Siddiqui等[4]報道初始體質(zhì)量分別為0.8和40.0 g的尼羅羅非魚，其蛋白質(zhì)需求量分別為40%和30%;Abdel-Tawwab等[5]發(fā)現(xiàn)規(guī)格為0.4～0.5 g的尼羅羅非魚的蛋白質(zhì)需求量為45%，高于17～22 g和37～43 g這2種規(guī)格的蛋白質(zhì)需求量(35%)。由于Hanley[6]研究發(fā)現(xiàn)尼羅羅非魚對脂質(zhì)的最低需求量為5.1%，上述尼羅羅非魚對蛋白質(zhì)的需求量研究結(jié)果都是建立在飼料配方中脂肪水平為5%左右時，此條件下得出的尼羅羅非魚蛋白質(zhì)需求量在30%～45%。

蛋白質(zhì)是水產(chǎn)動物必需的核心營養(yǎng)物質(zhì)[7]，同時也是水產(chǎn)飼料中直接影響飼料成本價格的原料。飼料蛋白質(zhì)水平能直接影響魚類的生長，當(dāng)飼料中蛋白質(zhì)水平較低時，魚類就難以達(dá)到其最佳的生長速率[5，8-9]，同時還會影響魚類的成活率[10-11]。然而，當(dāng)飼料中蛋白質(zhì)水平過高時，魚類會通過氧化脫氨基作用把過量的蛋白質(zhì)分解代謝用于能量消耗，會產(chǎn)生較多的氨氮排泄物，從而導(dǎo)致養(yǎng)殖水體污染加重，不利于魚類的生長和生態(tài)環(huán)境的可持續(xù)發(fā)展[12-16]。因此，提高飼料中非蛋白質(zhì)營養(yǎng)素如脂肪的水平，利用其對蛋白質(zhì)的節(jié)約作用，在不影響魚類生長的前提下降低飼料蛋白質(zhì)水平和飼料成本，這對于提高魚類養(yǎng)殖效益、減少環(huán)境脅迫和產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。

在對其他品系羅非魚的研究中發(fā)現(xiàn)，飼料中的脂肪可以起到節(jié)約蛋白質(zhì)的作用。Jauncey[17]對奧尼羅非魚(Oreochromis niloticus♀×O.aureus)的研究得出，當(dāng)把飼料中的脂肪水平提高到12%時，飼料中的蛋白質(zhì)水平可以從40%降低到30%而不會對其生長和飼料利用產(chǎn)生負(fù)面影響。有鑒于此，本試驗通過探討高脂肪水平(9%)條件下尼羅羅非魚幼魚對蛋白質(zhì)的需求量，以及蛋白質(zhì)水平對尼羅羅非魚幼魚生長性能、體組成、血液學(xué)指標(biāo)和肝臟非特異性免疫指標(biāo)的影響，以期為生產(chǎn)上配制高能低氮的環(huán)保型尼羅羅非魚全價配合飼料提供數(shù)據(jù)參考和科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料

試驗飼料以魚粉、棉籽粕、豆粕、菜籽粕、酪蛋白和明膠為蛋白質(zhì)源，以酪蛋白和明膠的不同比例調(diào)整飼料蛋白質(zhì)水平，配制成蛋白質(zhì)水平分別為25%、30%、35%、40%和45%的5種等能飼料。各飼料原料粉碎過60目篩，微量成分采取逐級擴(kuò)大法添加，與大宗原料混合均勻后，用制粒機(jī)擠壓成粒徑為2.0 mm的顆粒飼料，風(fēng)干后放入-20℃冰箱中冷凍備用。試驗飼料組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.2 試驗分組與飼養(yǎng)管理

