劉祥

乳腺癌的發(fā)展是一個復(fù)雜的生物學(xué)過程，包括癌基因的激活、抑癌基因的失活以及調(diào)節(jié)凋亡、粘附和血管生成相關(guān)基因的缺陷等[1-3]。NDRG2是一種抑癌基因，在多種腫瘤組織和腫瘤細胞系中表達下調(diào)。

1 材料與方法

1.1 材料 乳腺癌細胞系T47D、MCF7、MDA-MB-453、MDA-MB-231均購自武漢大學(xué)典型培養(yǎng)物典藏中心。質(zhì)粒pcDNA3.1-NRDG2為本實驗室構(gòu)建并測序正確。anti-NDRG2單克隆抗體購自cell signaling公司，anti-beta actin及HRPIgG抗體購自博士德公司。

1.2 方法 Western blot：將胰蛋白酶消化的5×106個細胞用PBS洗2遍，裂解0.5 h后，4 ℃離心10 min，取上清，加入緩沖液，煮沸。將待測蛋白電泳，轉(zhuǎn)膜，封閉非特異性抗體。然后分別加入鼠抗人NRDG2T抗體，4 ℃過夜。次日用TBST洗3遍后，再分別加入HRP標記的抗鼠二抗，室溫孵育2 h，ECL顯色。

2 結(jié)果

2.1 各種乳腺癌細胞系中NDRG2的表達 收取常規(guī)培養(yǎng)的乳腺癌細胞系，檢測mRNA水平及蛋白水平NDRG2的表達，MDA-MB-453和MDA-MB-231細胞中NDRG2的表達較低(圖1)。

圖1 各種乳腺癌細胞系中NDRG2的表達

2.2 轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-NRDG2后，MDA-MB-453細胞中NDRG2的表達 MDA-MB-453細胞系轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-NRDG2后，NRDG2的表達在mRNA水平及蛋白水平均升高(圖2)。

圖2 轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-NRDG2后，MDA-MB-453細胞中NDRG2的表達(1.Blank；2.pcDNA3.1；3.pcDNA3.1-NRDG2)

2.3 高表達NRDG2后，細胞生長曲線 將MDA-MB-453細胞經(jīng)苔盼蘭染色，細胞計數(shù)并繪制生長曲線，高表達NRDG2的細胞生長速度明顯低于NRDG2低表達的細胞 (圖 3)。

圖3 高表達NRDG2后，細胞生長曲線(1.Blank；2.pcDNA3.1；3.pcDNA3.1-NRDG2)

3 討論

本實驗檢測了不同惡性程度的乳腺癌細胞系，發(fā)現(xiàn)NRDG2表達水平與細胞的惡性程度有一定關(guān)系。另外，通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法在MDA-MB-453細胞系中高表達NRDG2，發(fā)現(xiàn)細胞的生長明顯減慢。該實驗提示NRDG2在乳腺癌細胞系中各有不同，且NRDG2影響了乳腺癌細胞的生長。此實驗為針對NRDG2信號通路進行乳腺癌的有效分子治療提供了可靠證據(jù)。

[1] N.C.Popescu，D.B.Zimonjic.Chromosome and gene alterations in breast cancer as markers for diagnosis and prognosis as well as pathogenetic targets for therapy[J].Am.J.Med.Genet，2002，115(3):142-149.

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