李一龍，林金南

南京醫(yī)科大學(xué)附屬無錫人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗科，江蘇 無錫 214023

0 前言

近年來，筆者參考相關(guān)文獻[1-3]，應(yīng)用健康人新鮮血標(biāo)本對科內(nèi)不同品牌的血球分析儀進行定期的溯源性校準(zhǔn)比對，并對各分析儀進行了校準(zhǔn)前后的分析與比對，經(jīng)應(yīng)用觀察，此比對新方法已取得較好效果。

1 材料與方法

1.1 參比血球分析儀

儀器：以2008年購入的1臺LH750血球分析儀（美國Beckman Coulter公司），作為參比的基準(zhǔn)儀器。試劑：稀釋液、溶血素、標(biāo)準(zhǔn)品S-cal（批號：4756）、全血血細胞質(zhì)控物5Cplus（批號：高值870700、中值880700、低值860300）等進口配套產(chǎn)品。本校準(zhǔn)品S-cal的紅、白細胞測量可以用ZBI方法溯源至A級，測量程序為國際公認(rèn)，用于確定分量的參考值。

1.2 待比對儀器

儀器：2008年購入的1臺XS-800i NO:1173血球分析儀（日本SYSMEX株式會社）為待評的比對儀器。試劑：配套試劑、清洗液Cellclean、校準(zhǔn)物SCS-1000（批號：10390525）、質(zhì)控物e CHECK質(zhì)控物（日本SYSMEX株式會社，高、中、低3個水平）。SCS-1000具有國際常規(guī)參考測量程序溯源鏈。

1.3 比對前準(zhǔn)備

（1）溯源與校準(zhǔn)。對各血球分析儀進行相應(yīng)的保養(yǎng)，如管路清洗、維護儀器的硬件裝置，包括儀器的氣路、光路系統(tǒng)等，必須符合相關(guān)的要求，然后測定試劑的空白，本底必須符合要求。所用參比的基準(zhǔn)儀LH750血球分析儀用S-cal標(biāo)準(zhǔn)品（Beckman Coulter公司），定期按校準(zhǔn)程序由Beckman Coulter公司工程師進行儀器溯源性校準(zhǔn)[4]，校準(zhǔn)結(jié)果與靶值作比對，各校準(zhǔn)結(jié)果與靶值之誤差在允許范圍內(nèi)，以示校準(zhǔn)到位。

（2）精密度。① 批內(nèi)精密度：用配套原裝低、中、高3份定值質(zhì)控品，每份連續(xù)重復(fù)測定11次，統(tǒng)計后10次各項目的變異系數(shù)CV值；② 日間精密度：用配套原裝低、中、高3份定值質(zhì)控品，每份連續(xù)重復(fù)測定20天，統(tǒng)計各項目的變異系數(shù)CV值。

（3）線性。用NCCLS EP6-A 文件有關(guān)程序[5]，使用高濃度或濃縮標(biāo)本，與配套稀釋液按比例稀釋，至少各參數(shù)配制5種以上濃度，每種濃度并作2次隨機檢測。將所測精密度在允許范圍內(nèi)的結(jié)果作線性回歸分析，尋出各項目線性范圍。

（4）攜帶污染率。采用國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會制定的程序[6]ICSH (International Committee for Standardization in Hematology)，將高濃度的樣本連續(xù)檢測（H1、H2、H3）后緊接進行 3次低濃度（L1、L2、L3）測定，再根據(jù)式(1)計算攜帶污染率，

（5）總不確定度。用配套定值質(zhì)控品低、中、高3份，應(yīng)用NCCLS EP10-A2文件有關(guān)程序[7]對LH750血球分析儀作總不確定度評價。各參數(shù)應(yīng)低于NCCLS EP10-A2文件允許總不確定度。

（6）校準(zhǔn)判斷標(biāo)準(zhǔn)。 根據(jù)第3版《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[8]進行判斷（表1）。各項目參數(shù)均值與定值的差異全部≤表1中的第1列數(shù)值時，儀器不需進行調(diào)整，記錄檢測數(shù)據(jù)即可；若各參數(shù)均值與定值的差異大于表中的第2列數(shù)值時，需請維修人員核查原因并進行處理；若各參數(shù)的均值與定值的差異在表中第1列與第2列數(shù)值之間時，需對儀器進行調(diào)整。

表1 中華醫(yī)學(xué)會檢驗分會校準(zhǔn)判斷標(biāo)準(zhǔn)（百分?jǐn)?shù)差異）

1.4 比對方法的執(zhí)行

參考按NCCLS EP9-A2的比對方法[9]。作各參數(shù)的回歸分析、相關(guān)性分析，并作線性圖、散點圖以及偏倚圖。

1.5 比對判斷標(biāo)準(zhǔn)

結(jié) 果 應(yīng) 滿 足 精 密 度 ：WBC、RBC、HGB、HCT、PLT檢 測 的 CV均 ＜ 2%；攜 帶 污 染 率 ：WBC、RBC、HGB、HCT、PLT的交叉污染率均＜2%；總重復(fù)性好：除PLT為 外，WBC、RBC、HGB、HCT檢 測 的 CV均 ＜ 2%；線性范圍好：WBC、RBC、HGB、HCT、PLT檢測的相關(guān)系數(shù)接近1.0。