試驗所用尼羅羅非魚選自國家羅非魚產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系研發(fā)中心試驗基地，為1999年引進(jìn)的埃及品系尼羅羅非魚選育以后培育的子代。試驗魚放養(yǎng)在帶有控溫功能的室內(nèi)循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中，水源為曝氣自來水。將試驗魚[初始平均體質(zhì)量為(4.70±0.01)g]隨機(jī)分為5個組，分別飼喂不同蛋白質(zhì)水平的飼料，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)20尾魚，每個桶為1個重復(fù)，共用15個桶，每個桶的有效體積為475 L。試驗魚適應(yīng)環(huán)境2周后稱重，開始投喂試驗飼料，日投喂率為體質(zhì)量的6%～8%，每天于08:00、12:30和18:00分3次投喂。每2周稱重1次，調(diào)整投喂量。每天早上通過換水清除桶底部的糞便。試驗期間水溫為(28±1)℃，pH 7.2～7.8，氨氮含量小于0.05 mg/L，溶氧含量大于5.0 mg/L。飼養(yǎng)時間為10周。

1.3 測定指標(biāo)與方法

1.3.1 生長指標(biāo)

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，記錄每個桶試驗魚的數(shù)目和總體質(zhì)量，然后每個桶隨機(jī)抽取3尾魚進(jìn)行取樣，測定魚的體長、體質(zhì)量、肝臟質(zhì)量、內(nèi)臟質(zhì)量以及取出內(nèi)臟后的魚體質(zhì)量，以計算生長指標(biāo)。

增重率(WGR，%)=[(終末魚體質(zhì)量+死亡魚體質(zhì)量-初始魚體質(zhì)量)/初始魚體質(zhì)量]×100;

攝食量(FI，g/尾)=投喂量/魚尾數(shù);

蛋白質(zhì)效率(PER，%)=[(終末魚體質(zhì)量+死亡魚體質(zhì)量-初始魚體質(zhì)量)/蛋白質(zhì)攝入量]×100;

特定生長率(SGR，%/d)=[(ln終末魚體質(zhì)量-ln初始魚體質(zhì)量)/飼養(yǎng)天數(shù)]×100;

飼料系數(shù)(FCR)=攝食量/(終末魚體質(zhì)量+死亡魚體質(zhì)量-初始魚體質(zhì)量);

蛋白質(zhì)沉積率(PDR，%)=[(終末魚體蛋白質(zhì)含量-初始魚體蛋白質(zhì)含量)/蛋白質(zhì)攝入量]×100;

成活率(SR，%)=(終末魚尾數(shù)/初始魚尾數(shù))×100;

肥滿度(CF，g/cm3)=終末魚體質(zhì)量/終末魚體長3;

肝體比(HSI，%)=(肝臟質(zhì)量/魚體質(zhì)重)×100;

臟體比(VSI，%)=(內(nèi)臟質(zhì)量/魚體質(zhì)重)×100。

表1 試驗飼料組成及營養(yǎng)水平(飼喂基礎(chǔ))Table1 Composition and nutrient levels of experimental diets(as-fed basis) %

1.3.2 體組成

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，每桶隨機(jī)取6尾魚作為全魚樣品分析體組成。其中，水分含量的測定采用105℃烘干恒重法;灰分含量的測定采用馬福爐550℃高溫灼燒法;粗蛋白質(zhì)含量的測定采用凱氏定氮法;粗脂肪含量的測定采用索氏抽提法。

1.3.3 血液學(xué)指標(biāo)

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，每桶隨機(jī)取6尾魚于尾靜脈處采血，取全血樣品和血清樣品每重復(fù)各2份，送江蘇省無錫市江原醫(yī)院檢測。全血樣品檢測白細(xì)胞計數(shù)、紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白含量以及紅細(xì)胞壓積，血清樣品檢測肌酐、總蛋白、白蛋白、球蛋白、甘油三酯、膽固醇含量以及堿性磷酸酶活性。

1.3.4 肝臟非特異性免疫指標(biāo)

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，每桶隨機(jī)取6尾魚的肝臟于-80℃冷凍，備測肝臟中溶菌酶(LZM)、超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶(CAT)活性以及丙二醛(MDA)含量。上述指標(biāo)的測定均采用生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，所用試劑盒均購自美國Assay公司(上海朗頓生物技術(shù)有限公司代理)。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件的單因素方差分析(one-way ANOVA)進(jìn)行方差分析，并采用Duncan氏法多重比較檢驗組間差異的顯著性，P＜0.05即認(rèn)為有顯著差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料蛋白質(zhì)水平對尼羅羅非魚幼魚生長性能的影響

