趙洪超

（沈陽(yáng)市蘇家屯區(qū)中醫(yī)醫(yī)院制劑室，遼寧 沈陽(yáng)110101）

香附為莎草科植物莎草Rhizoma cyperi rotundusL.的干燥根莖，主產(chǎn)于山東、浙江等地，有行氣解郁，調(diào)經(jīng)止痛的功效，常用于治療肝郁氣滯，胸、脅、脘腹脹痛，消化不良，胸脘痞悶，寒疝腹痛，乳房脹痛，月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉痛經(jīng)[1]，被歷代中醫(yī)譽(yù)為“氣病之總司，女科之元帥”[2]。香附中主要成分為揮發(fā)油類，另外，文獻(xiàn)報(bào)道還有黃酮類、三萜類、糖類、生物堿類、酚類和萜類等[3]。香附具有抑制胃排空，促進(jìn)腸傳輸?shù)淖饔肹4]。因此，對(duì)香附揮發(fā)油以外成分的深入研究對(duì)于揭示香附廣泛的藥理作用是十分有必要的。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UV-1800型紫外分光光度計(jì)（北京瑞利分析儀器有限公司）；HSS型電子恒溫水浴鍋（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；SHZ-DⅢ型循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）。

1.2 試藥

香附藥材（遼寧本溪三藥有限公司）；蘆丁對(duì)照品（供含量測(cè)定用，批號(hào)：080-9002，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；亞硝酸鈉（沈陽(yáng)化學(xué)試劑廠）；硝酸鋁（天津天河化學(xué)試劑廠）；氫氧化鈉（天津福晨化學(xué)試劑廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 紫外分光光度法

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱定蘆丁對(duì)照品9.27mg，用甲醇溶解，定容于50mL量瓶中，得到濃度為0.1854 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.1.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液2mL，置于10mL容量瓶中，并依次加入0.3mL的5%NaNO2溶液，搖勻，靜置6min，0.3mL的10%A1（NO3）3溶液，搖勻，靜置6min，4.0 mL的4%NaOH溶液，搖勻，靜置15min，于200～800nm范圍內(nèi)進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，結(jié)果在510nm有最大吸收峰，故確定檢測(cè)波長(zhǎng)為510nm。

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別精密吸取1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL、3.5mL、4.0mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液置于10mL容量瓶中，并依次加入0.3mL的5%NaNO2溶液，搖勻，靜置6min，0.3mL的10%A1（NO3）3溶液，搖勻，靜置6min，4.0mL的4%NaOH溶液，搖勻，靜置15min。再取甲醇定容。用紫外分光光度計(jì)在510nm測(cè)定對(duì)照品溶液的吸光度，對(duì)照品溶液與吸光度的線性關(guān)系為y=10.128x+0.0685，R=0.9995。香附中總黃酮以蘆丁計(jì)在0.02～0.08mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2 香附總黃酮提取工藝考察

2.2.1 香附總黃酮提取醇濃度考察

①稱取香附粗粉（過(guò)60目篩）7份，每份5g，置100mL 圓底燒瓶中，分別用水、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%的乙醇各50mL，加熱回流提取1h，放冷，過(guò)濾，濾液定容至50mL量瓶，作為供試品溶液。②取以上供試品溶液0.2mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定吸光度，計(jì)算總黃酮含量。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 香附總黃酮提取醇濃度考察結(jié)果

由表1可知，乙醇濃度為60%時(shí)香附總黃酮提取含量最高，故確定60%乙醇為香附總黃酮的最佳提取醇濃度。

2.2.2 香附總黃酮提取方法考察

①超聲提取法：稱取香附粗粉（過(guò)60目篩）5g，置100mL 具塞錐形瓶中， 加60%乙醇50mL，超聲提取1h，過(guò)濾，濾液定容至50mL量瓶，作為供試品溶液。②回流提取法：稱取香附粗粉（過(guò)60目篩）5g，置100mL 圓底燒瓶中，加60%乙醇50mL，回流提取1h，過(guò)濾，濾液定容至50mL量瓶，作為供試品溶液。③取以上供試品溶液0.2mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定吸光度，計(jì)算總黃酮含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 香附總黃酮提取方法考察結(jié)果

由表2可知，回流提取法香附總黃酮提取含量高于超聲提取法，故確定回流提取法為香附總黃酮的最佳提取方法。

2.2.3 香附總黃酮提取正交設(shè)計(jì)

選擇主要影響提取效率的物料比（A），提取次數(shù)（B），提取時(shí)間（C），藥材粒度（D）為考察因素，采用L9（34）正交表進(jìn)行實(shí)驗(yàn),因素水平表見(jiàn)表3。

表3 香附總黃酮提取正交因素水平表

取香附粉末約25g，按表3中的要求，加60%乙醇水浴回流提取，放冷，過(guò)濾，回收溶劑濃縮提取液，提取液定容至250mL量瓶中，作為樣品溶液。精密取樣品溶液0.2mL， 按標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定吸光度，計(jì)算總黃酮含量。精密吸取樣品溶液200mL，進(jìn)行出膏率測(cè)定。并以香附總黃酮含量權(quán)重系數(shù)為0.8，出膏率權(quán)重系數(shù)為0.2進(jìn)行綜合評(píng)分，正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4，方差分析見(jiàn)表5。

表4 香附總黃酮提取正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表5 方差分析

經(jīng)直觀分析和方差分析可見(jiàn)，影響香附總黃酮提取的因素大小順序?yàn)锽＞D＞C＞A，提取次數(shù)具有顯著性差異，確定以A2B3C3D2，即8倍量60%乙醇，回流提取3次，每次2h，藥材粒度為中粉為最佳提取工藝。

2.2.4 香附總黃酮提取工藝驗(yàn)證

為進(jìn)一步考察選取工藝的可靠性及穩(wěn)定性，分別稱取藥材5份各50g，按2.2.3最佳工藝進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn)，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定總黃酮含量，并計(jì)算出膏率，結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 香附總黃酮提取工藝驗(yàn)證結(jié)果

由表6可知正交優(yōu)選的最佳提取工藝各項(xiàng)指標(biāo)均優(yōu)于正交試驗(yàn)中的最高值，說(shuō)明優(yōu)化是成功的。

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)采用考察不同比例的乙醇濃度對(duì)香附總黃酮提取效果的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)60%乙醇對(duì)香附中總黃酮提取效果最好。有文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)香附總黃酮的提取采用超聲提取[5]，本實(shí)驗(yàn)比較超聲提取和回流提取，發(fā)現(xiàn)回流提取優(yōu)于超聲提取。在此基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)物料比、提取時(shí)間、提取次數(shù)和藥材粉碎粒度這四個(gè)因素進(jìn)行四因素三水平正交考察，最終確定香附總黃酮最佳提取工藝為8倍量60%乙醇，回流提取3次，每次2h，藥材粒度為中粉。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].Ⅰ部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2010：181.

[2] 明?李時(shí)珍.本草綱目(校點(diǎn)本上冊(cè))[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,1982： 888.

[3] 黃險(xiǎn)峰,彭國(guó)平.香附的化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展[J].中藥材,2003,26(1)：65.

[4] 王賀玲,等.理氣中藥對(duì)鼠胃腸動(dòng)力的影響[J].世界華人消化雜志,2004,12(5)：1136-1138.

[5] 黃鎖義,羅建華,張麗丹,等.香附總黃酮的超聲波提取工藝研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2008,19(1)：142-142.