高云虹，張淑華

（1.伊春林業(yè)科學(xué)院，黑龍江 伊春153000；2.伊春林業(yè)學(xué)校）

四孢蘑菇，俗稱(chēng)雷窩子，學(xué)名蘑菇（Agaricus campestris L.：Fr.）是優(yōu)良食用菌，試驗(yàn)對(duì)小白鼠肉瘤及艾氏腹水癌的抑制率均為80%。子實(shí)體中等至稍大。小興安嶺林區(qū)，冬長(zhǎng)寒冷，夏季溫暖，降水豐富，菇類(lèi)產(chǎn)量以7、8月為最盛。伊春林區(qū)占據(jù)了小興安嶺大部，浩瀚的林海，濕潤(rùn)的氣候，孕育了多種多樣野生食用菌的生長(zhǎng)，使林區(qū)擁有豐富的野生食用菌資源。有代表性的種類(lèi)466種，其中食用菌226種，藥用菌33種，食藥兼用55種，有毒菌52種。其它菌100種。然而如此豐富的食用菌資源卻沒(méi)有得到充分開(kāi)發(fā)利用，在可食性食用菌中，僅有黑木耳等極少數(shù)被馴化栽培，而大多數(shù)未被開(kāi)發(fā)利用。目前伊春正處在經(jīng)濟(jì)轉(zhuǎn)型、第三次創(chuàng)業(yè)的關(guān)鍵時(shí)期，食用菌是最好的替代產(chǎn)業(yè)，在木屑資源已近枯竭的形勢(shì)下，草腐菌的栽培具有極其廣闊的發(fā)展空間和重要的現(xiàn)實(shí)意義。四孢蘑菇既是伊春的野生食用菌，又是草腐菌，因此，開(kāi)展了其馴化栽培技術(shù)的研究。

1 材料和方法

1.1 生物學(xué)特性測(cè)定

1.1.1 供試菌種

四孢蘑菇（Agaricus campestris L.：Fr.），傘菌目、蘑菇科。采自伊春市區(qū)北山。

將四孢蘑菇進(jìn)行組織分離。把分離并純化的菌種接種到PDA斜面培養(yǎng)基上，在22℃溫度下連續(xù)培養(yǎng)20d，由此進(jìn)行生物學(xué)特性測(cè)定。

1.1.2 溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

制作PDA培養(yǎng)基，分裝于試管，每支試管裝12mL，經(jīng)126℃滅菌30min，制成斜面，將供試菌種分別接種，每管接入直徑5mm的圓形菌落一塊。每4支一組分別置于5、15、18、20、22、25、28、30℃的恒溫培養(yǎng)箱中，連續(xù)培養(yǎng)20d，測(cè)菌落直徑，并比較菌落直徑和菌絲生長(zhǎng)速度、菌絲長(zhǎng)度。

1.1.3 酸堿度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

用1N的NaOH和1N的HCl將PDA培養(yǎng)基的pH 值 調(diào) 節(jié)為：2.58、3.10、3.75、4.44、5.59、6.00、6.33、7.09、8.15、9.02，制成試管斜面培養(yǎng)基。每管接入直徑5mm的圓形菌落一塊，將菌種接到斜面中央。每個(gè)pH值重復(fù)4次，置于22℃恒溫箱中連續(xù)培養(yǎng)20d，測(cè)定菌落直徑，觀察記錄菌絲生長(zhǎng)速度。

1.1.4 四孢蘑菇對(duì)碳源和氮源的利用

供試碳源：可溶性淀粉、甘露醇、麥芽糖、蔗糖、葡萄糖、乳糖；

供試氮源：硝酸銨、酵母粉、硫酸銨、硝酸鉀、蛋白胨、尿素；

測(cè)量碳源的基本培養(yǎng)基：KH2PO40.46g、K2HPO41g、MgSO40.5g、瓊脂15g、蛋白胨2g、水1000mL，裝入500mL燒杯中，每杯裝入100mL，分別加入20g碳素不同的碳源。分裝于試管中，每管12mL經(jīng)126℃滅菌30min，制成斜面，每管接入直徑5mm的菌落一塊。每一碳源重復(fù)四次，置于22℃恒溫箱中連續(xù)培養(yǎng)20d，測(cè)量菌落直徑。

