李 江，萬鼎銘

1)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液科鄭州450052 2)河南職工醫(yī)學(xué)院內(nèi)科教研室鄭州451191

(2011-05-20收稿 責(zé)任編輯 王 曼)

抗凋亡基因BAG-1是Bcl-2結(jié)合抗凋亡基因(Bcl-2 associated athanogene，BAG)家族的重要成員之一［1］。近年來研究［2-4］表明，BAG-1 在多種惡性腫瘤組織中表達(dá)上調(diào)，但其在急性白血病(acute leukemia，AL)中的表達(dá)情況少見報(bào)道。Bcl-2與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)［5-7］。作者采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法檢測(cè)AL患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中BAG-1及Bcl-2蛋白的表達(dá)情況，分析BAG-1表達(dá)與AL臨床特征的關(guān)系，探討B(tài)AG-1在AL發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 收集2006年5月至2010年5月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液科門診及住院AL和非惡性血液病患者的骨髓標(biāo)本?；颊呔?jīng)骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)染色法及流式細(xì)胞術(shù)確診，符合FAB白血病分型標(biāo)準(zhǔn)。初治AL患者112例，年齡17～68歲，中位年齡 37歲;復(fù)發(fā)難治白血病(RRAL)29例，完全緩解期急性白血病(AL-CR)57例，正常對(duì)照20例。

1.2 標(biāo)本采集 采集入選對(duì)象的骨髓1 mL，EDTA抗凝，并于當(dāng)天以Ficoll淋巴細(xì)胞分離液分離單個(gè)核細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞數(shù)至(1～2)×106mL－1，制備細(xì)胞涂片，室溫風(fēng)干后多聚甲醛固定20 min，PBS沖洗5 min×3次，晾干，保存于－20℃，備用。

1.3 BAG-1及Bcl-2蛋白檢測(cè) 采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色SP法。濃縮型鼠抗人BAG-1單克隆抗體購自上海長島生物技術(shù)有限公司，濃縮型鼠抗人Bcl-2單克隆抗體、SP試劑盒及DAB顯色劑均購自北京中杉金橋生物技術(shù)服務(wù)有限公司。染色步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行，采用HL-60細(xì)胞系作陽性對(duì)照，用PBS代替一抗作陰性對(duì)照。BAG-1及Bcl-2蛋白陽性反應(yīng)信號(hào)位于胞質(zhì)，過表達(dá)時(shí)胞核、胞質(zhì)均著色。分別按染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分率計(jì)分。①無染色為0分;細(xì)胞內(nèi)見淡黃色顆粒，明顯高于背景為1分;較多棕黃色顆粒為2分;大量深棕黃色顆粒為3分。②每片隨機(jī)觀察5個(gè)視野(×1 000倍)，計(jì)數(shù)250個(gè)細(xì)胞，陽性細(xì)胞百分率為0%計(jì)為0分，＜33%計(jì)為1分，≥33%計(jì)為2分，≥66%為3分。兩項(xiàng)分?jǐn)?shù)之積＜3分者為陰性表達(dá)，≥3分者為陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用SPSS13.0處理。4組間BAG-1和Bcl-2蛋白陽性表達(dá)率的比較采用χ2檢驗(yàn)，用列聯(lián)系數(shù)評(píng)價(jià)初治AL患者BAG-1及Bcl-2表達(dá)的關(guān)系，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 4組患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中BAG-1及Bcl-2蛋白的表達(dá) 見圖1、表1。

圖1 4組患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中BAG-1(A)和Bcl-2(B)蛋白的表達(dá)(SP，×1 000)1:初治AL組;2:RRAL組;3:AL-CR組;4:正常對(duì)照組;5:陰性對(duì)照。

表1 4組患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中BAG-1及Bcl-2蛋白的表達(dá) 例(%)

2.2 BAG-1蛋白的表達(dá)與初治AL患者臨床特征的關(guān)系 見表2。

表2 BAG-1蛋白的表達(dá)與初治AL患者臨床特征的關(guān)系

2.3 初治AL患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中BAG-1與Bcl-2表達(dá)的關(guān)聯(lián)性 見表3。

表3 初治AL患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中BAG-1與Bcl-2表達(dá)的關(guān)聯(lián)性

3 討論

BAG-1基因位于9p12號(hào)染色體上，其編碼的BAG-1蛋白是一種多功能蛋白，在結(jié)構(gòu)上有BAG功能域、核定位序列、泛素樣結(jié)構(gòu)域和TXSEEX重復(fù)序列，通過與多種分子靶點(diǎn)相互作用調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的生長，調(diào)控途徑包括凋亡、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、增生、轉(zhuǎn)錄和細(xì)胞能動(dòng)性［1］。近年研究［2-4］報(bào)道，BAG-1 蛋白在乳癌、前列腺癌、結(jié)腸癌等多種惡性腫瘤組織中高表達(dá)，并且與腫瘤細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移有關(guān)。

林敏等［8］在二烯丙基二硫(DADS)誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞HL-60凋亡的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DADS作用于HL-60細(xì)胞后，BAG-1的表達(dá)顯著下調(diào)。該研究結(jié)果顯示，初治AL患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中BAG-1蛋白的陽性表達(dá)率明顯高于正常對(duì)照組，提示BAG-1在AL發(fā)生中可能起重要作用。

該研究結(jié)果顯示，BAG-1蛋白在初治AL組和RRAL組骨髓單個(gè)核細(xì)胞中的陽性表達(dá)率均明顯高于AL-CR組，而初治AL組和RRAL組BAG-1蛋白陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。BAG-1蛋白陽性表達(dá)與初治AL患者的外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)及髓外浸潤(肝脾腫大、淋巴結(jié)腫大、牙齦腫脹、中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病、睪丸浸潤等)有關(guān)，與年齡、性別無明顯相關(guān)性。提示BAG-1可作為了解病情、觀察療效、判斷預(yù)后的指標(biāo)。

研究認(rèn)為［9-10］，BAG-1是以其羧基末段的BAG結(jié)構(gòu)域與Bcl-2蛋白結(jié)合形成復(fù)合物，上調(diào)Bcl-2的抗凋亡作用，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。抗凋亡基因Bcl-2在AL中高表達(dá)，而且與對(duì)化療的抵抗、低緩解率和生存期短有關(guān)［11-13］。該研究結(jié)果顯示，Bcl-2在初治AL患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中高表達(dá)，而且BAG-1與Bcl-2的表達(dá)呈正關(guān)聯(lián)，提示在AL的發(fā)生、進(jìn)展過程中，BAG-1與Bcl-2蛋白可能起協(xié)同作用。

綜上所述，BAG-1蛋白在初治AL患者中存在異常表達(dá)，而且其異常表達(dá)與患者外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)和髓外浸潤有關(guān)，提示BAG-1可能參與了AL的發(fā)生發(fā)展，并可能與Bcl-2起協(xié)同作用。

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