由表2可知，各組試驗魚的終末體質(zhì)量、增重率、特定生長率隨飼料蛋白質(zhì)水平的增加呈現(xiàn)上升的趨勢，但各組之間差異不顯著(P＞0.05)。各組試驗魚的飼料系數(shù)、成活率、肥滿度、肝體比和內(nèi)臟比無顯著差異(P＞0.05)。飼料蛋白質(zhì)水平對尼羅羅非魚幼魚蛋白質(zhì)效率和蛋白質(zhì)沉積率有顯著影響(P＜0.05)。尼羅羅非魚幼魚的蛋白質(zhì)效率隨飼料蛋白質(zhì)水平的增加而顯著降低(P＜0.05)，以蛋白質(zhì)水平為25%的組最高，蛋白質(zhì)水平為45%的組最低。尼羅羅非魚幼魚的蛋白質(zhì)沉積率隨飼料蛋白質(zhì)水平的增加呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢，蛋白質(zhì)水平為30%的組顯著高于蛋白質(zhì)水平為35%、40%和45%的組(P＜0.05)，蛋白質(zhì)水平為25%和35%的組顯著高于蛋白質(zhì)水平為40%和45%的組(P＜0.05)，但蛋白質(zhì)水平為25%和30%的組之間差異不顯著(P＞0.05)。

表2 飼料蛋白質(zhì)水平對尼羅羅非魚生長性能的影響Table2 Effects of dietary protein level on growth performance of juvenile Nile tilapia，Oreochromis niloticus

2.2 飼料蛋白質(zhì)水平對尼羅羅非魚幼魚體組成的影響

由表3可知，飼料蛋白質(zhì)水平對尼羅羅非魚幼魚全魚粗脂肪含量有顯著影響(P＜0.05)，而對全魚水分、粗蛋白質(zhì)和灰分含量無顯著影響(P＞0.05)。尼羅羅非魚幼魚全魚粗脂肪含量隨飼料蛋白質(zhì)水平的增加變化趨勢不明顯，以蛋白質(zhì)水平為25%的組最高，顯著高于其他各組(P＜0.05)，其他各組之間差異不顯著(P＞0.05)。

2.3 飼料蛋白質(zhì)水平對尼羅羅非魚幼魚血液學(xué)指標(biāo)的影響

由表4可知，飼料蛋白質(zhì)水平對尼羅羅非魚幼魚全血中血紅蛋白含量有顯著影響(P＜0.05)，而對全血中白細(xì)胞計數(shù)、紅細(xì)胞計數(shù)以及紅細(xì)胞壓積無顯著影響(P＞0.05)。尼羅羅非魚幼魚全血中血紅蛋白含量隨飼料蛋白質(zhì)水平的增加呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，蛋白質(zhì)水平為40%的組最高，蛋白質(zhì)水平為25%的組最低，這2組之間差異顯著(P＜0.05)，其他組之間差異不顯著(P＞0.05)。飼料蛋白質(zhì)水平對尼羅羅非魚幼魚血清中肌酐、總蛋白、白蛋白、球蛋白、甘油三酯、膽固醇含量以及堿性磷酸酶活性均無顯著影響(P＞0.05)。

表3 飼料蛋白質(zhì)水平對尼羅羅非魚幼魚體組成的影響(濕重基礎(chǔ))Tabe 3 Effects of dietary protein level on body composition of juvenile Nile tilapia，Oreochromis niloticus(wet weight basis)

表4 飼料蛋白質(zhì)水平對尼羅羅非魚幼魚血液學(xué)指標(biāo)的影響Table4 Effects of dietary protein level on hematological indexes of juvenile Nile tilapia，Oreochromis niloticus