測(cè)量氮源的基本培養(yǎng)基：葡萄糖20g、KH2PO40.46g、K2HPO41g，MgSO40.5g，瓊脂15g、水1000 mL。

其它方法同碳源。只是每配方中加入的氮源量為2g。

1.1.5 碳氮比對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

以麥芽糖為碳源、硝酸銨為氮源，以瓊脂20g、水1000mL，作基礎(chǔ)培養(yǎng)基，配制成C／N分別為10∶1、20∶1、30∶1、40∶1、50∶1、60∶1、70∶1、80∶1共8種配方，分別裝入試管，126℃滅菌30min，擺成斜面，無(wú)菌接入5mm的菌塊，置于斜面中央。同一碳氮比設(shè)4個(gè)重復(fù)，置于22℃恒溫箱中，連續(xù)培養(yǎng)20d，測(cè)量菌落直徑。

1.1.6 氧氣對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

用PDA培養(yǎng)基分裝于試管中，每管12mL。126℃滅菌30min。擺成斜面，無(wú)菌接入5mm的菌塊，置于斜面中央。將試管口的棉塞及與試管口接觸的邊緣用塑料薄膜包嚴(yán)，防止氧氣進(jìn)入。設(shè)4個(gè)重復(fù)，并設(shè)1組對(duì)照。然后放入22℃恒溫箱中，連續(xù)培養(yǎng)20d，測(cè)量菌落直徑，觀察菌絲生長(zhǎng)勢(shì)。

1.2 馴化栽培試驗(yàn)

1.2.1 母種培養(yǎng)基篩選

PDA：馬 鈴 薯 200g，葡 萄 糖 20g，瓊 脂 20g，水1000mL；

PDA1：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，玉米粉20g，水1000mL；

4號(hào)：玉米粉30g，葡萄糖20g，磷酸氫二鉀1g，硫酸鎂0.5g，蛋白胨1g，瓊脂22g，水1000mL；

5號(hào)：燕麥片30g，瓊脂20g，水1000mL；

6號(hào)：玉米粉40g，瓊脂20g，水1000mL；

11號(hào)：葡萄糖10g，麥芽糖10g，酵母膏4g，瓊脂18g，水1000mL；

16號(hào)：葡萄糖20g，磷酸氫二鉀0.1g，蛋白胨2g，硫酸鎂0.5g，酵母浸膏1g，瓊脂20g，磷酸二氫鉀0.4g，水1000mL。

分別制作以上培養(yǎng)基，分裝每管12mL。126℃滅菌30min。擺成斜面，無(wú)菌接入5mm的菌塊，置于斜面中央。每個(gè)培養(yǎng)基接種4支，然后放入22℃恒溫箱中，連續(xù)培養(yǎng)20d。測(cè)量菌落直徑。

1.2.2 原種培養(yǎng)基供試配方

1號(hào)：干麥粒99%，石膏1%；

2號(hào)：玉米粒49%，闊葉木屑50%，石膏1%；

3號(hào)：馬糞50%，棉籽殼48%，蔗糖1%，石膏1%；

7號(hào)：木屑56.5%，玉米芯30%，麥麩12%，石膏1%，石灰0.5%；

8號(hào)：玉米粒50%，木屑39%，麥麩10%，石膏1%；

9號(hào)：棉籽殼99%，石膏1%；

10號(hào)：玉米粒100%。

將以上7種配方分別拌料，濕度調(diào)到60%，用裝袋機(jī)裝袋（除含糧食的配方用手工裝袋外），129℃滅菌1～1.5h，分別接入母種，每支接種4～6袋。放入22℃恒溫箱中，連續(xù)培養(yǎng)20d，測(cè)量菌絲長(zhǎng)度。

