高云虹,張淑華
(1.伊春林業(yè)科學(xué)院,黑龍江 伊春153000;2.伊春林業(yè)學(xué)校)
四孢蘑菇,俗稱(chēng)雷窩子,學(xué)名蘑菇(Agaricus campestris L.:Fr.)是優(yōu)良食用菌,試驗(yàn)對(duì)小白鼠肉瘤及艾氏腹水癌的抑制率均為80%。子實(shí)體中等至稍大。小興安嶺林區(qū),冬長(zhǎng)寒冷,夏季溫暖,降水豐富,菇類(lèi)產(chǎn)量以7、8月為最盛。伊春林區(qū)占據(jù)了小興安嶺大部,浩瀚的林海,濕潤(rùn)的氣候,孕育了多種多樣野生食用菌的生長(zhǎng),使林區(qū)擁有豐富的野生食用菌資源。有代表性的種類(lèi)466種,其中食用菌226種,藥用菌33種,食藥兼用55種,有毒菌52種。其它菌100種。然而如此豐富的食用菌資源卻沒(méi)有得到充分開(kāi)發(fā)利用,在可食性食用菌中,僅有黑木耳等極少數(shù)被馴化栽培,而大多數(shù)未被開(kāi)發(fā)利用。目前伊春正處在經(jīng)濟(jì)轉(zhuǎn)型、第三次創(chuàng)業(yè)的關(guān)鍵時(shí)期,食用菌是最好的替代產(chǎn)業(yè),在木屑資源已近枯竭的形勢(shì)下,草腐菌的栽培具有極其廣闊的發(fā)展空間和重要的現(xiàn)實(shí)意義。四孢蘑菇既是伊春的野生食用菌,又是草腐菌,因此,開(kāi)展了其馴化栽培技術(shù)的研究。
1.1 生物學(xué)特性測(cè)定
1.1.1 供試菌種
四孢蘑菇(Agaricus campestris L.:Fr.),傘菌目、蘑菇科。采自伊春市區(qū)北山。
將四孢蘑菇進(jìn)行組織分離。把分離并純化的菌種接種到PDA斜面培養(yǎng)基上,在22℃溫度下連續(xù)培養(yǎng)20d,由此進(jìn)行生物學(xué)特性測(cè)定。
1.1.2 溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響
制作PDA培養(yǎng)基,分裝于試管,每支試管裝12mL,經(jīng)126℃滅菌30min,制成斜面,將供試菌種分別接種,每管接入直徑5mm的圓形菌落一塊。每4支一組分別置于5、15、18、20、22、25、28、30℃的恒溫培養(yǎng)箱中,連續(xù)培養(yǎng)20d,測(cè)菌落直徑,并比較菌落直徑和菌絲生長(zhǎng)速度、菌絲長(zhǎng)度。
1.1.3 酸堿度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響
用1N的NaOH和1N的HCl將PDA培養(yǎng)基的pH 值 調(diào) 節(jié)為:2.58、3.10、3.75、4.44、5.59、6.00、6.33、7.09、8.15、9.02,制成試管斜面培養(yǎng)基。每管接入直徑5mm的圓形菌落一塊,將菌種接到斜面中央。每個(gè)pH值重復(fù)4次,置于22℃恒溫箱中連續(xù)培養(yǎng)20d,測(cè)定菌落直徑,觀察記錄菌絲生長(zhǎng)速度。
1.1.4 四孢蘑菇對(duì)碳源和氮源的利用
供試碳源:可溶性淀粉、甘露醇、麥芽糖、蔗糖、葡萄糖、乳糖;
供試氮源:硝酸銨、酵母粉、硫酸銨、硝酸鉀、蛋白胨、尿素;
測(cè)量碳源的基本培養(yǎng)基:KH2PO40.46g、K2HPO41g、MgSO40.5g、瓊脂15g、蛋白胨2g、水1000mL,裝入500mL燒杯中,每杯裝入100mL,分別加入20g碳素不同的碳源。分裝于試管中,每管12mL經(jīng)126℃滅菌30min,制成斜面,每管接入直徑5mm的菌落一塊。每一碳源重復(fù)四次,置于22℃恒溫箱中連續(xù)培養(yǎng)20d,測(cè)量菌落直徑。
測(cè)量氮源的基本培養(yǎng)基:葡萄糖20g、KH2PO40.46g、K2HPO41g,MgSO40.5g,瓊脂15g、水1000 mL。
其它方法同碳源。只是每配方中加入的氮源量為2g。
1.1.5 碳氮比對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響