2.4 飼料蛋白質(zhì)水平對尼羅羅非魚幼魚肝臟非特異性免疫指標(biāo)的影響

由表5可知，飼料蛋白質(zhì)水平對尼羅羅非魚幼魚肝臟中溶菌酶、過氧化氫酶活性以及丙二醛含量有顯著影響(P＜0.05)。肝臟中溶菌酶活性以蛋白質(zhì)水平為45%的組為最高，顯著高于蛋白質(zhì)水平為25%的組(P＜0.05)，但與蛋白質(zhì)水平為30%、35%和40%的組相比無顯著差異(P＞0.05)。肝臟中過氧化氫酶活性隨飼料蛋白質(zhì)水平的增加呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，以蛋白質(zhì)水平為25%的組最低，顯著低于蛋白質(zhì)水平為35%和45%的組(P＜0.05);以蛋白質(zhì)水平為35%的組最高，顯著高于其他各組(P＜0.05)。肝臟中丙二醛含量隨飼料蛋白質(zhì)水平的增加呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢，蛋白質(zhì)水平為30%的組最低，蛋白質(zhì)水平為45%的組最高，顯著高于其他各組(P＜0.05)，其他各組之間差異不顯著(P＞0.05)。飼料蛋白質(zhì)水平對尼羅羅非魚幼魚肝臟中超氧化物歧化酶活性無顯著影響(P＞0.05)，但隨飼料蛋白質(zhì)水平的增加肝臟中超氧化物歧化酶活性呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，蛋白質(zhì)水平為45%的組最低，蛋白質(zhì)水平為30%的組最高。

表5 飼料蛋白質(zhì)水平對尼羅羅非魚幼魚肝臟非特異性免疫指標(biāo)的影響Table5 Effects of dietary protein level on hepatic non-specific immune indexes of juvenile Nile tilapia，Oreochromis niloticus

3 討論

大量的研究表明魚類的生長和對飼料的利用效率受飼料蛋白質(zhì)水平影響[18-20]。然而，本試驗結(jié)果表明，以增重率、特定生長率、成活率為指標(biāo)，在本試驗設(shè)計的飼料蛋白質(zhì)水平范圍(25%～45%)內(nèi)，當(dāng)飼料脂肪(魚油和豆油的等量混合物)水平為9%(分析值為9.52%)時，尼羅羅非魚幼魚的生長性能不受飼料蛋白質(zhì)水平的影響，飼料中蛋白質(zhì)水平為25%(分析值為24.83%)即可滿足尼羅羅非魚幼魚的生長需要，同時蛋白質(zhì)效率和蛋白質(zhì)沉積率均較高。本試驗得出的尼羅羅非魚幼魚的蛋白質(zhì)需求量低于 Hafedh[19]和 Abdel-Tawwab等[5]報道的結(jié)果(35% ～45%)，這可能與本試驗設(shè)計的飼料脂肪水平較高有關(guān)。本試驗設(shè)計的飼料脂肪水平為9%(分析值為9.52%)，高于尼羅羅非魚對脂肪的最低需求量(5.1%)，得出的蛋白質(zhì)需求量相對較低，表明通過提高飼料中脂肪水平，可以在不影響生長的情況下起到降低尼羅羅非魚幼魚蛋白質(zhì)需求量的作用。在大西洋鮭魚[21-23]和鯰魚[24]上的研究也得出提高飼料中脂肪水平可以降低魚類對蛋白質(zhì)的需求量，即脂肪可以對蛋白質(zhì)起到節(jié)約作用。

本試驗中，尼羅羅非魚幼魚全魚粗脂肪含量受飼料蛋白質(zhì)水平的影響顯著，其中蛋白質(zhì)水平為25%的組全魚粗脂肪含量顯著高于其他各組;而全魚的水分、粗蛋白質(zhì)和灰分含量各組間差異不顯著。本試驗設(shè)計的各試驗飼料是保持等脂水平的，高蛋白質(zhì)飼料含有較低的淀粉水平(表1);相反，低蛋白質(zhì)飼料含有較高的淀粉水平。在對其他魚類的研究中發(fā)現(xiàn)，飼料可消化淀粉水平較高會引起糖原在肝臟中積累，造成肝體比升高[25-27]。同時，Yang 等[28]對銀鱸的研究發(fā)現(xiàn)，腸系膜脂肪含量和肝體比會伴隨著飼料淀粉水平的減少而降低。然而，本試驗中肝體比各組間不存在顯著差異，由此推斷攝食低蛋白質(zhì)飼料的尼羅羅非魚幼魚能夠有效利用過多的糖原轉(zhuǎn)化成魚體脂肪，即具有高效利用飼料中淀粉的能力。