1.2.3 栽培種培養(yǎng)基配方的篩選

12號(hào)：干馬糞60%，稻草38.5%，石膏1%，石灰0.5%；

13號(hào)：干牛糞32%，棉殼65%，石膏1%，石灰2%；

14號(hào)：稻草86%，豆餅5%，玉米粉5%，石膏1%，尿素0.5%，過(guò)磷酸鈣1%，石灰1.5%；

15號(hào)：馬糞50%，棉殼48%，蔗糖0.5%，磷酸二氫鉀0.5%，石膏1%；

17號(hào)：木屑78%，麥麩20%，蔗糖1%，石膏1%。

先將以上各培養(yǎng)料分別拌料，濕度在55%～60%，用裝袋機(jī)裝袋，袋的規(guī)格17cm×33cm，聚乙烯塑料袋，100℃滅菌10h。冷卻接種。置室溫下培養(yǎng)。測(cè)量菌絲長(zhǎng)度。

1.3 栽培試驗(yàn)

袋栽、室內(nèi)箱栽及室外床栽。

1.3.1 袋栽試驗(yàn)

選用發(fā)滿菌的栽培種，將袋口打開(kāi)，將塑料袋拉直，其上覆蓋塑料薄膜，在室內(nèi)觀察出菇情況。

1.3.2 室內(nèi)箱栽

秋季室內(nèi)栽培。用保溫箱，選發(fā)滿菌的栽培種，將塑料袋脫去，將菌種掰碎，克霉靈、白灰、塑料布和從山上取回腐殖質(zhì)土備用。具體操作：先將塑料布裁成預(yù)定規(guī)格并用克霉靈消毒，鋪于箱底及四周，按照料、菌、料、菌的順序播種，最上層覆蓋3cm厚的拌有白灰的腐殖質(zhì)土，蓋上塑料布。記錄播種日期、出菇日期、溫度及濕度。

1.3.3 室外床栽

春季室外床栽。試驗(yàn)地位于伊春市區(qū)北山，8林班15小班，以紅松林為主，典型暗棕壤，下木毛榛，下草繡線菊，中坡。具體做法：先在林中空地按南北走向挖20cm深、寬100cm的溝，將脫去塑料袋的栽培種（1.0～1.1kg／袋）躺倒放于溝內(nèi)，其上覆蓋3cm的拌有白灰的土，蓋上塑料布。用土壓上，防止被風(fēng)刮起。10d后，將塑料布揭起，在床上支拱形棚，以利于出菇。記錄播種日期、出菇日期、出菇產(chǎn)量、溫度及濕度。

2 結(jié)果與分析

2.1 生物學(xué)特性

2.1.1 溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響。見(jiàn)圖1。

圖1 溫度－菌絲生長(zhǎng)量曲線圖

圖1顯示，溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響極為顯著。菌絲生長(zhǎng)的溫度范圍是5～25℃，28℃停止生長(zhǎng)，最適溫度是20℃（20～25℃）。

2.1.2 pH值對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

圖2 pH值－菌絲生長(zhǎng)量曲線圖

從圖2顯示，pH值對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響極為顯著。菌絲生長(zhǎng)的pH范圍是3.15～9.02，最適是7，其次是6、6.33。pH＜3.15時(shí)不生長(zhǎng)。

2.1.3 四孢蘑菇對(duì)碳源的利用

由表1知，碳源對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響極為顯著。菌絲生長(zhǎng)的最佳碳源是麥芽糖、葡萄糖，其次是乳糖、淀粉，最差的是甘露醇和蔗糖。

2.1.4 四孢蘑菇對(duì)氮源的利用

表2 氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響的多重比較結(jié)果 mm

從表2知，氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響極為顯著。菌絲除在尿素上不生長(zhǎng)以外，其余均生長(zhǎng)，最好的是酵母粉、硫酸銨、硝酸鉀，其次是硝酸銨、蛋白胨。2.1.5 碳氮比對(duì)四孢蘑菇菌絲生長(zhǎng)的影響

表3 碳氮比對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響的多重比較結(jié)果 mm

由表3得知，碳氮比對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響不顯著。比較而言，菌絲生長(zhǎng)的最佳碳氮比為30∶1、60∶1，其次20∶1、40∶1、10∶1、50∶1，最差的是80∶1。

2.1.6 氧氣對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

氧氣對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響不顯著。菌絲在無(wú)氧條件下生長(zhǎng)1.24mm／d、在有氧條件下0.9mm／d。

2.3 馴化栽培的結(jié)果

2.2.1 母種培養(yǎng)基的篩選

表4 不同培養(yǎng)基對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響的多重比較結(jié)果mm