以麥芽糖為碳源、硝酸銨為氮源,以瓊脂20g、水1000mL,作基礎(chǔ)培養(yǎng)基,配制成C/N分別為10∶1、20∶1、30∶1、40∶1、50∶1、60∶1、70∶1、80∶1共8種配方,分別裝入試管,126℃滅菌30min,擺成斜面,無(wú)菌接入5mm的菌塊,置于斜面中央。同一碳氮比設(shè)4個(gè)重復(fù),置于22℃恒溫箱中,連續(xù)培養(yǎng)20d,測(cè)量菌落直徑。
1.1.6 氧氣對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響
用PDA培養(yǎng)基分裝于試管中,每管12mL。126℃滅菌30min。擺成斜面,無(wú)菌接入5mm的菌塊,置于斜面中央。將試管口的棉塞及與試管口接觸的邊緣用塑料薄膜包嚴(yán),防止氧氣進(jìn)入。設(shè)4個(gè)重復(fù),并設(shè)1組對(duì)照。然后放入22℃恒溫箱中,連續(xù)培養(yǎng)20d,測(cè)量菌落直徑,觀察菌絲生長(zhǎng)勢(shì)。
1.2 馴化栽培試驗(yàn)
1.2.1 母種培養(yǎng)基篩選
PDA:馬 鈴 薯 200g,葡 萄 糖 20g,瓊 脂 20g,水1000mL;
PDA1:馬鈴薯200g,葡萄糖20g,瓊脂20g,玉米粉20g,水1000mL;
4號(hào):玉米粉30g,葡萄糖20g,磷酸氫二鉀1g,硫酸鎂0.5g,蛋白胨1g,瓊脂22g,水1000mL;
5號(hào):燕麥片30g,瓊脂20g,水1000mL;
6號(hào):玉米粉40g,瓊脂20g,水1000mL;
11號(hào):葡萄糖10g,麥芽糖10g,酵母膏4g,瓊脂18g,水1000mL;
16號(hào):葡萄糖20g,磷酸氫二鉀0.1g,蛋白胨2g,硫酸鎂0.5g,酵母浸膏1g,瓊脂20g,磷酸二氫鉀0.4g,水1000mL。
分別制作以上培養(yǎng)基,分裝每管12mL。126℃滅菌30min。擺成斜面,無(wú)菌接入5mm的菌塊,置于斜面中央。每個(gè)培養(yǎng)基接種4支,然后放入22℃恒溫箱中,連續(xù)培養(yǎng)20d。測(cè)量菌落直徑。
1.2.2 原種培養(yǎng)基供試配方
1號(hào):干麥粒99%,石膏1%;
2號(hào):玉米粒49%,闊葉木屑50%,石膏1%;
3號(hào):馬糞50%,棉籽殼48%,蔗糖1%,石膏1%;
7號(hào):木屑56.5%,玉米芯30%,麥麩12%,石膏1%,石灰0.5%;
8號(hào):玉米粒50%,木屑39%,麥麩10%,石膏1%;
9號(hào):棉籽殼99%,石膏1%;
10號(hào):玉米粒100%。
將以上7種配方分別拌料,濕度調(diào)到60%,用裝袋機(jī)裝袋(除含糧食的配方用手工裝袋外),129℃滅菌1~1.5h,分別接入母種,每支接種4~6袋。放入22℃恒溫箱中,連續(xù)培養(yǎng)20d,測(cè)量菌絲長(zhǎng)度。
1.2.3 栽培種培養(yǎng)基配方的篩選
12號(hào):干馬糞60%,稻草38.5%,石膏1%,石灰0.5%;
13號(hào):干牛糞32%,棉殼65%,石膏1%,石灰2%;
14號(hào):稻草86%,豆餅5%,玉米粉5%,石膏1%,尿素0.5%,過(guò)磷酸鈣1%,石灰1.5%;
15號(hào):馬糞50%,棉殼48%,蔗糖0.5%,磷酸二氫鉀0.5%,石膏1%;
17號(hào):木屑78%,麥麩20%,蔗糖1%,石膏1%。
先將以上各培養(yǎng)料分別拌料,濕度在55%~60%,用裝袋機(jī)裝袋,袋的規(guī)格17cm×33cm,聚乙烯塑料袋,100℃滅菌10h。冷卻接種。置室溫下培養(yǎng)。測(cè)量菌絲長(zhǎng)度。
1.3 栽培試驗(yàn)
袋栽、室內(nèi)箱栽及室外床栽。
1.3.1 袋栽試驗(yàn)
選用發(fā)滿菌的栽培種,將袋口打開(kāi),將塑料袋拉直,其上覆蓋塑料薄膜,在室內(nèi)觀察出菇情況。
1.3.2 室內(nèi)箱栽