本試驗中，隨著飼料蛋白質(zhì)水平的增加，尼羅羅非魚幼魚全血中血紅蛋白含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，這與Kim等[29]報道的牙鲆全血中血紅蛋白含量伴隨著飼料蛋白質(zhì)水平的增加呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢相同。本試驗中，飼料蛋白質(zhì)水平對尼羅羅非魚幼魚全血中白細(xì)胞計數(shù)、紅細(xì)胞計數(shù)以及紅細(xì)胞壓積均無顯著影響，這與Welker等[30]報道的相同規(guī)格健康羅非魚血液學(xué)指標(biāo)相似，由此可知，25%的飼料蛋白質(zhì)水平已經(jīng)可以滿足血液細(xì)胞的形成和發(fā)育。由于血紅蛋白含量、紅細(xì)胞壓積和紅細(xì)胞計數(shù)同魚類的非特異性免疫功能具有一定的相關(guān)性，能夠反映魚類健康狀況，高含量的血紅蛋白被認(rèn)為是動物健康的表現(xiàn)[31]。因此，在本試驗中，血紅蛋白的上升趨勢表明飼料蛋白質(zhì)水平較高時對魚類的健康具有促進(jìn)作用。

正常情況下，魚類血清生化成分含量受神經(jīng)和內(nèi)分泌調(diào)節(jié)保持相對穩(wěn)定，可以作為機(jī)體健康狀況的評價指標(biāo)。本試驗中，飼料蛋白質(zhì)水平對尼羅羅非魚幼魚血清中肌酐、總蛋白、白蛋白、球蛋白、甘油三酯和膽固醇含量以及堿性磷酸酶活性均無顯著影響，且這些血液生化指標(biāo)的含量都在健康范圍[32]之內(nèi)。由此可見，25%的飼料蛋白質(zhì)水平即可滿足尼羅羅非魚幼魚機(jī)體正常的生理代謝需求。

魚體中的溶菌酶是一類有溶菌活性的堿性蛋白，在水產(chǎn)動物抵抗病原微生物感染中具有重要作用[33-34]，其活性的高低是衡量機(jī)體免疫狀態(tài)的指標(biāo)之一。丙二醛是脂質(zhì)過氧化物的最終分解產(chǎn)物之一，具有很強(qiáng)的生物毒性，其含量能直接反映機(jī)體脂質(zhì)過氧化程度，并間接反映機(jī)體抗氧化能力和細(xì)胞損傷程度。本試驗中，蛋白質(zhì)水平為25%的組試驗魚肝臟中溶菌酶活性顯著低于其他各組，而在其他各組間不存在顯著差異。同時，蛋白質(zhì)水平為25%的組試驗魚肝臟中丙二醛含量較高，顯著高于蛋白質(zhì)水平為45%的組。超氧化物歧化酶是生物機(jī)體內(nèi)重要的抗氧化酶之一，可以減弱活性氧自由基對機(jī)體的損傷。本試驗中，飼料蛋白質(zhì)水平對尼羅羅非魚幼魚肝臟中超氧化物歧化酶活性未產(chǎn)生顯著影響。過氧化氫酶能催化H2O2等生成H2O和O2[35]，防止自由基對細(xì)胞的毒害，是機(jī)體內(nèi)活性氧自由基的天然清除劑。肝臟中過氧化氫酶活性隨飼料蛋白質(zhì)水平的增加呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，其中蛋白質(zhì)水平為25%的組試驗魚肝臟中過氧化氫酶活性顯著低于蛋白質(zhì)水平為35%和45%的組。上述結(jié)果說明尼羅羅非魚幼魚的非特異性免疫功能在一定程度上受到了飼料蛋白質(zhì)水平的影響，適當(dāng)提高飼料蛋白質(zhì)水平可提高機(jī)體抗病能力。

4 結(jié)論

①當(dāng)飼料脂肪水平為9%(分析值為9.52%)時，飼料蛋白質(zhì)水平(25% ～45%)對尼羅羅非魚幼魚的生長性能、體組成和血液學(xué)指標(biāo)影響不大，25%的飼料蛋白質(zhì)水平即可滿足體質(zhì)量為(4.70±0.01)g的尼羅羅非魚幼魚的生長需求。

②適當(dāng)提高飼料蛋白質(zhì)水平可在一定程度上提高尼羅羅非魚幼魚的非特異性免疫功能，主要表現(xiàn)在提高肝臟溶菌酶和過氧化氫酶活性上。

[1]楊弘.我國羅非魚產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀及產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)[J].中國水產(chǎn)，2010(9):6-10.