以NCCLS標(biāo)準(zhǔn)文件EP9-A2制定的相關(guān)系數(shù)r＞0.975作為比對判斷規(guī)則，以CLIA’88對室間質(zhì)控評估的允許誤差為依據(jù)，系統(tǒng)誤差(Se)≤允許誤差的1/2為臨床可接受水平，即不同檢測系統(tǒng)間的測定結(jié)果具有可比性。CLIA’88 1/2允許誤差范圍：WBC為7.5%，RBC為3%，HGB為 3.5%，PLT為 12.5%，HCT為 3%；CLIA’88 1/4允 許 誤 差 范 圍 ：WBC為 3.75%，RBC為 1.5%，HGB為1.75%，PLT為6.25%，HCT為1.5%[10]。若有較多的相關(guān)參數(shù)超出上述控制界限，則提示儀器需校準(zhǔn)或需維修。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)果比較

比對前，本室參比血球分析儀LH750批內(nèi)、日間、總不確定度檢測全在限定要求內(nèi)，見表2。比對前，參比LH750與待比SYSMEX XS 800i NO:1173的精密度比較，見表3。

2.2 攜帶污染率檢測

維護前，WBC、RBC、HCT、HGB、PLT分別為：1.58%、-0.44%、0.77%、0.87%、1.1%；維護后，0.99%、0.69%、0.74%、0.25%、0.87%，均小于公司設(shè)置界限2%、2%、2%、2%、2%。

2.3 線性回歸分析

線性：各項目測定濃度（Y）與稀釋倍數(shù)（X）進行線性回歸分析，對回歸系數(shù)作t檢驗，各項目濃度在：白細胞（0.3～300）×109/L，n=10；紅細胞（0.15～8.70）×1012/L，n=9；血色素（1～260）g/L，n=11；血小板（8～2461 ）×109/L，n=8時，P均>0.05，非線性統(tǒng)計有理由認(rèn)為無顯著性意義。

表2 高、中、低3種濃度質(zhì)控品 精密度、不確度度測試

表3 比對前 不同儀器測定精密度比較

表4 LH750與XS-800i NO:1173儀器測定結(jié)果相關(guān)性比較

表5 校正前 參比儀器與比對儀器800i 測定結(jié)果相對偏差%

表6 校正后 參比儀器與比對儀器800i 測定結(jié)果相對偏差%

圖1 校正后750與800i比對的相關(guān)（以WBC為例）

圖2 兩儀器測定結(jié)果比對偏倚（以WBC為例）

圖3 校正后 參比儀器與比對儀器800i 測定結(jié)果相對偏差%

3 討論

由表4可見，LH750與XS 800i NO:1173校準(zhǔn)前后的比對中，WBC、RBC、HGB、HCT、PLT 5項指標(biāo)的相關(guān)系數(shù)r都＞0.975，在醫(yī)學(xué)決定水平處的系統(tǒng)誤差（Se）均小于規(guī)定的允許總誤差（Ea）范圍。然而，由表5、表6可見，血球分析儀XS-800i NO:1173，校準(zhǔn)前比對：這40個比對偏倚值中，僅有29個值（29/40，占72.5%）位于美國CLIA88比對允許誤差的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)；校準(zhǔn)后比對：這40個比對偏倚值中，有39個值（39/40，占97.5%）位于美國CLIA88比對允許誤差的在控標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)。顯然，通過校準(zhǔn)與比對后，各參數(shù)因不同儀器所測的差異得到了有效地縮小。

通過比對工作，我們認(rèn)識到：① 與應(yīng)用前比較，工作人員漸漸養(yǎng)成了嚴(yán)格遵守《全國臨床檢驗操作規(guī)程》、《標(biāo)準(zhǔn)操作程序SOP》進行操作，逐漸提高了對血球分析檢測前、中、后的質(zhì)量監(jiān)控的重視程度。② 與其他分析儀比較，本室LH750血球分析儀測定過程的線性、精密度、準(zhǔn)確度和攜帶污染率等，均達國內(nèi)、國際先進水平。所測結(jié)果與浙江杭州王文娟等[1]結(jié)果基本相近。③ 通過比對，本科室LH750血球分析儀的“不穩(wěn)定的性能特征”得到有效的評估：如醫(yī)學(xué)上偏倚值、最佳條件下的測定誤差（OCV）、已知值的質(zhì)控物在常規(guī)檢驗條件下的誤差（RCVK）、未知值的質(zhì)控物在常規(guī)檢驗條件下的誤差（RCVU）、重要誤差的發(fā)生率等。儀器檢測的準(zhǔn)確性也得到了提高，使各血球分析儀檢測參數(shù)之間具有了可比性與溯源性。例如，2011年4月和7月，2次出現(xiàn)2臺儀器檢測結(jié)果不一致。于是啟用了比對程序，及時作了校準(zhǔn)與比對，調(diào)整檢測參數(shù)，糾正了因儀器維修等而產(chǎn)生的儀器偏倚。④ 通過比對，所作散點圖、偏倚圖、線性圖等具有簡明直觀、易于分析觀察等優(yōu)點。質(zhì)控者根據(jù)圖中色點運行軌跡，便可以迅速判斷出這個時期內(nèi)各項目檢測的狀態(tài)，便于綜合分析、及時發(fā)現(xiàn)問題，實行全面質(zhì)量管理。⑤ 血球分析儀間的比對工作，在室內(nèi)、室間質(zhì)量控制工作中，在鞏固“省參比實驗室”“省重點實驗室”、貫徹落實衛(wèi)生部的《醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法》等方面都起到了積極作用。同時，連續(xù)數(shù)年，我科取得了衛(wèi)生部、江蘇省、無錫市血球分析室間質(zhì)控的優(yōu)秀成績。

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