秋季室內(nèi)栽培。用保溫箱,選發(fā)滿菌的栽培種,將塑料袋脫去,將菌種掰碎,克霉靈、白灰、塑料布和從山上取回腐殖質(zhì)土備用。具體操作:先將塑料布裁成預(yù)定規(guī)格并用克霉靈消毒,鋪于箱底及四周,按照料、菌、料、菌的順序播種,最上層覆蓋3cm厚的拌有白灰的腐殖質(zhì)土,蓋上塑料布。記錄播種日期、出菇日期、溫度及濕度。
1.3.3 室外床栽
春季室外床栽。試驗(yàn)地位于伊春市區(qū)北山,8林班15小班,以紅松林為主,典型暗棕壤,下木毛榛,下草繡線菊,中坡。具體做法:先在林中空地按南北走向挖20cm深、寬100cm的溝,將脫去塑料袋的栽培種(1.0~1.1kg/袋)躺倒放于溝內(nèi),其上覆蓋3cm的拌有白灰的土,蓋上塑料布。用土壓上,防止被風(fēng)刮起。10d后,將塑料布揭起,在床上支拱形棚,以利于出菇。記錄播種日期、出菇日期、出菇產(chǎn)量、溫度及濕度。
2.1 生物學(xué)特性
2.1.1 溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響。見(jiàn)圖1。
圖1 溫度-菌絲生長(zhǎng)量曲線圖
圖1顯示,溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響極為顯著。菌絲生長(zhǎng)的溫度范圍是5~25℃,28℃停止生長(zhǎng),最適溫度是20℃(20~25℃)。
2.1.2 pH值對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響
圖2 pH值-菌絲生長(zhǎng)量曲線圖
從圖2顯示,pH值對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響極為顯著。菌絲生長(zhǎng)的pH范圍是3.15~9.02,最適是7,其次是6、6.33。pH<3.15時(shí)不生長(zhǎng)。
2.1.3 四孢蘑菇對(duì)碳源的利用
由表1知,碳源對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響極為顯著。菌絲生長(zhǎng)的最佳碳源是麥芽糖、葡萄糖,其次是乳糖、淀粉,最差的是甘露醇和蔗糖。
2.1.4 四孢蘑菇對(duì)氮源的利用
表2 氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響的多重比較結(jié)果 mm
從表2知,氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響極為顯著。菌絲除在尿素上不生長(zhǎng)以外,其余均生長(zhǎng),最好的是酵母粉、硫酸銨、硝酸鉀,其次是硝酸銨、蛋白胨。2.1.5 碳氮比對(duì)四孢蘑菇菌絲生長(zhǎng)的影響
表3 碳氮比對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響的多重比較結(jié)果 mm
由表3得知,碳氮比對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響不顯著。比較而言,菌絲生長(zhǎng)的最佳碳氮比為30∶1、60∶1,其次20∶1、40∶1、10∶1、50∶1,最差的是80∶1。
2.1.6 氧氣對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響
氧氣對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響不顯著。菌絲在無(wú)氧條件下生長(zhǎng)1.24mm/d、在有氧條件下0.9mm/d。
2.3 馴化栽培的結(jié)果
2.2.1 母種培養(yǎng)基的篩選
表4 不同培養(yǎng)基對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響的多重比較結(jié)果mm
從表4知:菌絲在不同培養(yǎng)基上生長(zhǎng)差異性極為顯著。在16號(hào)、11號(hào)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最好,其次是PDA、4號(hào)、5號(hào)、PDA1,最差的是6號(hào)。