[2]楊弘，祝璟琳，單航宇.我國羅非魚產(chǎn)業(yè)發(fā)展和思考[J].海洋與漁業(yè)，2011(11):47-50.

[3]EL-SAYED A F M，GARLING D L，Jr.Carbohydrate-to-lipid ratios in diets for tilapia fingerlings[J].Aquaculture，1988，73:157-163.

[4]SIDDIQUI A Q，HOWLANDER M S，ADAM A A.Effects of dietary protein levels on growth，diet conversion and protein utilization in fry and young Nile tilapia，Oreochromis niloticus[J].Aquaculture，1988，70:63-73.

[5]ABDEL-TAWWAB M，AHMAD M H，KHATTAB Y A E，et al.Effect of dietary protein level，initial body weight，and their interaction on the growth，feed utilization，and physiological alterations of Nile tilapia，Oreochromis niloticus(L.)[J].Aquaculture，2010，298:267-274.

[6]HANLEY F.Effects of feeding supplementary diets containing varying levels of lipid on growth，food conversion，and body composition of Nile tilapia，Oreochromis niloticus(L.)[J].Aquaculture，1991，93:323-334.

[7]NRC.Nutrient requirements of poultry[S].Washington，D.C.:National Academy Press，1993.

[8]BRECKA B J，KOHLER C C，WAHL D H.Effects of dietary protein concentration on growth，survival，and body composition of muskellunge Esox musquinongy and tiger muskellunge Esox masquinongy×E.luscius fingerlings[J].Journal of the World Aquaculture Society，1995，26:416-425.

[9]SHIAU S Y，LAN C W.Optimum dietary protein level and protein to energy ratio for growth of grouper(Epinephelus malabaricus)[J].Aquaculture，1996，145:259-266.

[10]PéRES A，ZAMBONINO INFANTE J L，CAHU C L.Dietary regulation of activities and mRNA levels of trypsin and amylase in sea bass(Dicentrarchus labrax)larvae[J].Fish Physiology and Biochemistry，1998，19:145-152.

[11]EGUIA R V，KAMARUDIN M S，SANTIAGO C B.Growth and survival of river catfish Mystus nemurus(Cuvier and Valenciennes)larvae fed isocaloric diets with different protein levels during weaning[J].Journal of Applied Ichthyology，2000，16:104-109.

[12]CHAKRABORTY S C，ROSS L G，ROSS B.The effect of dietary protein level and ration level on excretion of ammonia in common carp，Cyprinus carpio[J].Comparative Biochemistry and Physiology Part A:Physiology，1992，103:801-808.

[13]ENGIN K，CARTER C G.Ammonia and urea excretion rates of juvenile Australian short-finned eel(Anguilla australis australis)as influenced by dietary protein level[J].Aquaculture，2001，194:123-136.

[14]SUN L，CHEN H，HUANG L.Growth，faecal production，nitrogenous excretion and energy budget of juvenile yellow grouper(Epinephelus awoara)relative to ration level[J].Aquaculture，2007，264:228-235.

[15]YANG S D，LIOU C H，LIU F G.Effects of dietary protein level on growth performance，carcass composition and ammonia excretion in juvenile silver perch(Bidyanus bidyanus)[J].Aquaculture，2002，213:363-372.

[16]TIBBETTS S，LALL S P，ANDERSON D M.Dietary protein requirement of juvenile American eel(Anguilla rostrata)fed practical diets[J].Aquaculture，2000，186:145-155.

[17]JAUNCEY K.Nutritional requirement[M]//BEVERIDGE M C M，MCANDREW B J.Tilapias:biology and exploitation.London:Kluwer Academic Press，2000:327-375.

[18]董曉慧，耿旭，郭云學(xué)，等.奧尼羅非魚仔稚魚飼料中適宜蛋白質(zhì)水平的研究[J].中國飼料，2009(7):29-35.

