時(shí)艷榮 劉延方 孫 慧 張秋堂 孫 玲

1.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液科，河南鄭州 450052；2.河南省平頂山市平煤總醫(yī)院 河南平頂山 467000

基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）能降解細(xì)胞外基質(zhì)中的多種蛋白成分，在惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移中起重要作用。細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子（extracel lularmatrix metalloproteinase inducer，EMMPRIN），又稱CD147，在腫瘤惡變過(guò)程中常高表達(dá)，可促進(jìn)多種MMPs的分泌，與腫瘤的生物學(xué)行為和臨床進(jìn)展相關(guān)[1]?，F(xiàn)有文獻(xiàn)中關(guān)于MMPs及CD147 在急性白血病細(xì)胞中的表達(dá)情況報(bào)道較少，本研究旨在探討CD147 和MMP-3 在急性白血病中的表達(dá)情況和意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2007年5～12月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液內(nèi)科住院患者為研究對(duì)象，其中，將初治急性白血病56例作為初治組，急性白血病復(fù)發(fā)9例作為復(fù)發(fā)組，急性白血病完全緩解期16例作為緩解組；選擇非惡性血液病患者15例作為對(duì)照組。急性白血病患者均經(jīng)形態(tài)學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、免疫分型等檢查后確診，符合《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》（第3 版）標(biāo)準(zhǔn)[2]。初治組男30例，女26例，平均年齡為37.3歲；急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL）17 例，急性髓細(xì)胞白血病（AML）39 例；有髓外浸潤(rùn)表現(xiàn)21例（髓外浸潤(rùn)組），無(wú)髓外浸潤(rùn)表現(xiàn)35例（無(wú)髓外浸潤(rùn)組）。復(fù)發(fā)組男4例，女5例，平均年齡為41.7歲；ALL 4例，AML 5例；有髓外浸潤(rùn)表現(xiàn)者4例。緩解組男9例，女7例，平均年齡為27.6歲，ALL 5例，AML 11例， 均無(wú)肝脾淋巴結(jié)腫大。對(duì)照組為15例骨髓涂片大致正常的非惡性血液病患者，男8例，女7例，平均年齡為30.7歲。

1.2 方法

穿刺抽取骨髓液，分離單個(gè)核細(xì)胞（MNC），初治及復(fù)發(fā)組顯微鏡檢測(cè)MNC中白血病細(xì)胞數(shù)≥90%，將其分為2份；1份用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD147 表達(dá)，以Cell Quest軟件獲取分析數(shù)據(jù)，定量分析每管樣品中10 000個(gè)細(xì)胞，檢測(cè)結(jié)果以平均熒光強(qiáng)度表示；另1份制備細(xì)胞滴片后用MMP-3 原位雜交檢測(cè)試劑盒（武漢博士德公司）進(jìn)行檢測(cè)，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，細(xì)胞胞漿著棕黃色者為陽(yáng)性細(xì)胞，根據(jù)陽(yáng)性顆粒所占比例及顯色程度，參照1997年全國(guó)免疫組化技術(shù)診斷標(biāo)準(zhǔn)化專題研討會(huì)意見(jiàn)，對(duì)陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行積分。每次實(shí)驗(yàn)均設(shè)有陽(yáng)性和陰性對(duì)照。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 11.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，先進(jìn)行正態(tài)及方差齊性檢驗(yàn)，多組間比較應(yīng)用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；兩組間比較采用獨(dú)立樣本 t檢驗(yàn)；變量間的相關(guān)分析應(yīng)用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子表達(dá)情況

CD147 在急性白血病初治組和復(fù)發(fā)組的平均熒光強(qiáng)度顯著高于緩解組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；初治組與復(fù)發(fā)組、緩解組與對(duì)照組間熒光強(qiáng)度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞ 0.05），見(jiàn)表1。

表1 各組細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子表達(dá)情況比較（±s）

表1 各組細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子表達(dá)情況比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，★P ＜ 0.01；與緩解組比較，◆P ＜ 0.05，▲P ＜ 0.01

組別例數(shù) 平均熒光強(qiáng)度初治組復(fù)發(fā)組緩解組對(duì)照組56 9 16 15 112.27 ±17.64★▲108.22 ±20.93★◆91.81 ±12.06 83.53 ±13.23

2.2 各組基質(zhì)金屬蛋白酶-3 表達(dá)情況

MMP-3 在初治組和復(fù)發(fā)組的表達(dá)水平顯著高于緩解組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），初治組與復(fù)發(fā)組、緩解組與對(duì)照組間表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組基質(zhì)金屬蛋白酶-3表達(dá)情況比較（±s）

表2 各組基質(zhì)金屬蛋白酶-3表達(dá)情況比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，★P ＜ 0.05，▲P ＜ 0.01；與緩解組比較，＃P ＜0.05，◆P ＜ 0.01