2.2.2 原種培養(yǎng)基的篩選
表5 不同原種培養(yǎng)基對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響的多重比較結(jié)果mm
由表5結(jié)果:不同原種培養(yǎng)基對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響極為顯著。在1號(hào)、8號(hào)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最好;其次是3號(hào) 、2號(hào) 、7號(hào) 、9號(hào) 、10號(hào) 。
2.2.3 栽培種培養(yǎng)基的篩選
表6 不同栽培種培養(yǎng)基對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響的多重比較結(jié)果mm
通過(guò)表5知:不同栽培種培養(yǎng)料對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響不顯著。相對(duì)比較菌絲在15號(hào)、13號(hào)上生長(zhǎng)最好;其次是12號(hào)、14號(hào);最差的是17號(hào)。
2.2.4 袋栽試驗(yàn)
經(jīng)室內(nèi)及室外袋栽出菇試驗(yàn),均未出菇。
2.2.5 四孢蘑菇馴化栽培的生物學(xué)效率
表7 人工栽培的產(chǎn)量及生物學(xué)效率
表7結(jié)果表明:四孢蘑菇的人工栽培是完全可以實(shí)現(xiàn)的。其生物學(xué)效率為38%。子實(shí)體形成生長(zhǎng)階段的溫度范圍13~27℃,最適是15~19℃。原基形成時(shí)期對(duì)空氣濕度要求不高60%以上就可以,子實(shí)體分化及發(fā)育濕度范圍是90%~95%。人工栽培必須熟料覆土,否則不能出菇。
3.1 四孢蘑菇可人工栽培。
3.2 四孢蘑菇的生物學(xué)特性。
菌絲生長(zhǎng)的溫度范圍是5~25℃,28℃停止生長(zhǎng),最適溫度是20℃(20~25℃);pH范圍是3.15~9.02,最適是7,其次是6、6.33。pH<3.15時(shí)不生長(zhǎng)。最好碳源是麥芽糖、葡萄糖,其次是乳糖、淀粉,最差的是甘露醇和蔗糖;最好氮源是酵母粉、硫酸銨、硝酸鉀,其次是硝酸銨、蛋白胨,最差的是尿素;最佳碳氮比為30∶1,其次20∶1、40∶1、10∶1、50∶1,最差的是80∶1;氧氣對(duì)蘑菇菌絲生長(zhǎng)的影響不顯著,菌絲在生長(zhǎng)初期對(duì)氧氣的要求不嚴(yán)格,甚至比有氧條件下生長(zhǎng)還要快,后期需求較多。
3.3 四孢蘑菇最佳培養(yǎng)基
母種最佳培養(yǎng)基:6號(hào):葡萄糖20g,磷酸氫二鉀0.1g,蛋白胨2g,硫酸鎂0.5g,酵母浸膏1g,瓊脂20g,磷酸二氫鉀0.4g,水1000mL;11號(hào):葡萄糖10g,麥芽糖10g,酵母膏4g,瓊脂18g,水1000mL。
原種最佳培養(yǎng)基:1號(hào):干麥粒99%,石膏1%;8號(hào):玉米粒50%,木屑39%,麥麩10%,石膏0.5%。
栽培種最佳培養(yǎng)基:15號(hào):馬糞50%,棉殼48%,蔗糖0.5%,磷酸二氫鉀0.5%,石膏1%;13號(hào):干牛糞32%,棉殼65%,石膏1%,石灰2%。
3.4 四孢蘑菇子實(shí)體形成生長(zhǎng)階段的溫度范圍13~27℃,最適是15~19℃。原基形成時(shí)期對(duì)空氣濕度>60%,子實(shí)體分化及發(fā)育濕度范圍是90%~95%。人工栽培的生物學(xué)效率為38%。四孢蘑菇袋栽不能出菇。人工栽培必須熟料覆土,否則不能出菇。
本次研究的是馴化栽培技術(shù),在提高產(chǎn)量等方面還有待更深入的探究。
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