[19]HAFEDH Y S A.Effects of dietary protein on growth and body composition of Nile tilapia，Oreochromis niloticus L.[J].Aquaculture Research，1999，30(5):385-393.

[20]CHOU R L，SU M S，CHEN H Y.Optimal dietary protein and lipid levels for juvenile cobia(Rachycentron canadum)[J].Aquaculture，2001，193:81-89.

[21]EINEN O，ROEM A J.Dietary protein/energy ratios for Atlantic salmon in relation to fish size:growth，feed utilization and slaughter quality[J].Aquaculture Nutrition，1997，3:115-126.

[22]REFSTIE S，STOREBAKKEN T，BAEVERFJORD G，et al.Long-term protein and lipid growth of Atlantic salmon(Salmo salar)fed diets with partial replacement of fish meal by soy proteins products at medium or high lipid level[J].Aquaculture，2001，193:91-106.

[23]GRISDALE-HELLAND B，SHEARER K D，GATLIN D M，et al.Effects of dietary protein and lipid levels on growth，protein digestibility，feed utilization and body composition of Atlantic cod(Cadus morhua)[J].Aquaculture，2008，283:156-162.

[24]KIM L O，LEE S M.Effects of the dietary protein and lipid levels on growth and body composition of bagrid catfish，Pseudobagrus fulvidraco[J].Aquaculture，2005，243:323-329.

[25]DANIELS W H，ROBINSON E H.Protein and energy requirements of juvenile red drum(Sciaenops ocellatus)[J].Aquaculture，1986，53:243-252.

[26]HIDALGO F，ALLIOT E.Influence of water temperature on protein requirement and protein utilization in juvenile sea bass，Dicentrachus labrax[J].Aquaculture，1988，72:115-129.

[27]BROWN M L，NEMATIPOUR G R，GATLIN D M.Dietary protein requirement of juvenile sunshine bass at different salinities[J].The Progressive Fish-Culturist，1992，54:148-156.

[28]YANG S D，LIOU C H，LIU F G.Effects of dietary protein level on growth performance，carcass composition and ammonia excretion in juvenile silver perch(Bidyanus bidyanus)[J].Aquaculture，2002，213:363-372.

[29]KIM K W，WANG X J，CHOI S M，et al.Evaluation of optimum dietary protein-to-energy ratio in juvenile olive flounder Paralichthys olivaceus(Temminck et Schlegel)[J].Aquaculture Research，2004，35(3):250-255.

[30]WELKER T L，LIM C，YILDIRIM-AKSOY M，et al.Growth，immune function，and disease and stress resistance of juvenile Nile tilapia(Oreochromis niloticus)fed graded levels of bovine lactoferrin[J].Aquaculture，2007，262(1):156-162.

[31]BALDI A，BONTEMPO V，DELL’ORTO V，et al.Effects of dietary chromium-yeast in weaning-stressed piglets[J].Canadian Journal of Animal Science，1999，79(3):369-374.

[32]聶國興，明紅，鄭俊林，等.木聚糖酶對尼羅羅非魚血液生理生化指標(biāo)的影響[J].大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報，2009，22(5):361-365.

[33]HIKIMA S，HIKIMA J，ROJTINNAKORN J，et al.Characterization and function of kuruma shrimp lysozyme possessing lytic activity against Vibrio species[J].Gene，2003，316:187-195.

[34]HOFFMANN J A，KAFATOS F C，JANEWAY C A，et al.Phylogenetic perspectives in innate immunity[J].Science，1999，284:1313-1318.

[35]REYES-BECERRIL M，TOVAR-RAMíREZ D，ASCENCIO-VALLE F，et al.Effects of dietary live yeast Debaryomyces hansenii on the immune and antioxidant system in juvenile leopard grouper Mycteroperca rosacea exposed to stress[J].Aquaculture，2008，280(1/2/3/4):39-44.The results indicate that 25%dietary protein level can meet the requirement of growth for juvenile Nile tilapia in the condition of 9%dietary fat level，and properly increasing dietary protein level can improve the hepatic non-specific immune function to some extent.[Chinese Journal of Animal Nutrition，2012，24(12):2384-2392]