組別例數(shù) 表達(dá)率（%） 積分（分）初治組復(fù)發(fā)組緩解組對(duì)照組56 9 16 15 39.95 ±18.17▲◆37.33 ±19.09★＃21.94 ±15.04 19.87 ±14.88 62.75 ±21.15▲◆55.69 ±23.37★＃35.17 ±19.43 27.74 ±16.58

2.3 有或無(wú)髓外浸潤(rùn)組的細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子及基質(zhì)金屬蛋白酶-3 表達(dá)情況

將初治組急性白血病患者56例，分為髓外浸潤(rùn)組21例和無(wú)髓外浸潤(rùn)組35例，其中，髓外浸潤(rùn)組CD147 及MMP-3表達(dá)水平均顯著高于無(wú)髓外浸潤(rùn)組，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.01）。 見(jiàn)表3。

表3 兩組細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子及基質(zhì)金屬蛋白酶-3 表達(dá)情況比較（±s）

表3 兩組細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子及基質(zhì)金屬蛋白酶-3 表達(dá)情況比較（±s）

注：與無(wú)髓外浸潤(rùn)組比較，▲P＜0.01

組別例數(shù) CD147 平均熒光強(qiáng)度 MMP-3 表達(dá)率（%）髓外浸潤(rùn)組無(wú)髓外浸潤(rùn)組21 35 127.38 ±8.00▲103.20 ±15.48 51.24 ±11.99▲33.17 ±17.98

2.4 細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子和基質(zhì)金屬蛋白酶-3表達(dá)的相關(guān)情況

經(jīng)Spearman等級(jí)分析顯示，急性白血病骨髓單個(gè)核細(xì)胞中CD147 平均熒光強(qiáng)度和MMP-3 的表達(dá)率呈正相關(guān)（r=0.574，P ＜ 0.01）。

3 討論

CD147 是一類屬于免疫球蛋白超家族的跨膜糖蛋白，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞本身和成纖維細(xì)胞[3]、內(nèi)皮細(xì)胞[4]合成分泌基質(zhì)金屬蛋白酶-1（MMP-1）、MMP-3、金屬蛋白酶-9（MMP-9）、膜型基質(zhì)金屬蛋白酶-1（MT1-MMP），而不誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）的表達(dá)[4]，導(dǎo)致 MMPs/TIMPs表達(dá)失衡，基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)降解，從而促進(jìn)腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。CD147 表達(dá)于多種腫瘤細(xì)胞，與腫瘤細(xì)胞的惡性程度[5]及腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[6-8]相關(guān)。MMP-3 的表達(dá)受CD147 的調(diào)節(jié)[3-4]，其剪切鈣粘蛋白胞外部分形成可溶性鈣粘蛋白[9-10]，后者以旁分泌的方式抑制鈣粘蛋白的功能，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示，CD147 和MMP-3 在急性白血病細(xì)胞中高表達(dá)，且兩者呈正相關(guān)關(guān)系，提示在急性白血病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，CD147 可能通過(guò)調(diào)節(jié)MMP-3 表達(dá)水平而發(fā)揮作用。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，CD147 及MMP-3 在初治急性白血病髓外浸潤(rùn)組的表達(dá)均顯著高于無(wú)髓外浸潤(rùn)組 （P＜0.01），提示CD147 和MMP-3 可能參急性白血病的髓外浸潤(rùn)過(guò)程，并有可能通過(guò)增強(qiáng)白血病細(xì)胞降解細(xì)胞外基質(zhì)等機(jī)制，促進(jìn)白血病細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。經(jīng)過(guò)化療達(dá)到完全緩解后CD147和MMP-3 表達(dá)水平顯著下降，接近于非惡性血液病水平，病情復(fù)發(fā)時(shí)兩者表達(dá)升高接近初治組水平，提示CD147 和MMP-3 主要表達(dá)于白血病細(xì)胞中，其可能與急性白血病細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。李振江等[11]以人單核細(xì)胞白血病SHI-1 細(xì)胞株為研究對(duì)象，當(dāng)加入CD147 功能阻斷肽時(shí)，人單核細(xì)胞白血病SHI-1 細(xì)胞跨膜侵襲能力顯著降低。Huang等[12]使用CD147抗體阻斷白血病U937 細(xì)胞CD147 之后，細(xì)胞活力顯著下降。Majeti[13]將抗人CD147 單克隆抗體應(yīng)用于白血病，可明顯增強(qiáng)巨噬細(xì)胞對(duì)人白血病干細(xì)胞 （leukemia stem cell，LSC）的吞噬作用。結(jié)合本研究發(fā)現(xiàn)CD147 和MMP3 在急性白血病細(xì)胞高表達(dá)且與其髓外浸潤(rùn)有關(guān)，提示抑制CD147 在急性白血病細(xì)胞的表達(dá)，進(jìn)而抑制急性白血病的髓外浸潤(rùn)，有助于提高急性白血病患者的治愈率和長(zhǎng)期生存率。

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