從表4知：菌絲在不同培養(yǎng)基上生長(zhǎng)差異性極為顯著。在16號(hào)、11號(hào)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最好，其次是PDA、4號(hào)、5號(hào)、PDA1，最差的是6號(hào)。

2.2.2 原種培養(yǎng)基的篩選

表5 不同原種培養(yǎng)基對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響的多重比較結(jié)果mm

由表5結(jié)果：不同原種培養(yǎng)基對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響極為顯著。在1號(hào)、8號(hào)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最好；其次是3號(hào) 、2號(hào) 、7號(hào) 、9號(hào) 、10號(hào) 。

2.2.3 栽培種培養(yǎng)基的篩選

表6 不同栽培種培養(yǎng)基對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響的多重比較結(jié)果mm

通過(guò)表5知：不同栽培種培養(yǎng)料對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響不顯著。相對(duì)比較菌絲在15號(hào)、13號(hào)上生長(zhǎng)最好；其次是12號(hào)、14號(hào)；最差的是17號(hào)。

2.2.4 袋栽試驗(yàn)

經(jīng)室內(nèi)及室外袋栽出菇試驗(yàn)，均未出菇。

2.2.5 四孢蘑菇馴化栽培的生物學(xué)效率

表7 人工栽培的產(chǎn)量及生物學(xué)效率

表7結(jié)果表明：四孢蘑菇的人工栽培是完全可以實(shí)現(xiàn)的。其生物學(xué)效率為38%。子實(shí)體形成生長(zhǎng)階段的溫度范圍13～27℃，最適是15～19℃。原基形成時(shí)期對(duì)空氣濕度要求不高60%以上就可以，子實(shí)體分化及發(fā)育濕度范圍是90%～95%。人工栽培必須熟料覆土，否則不能出菇。

3 結(jié)論

3.1 四孢蘑菇可人工栽培。

3.2 四孢蘑菇的生物學(xué)特性。

菌絲生長(zhǎng)的溫度范圍是5～25℃，28℃停止生長(zhǎng)，最適溫度是20℃（20～25℃）；pH范圍是3.15～9.02，最適是7，其次是6、6.33。pH＜3.15時(shí)不生長(zhǎng)。最好碳源是麥芽糖、葡萄糖，其次是乳糖、淀粉，最差的是甘露醇和蔗糖；最好氮源是酵母粉、硫酸銨、硝酸鉀，其次是硝酸銨、蛋白胨，最差的是尿素；最佳碳氮比為30∶1，其次20∶1、40∶1、10∶1、50∶1，最差的是80∶1；氧氣對(duì)蘑菇菌絲生長(zhǎng)的影響不顯著，菌絲在生長(zhǎng)初期對(duì)氧氣的要求不嚴(yán)格，甚至比有氧條件下生長(zhǎng)還要快，后期需求較多。

3.3 四孢蘑菇最佳培養(yǎng)基

母種最佳培養(yǎng)基：6號(hào)：葡萄糖20g，磷酸氫二鉀0.1g，蛋白胨2g，硫酸鎂0.5g，酵母浸膏1g，瓊脂20g，磷酸二氫鉀0.4g，水1000mL；11號(hào)：葡萄糖10g，麥芽糖10g，酵母膏4g，瓊脂18g，水1000mL。

原種最佳培養(yǎng)基：1號(hào)：干麥粒99%，石膏1%；8號(hào)：玉米粒50%，木屑39%，麥麩10%，石膏0.5%。

栽培種最佳培養(yǎng)基：15號(hào)：馬糞50%，棉殼48%，蔗糖0.5%，磷酸二氫鉀0.5%，石膏1%；13號(hào)：干牛糞32%，棉殼65%，石膏1%，石灰2%。

3.4 四孢蘑菇子實(shí)體形成生長(zhǎng)階段的溫度范圍13～27℃，最適是15～19℃。原基形成時(shí)期對(duì)空氣濕度＞60%，子實(shí)體分化及發(fā)育濕度范圍是90%～95%。人工栽培的生物學(xué)效率為38%。四孢蘑菇袋栽不能出菇。人工栽培必須熟料覆土，否則不能出菇。

本次研究的是馴化栽培技術(shù)，在提高產(chǎn)量等方面還有待更深入的探究。

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