張海寧 牛玲 傅鳴郁 田靜 安新江

慢性充血性心力衰竭(chronic heart failure，CHF)是絕大多數(shù)心臟病發(fā)展的終末階段，已經(jīng)嚴(yán)重危害人們的健康。有資料顯示，我國的住院兒童中各種原因?qū)е碌穆孕牧λソ叩幕純河兄鹉暝龆嘹厔荨Ｅc成人不同，導(dǎo)致兒童慢性心衰的主要疾病不是缺血性心臟病而是以先天性心臟病、慢性心肌炎、原發(fā)性心肌病為主。而病情演變過程和預(yù)后也與成人期不同，有效的治療可使預(yù)后明顯改觀。探索、評價新的治療方法一直是研究的熱點(diǎn)。黃芪是臨床常用的補(bǔ)氣中藥，黃芪注射液是黃芪提取物，其主要成分為黃芪皂苷。本研究通過阿霉素造大鼠慢性心衰模型來觀察黃芪注射液對心功能的保護(hù)作用及對血清的IL-6和TNF-α水平的影響。

1 資料與方法

1.1 慢性心衰大鼠模型的建立 雄性wistar大鼠以1.5 mg/kg體重劑量腹腔注射阿霉素，每周2次，共7周，累積總量21 mg/kg，體重進(jìn)行造模;正常組則注射相同體積的生理鹽水。

1.2 動物分組及給藥方法 隨機(jī)分成三組:對照組，模型組和黃芪組(4 ml/kg)，每組8只。從第8周開始，即停止注射阿霉素后，每天灌胃給藥1次，連續(xù)給予灌胃四周。黃芪注射液(20 g/10 m l/支)，正大青春寶有限公司，批號:0901073。

1.3 血液動力學(xué)檢測 大鼠稱重，腹腔注射0.4%戊巴比妥鈉40 mg/kg麻醉，仰臥位固定，頸部備皮消毒。頸部正中切口，鈍性分離右側(cè)頸總動脈，結(jié)扎遠(yuǎn)心端，將充滿1%肝素的導(dǎo)管自右頸總動脈徐緩進(jìn)入，同時密切觀察壓力曲線，待導(dǎo)管進(jìn)入左心室，即示波顯示為左心室壓力曲線后，穩(wěn)定5 min，記錄所需血液動力學(xué)參數(shù)。測量指標(biāo)包括心率(Heart rate，HR)、左室收縮壓(Lleft ventricular systolic pressure，LVSP)、左室舒張末壓(Left ventricular end diastolic pressure，LVEDP)，左室內(nèi)壓最大上升速率(Left ventricular maximal rates of pressure rise，+dp/dtmax)，左室內(nèi)壓最大下降速率(Left ventricularmaximal rates of pressurefall，-dp/dtmax)。連續(xù)測取5次數(shù)據(jù)，每次隔3 min，每一數(shù)據(jù)由3次較穩(wěn)定數(shù)據(jù)求平均值作為結(jié)果。

1.4 血樣的采集及處理方法 斷頭取血后置于采血管中，自然凝固，取血清，4℃，3000 rpm離心，放入-20℃冰箱保存待檢。采用放射免疫方法測定IL-6與TNF-α的含量。

1.5 左室質(zhì)量指數(shù)的測定 動物采血后，用頸椎脫臼法處死大鼠，剖胸取出心臟，用冰生理鹽水洗凈殘血，迅速分離左心室(包括室間隔在內(nèi))，用濾紙吸干，稱取質(zhì)量(單位為mg)，并計(jì)算左室質(zhì)量指數(shù)。左室質(zhì)量指數(shù)=左室質(zhì)量/體重。

2 結(jié)果

2.1 黃芪對心衰大鼠血流動力學(xué)影響 阿霉素給藥后，模型組與對照組比較，心率值無差異(P＞0.05)，LVSP顯著下降(P＜0.01)，LVEDP顯著升高(P＜0.01)，+dp/dtmax顯著下降(P＜0.01)，-dp/dtmax顯著下降(P＜0.01)。黃芪組與模型組比較，心率值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，LVSP顯著上升(P＜0.01)，LVEDP顯著降低(P＜0.01)+dp/dtmax顯著升高(P＜0.01)，-dp/dtmax顯著升高(P ＜0.01)。

表1 黃芪對阿霉素誘導(dǎo)心衰大鼠血流動力學(xué)的影響(±s)

表1 黃芪對阿霉素誘導(dǎo)心衰大鼠血流動力學(xué)的影響(±s)

注:＊＊P＜0.01，與對照組比;##P＜0.01，與模型組比較

組別 例數(shù) HR(次min)LVSP(mm Hg)LVEDP(mm Hg)+dp/dtmax(mm Hg/s)-dp/dtmax(mm Hg/s)對照組 8 423.13±21.70 139.84±5.75 8.3±0.83 3813.75±354.97 3755.13±553.05模型組 8 409.13±15.63 103.25±9.08＊＊ 15.35±1.71＊＊ 2139.75±126.07＊＊ 2522.5±338.78＊＊黃芪組 8 401.13±15.10 124.04±11.83## 11.54±2.14## 3078.75±299.62## 3265.75±245.97##

2.2 左室質(zhì)量指數(shù) 與對照組比較，模型組左室質(zhì)量指數(shù)顯著升高(P＜0.01)，與模型組比較，黃芪組左室質(zhì)量指數(shù)降低(P ＜0.05)，見表2。

表2 黃芪對阿霉素誘導(dǎo)心衰大鼠左心室質(zhì)量指數(shù)的影響(±s)

表2 黃芪對阿霉素誘導(dǎo)心衰大鼠左心室質(zhì)量指數(shù)的影響(±s)

注:*P＜0.01，與對照組比;#P＜0.05，與模型組比較

組別(n)左心室指數(shù)對照組(8)8.3±0.83模型組(8) 15.35±1.71＊＊黃芪組(8) 11.54±2.14#

2.3 IL-6與TNF-α含量的測定 與對照組比較，模型組IL-6含量及TNF-α含量均顯著升高(P＜0.01);與模型組比較，黃芪組IL-6含量及TNF含量均顯著降低(P＜0.01)，見表3。

表3 黃芪對阿霉素誘導(dǎo)心衰大鼠血清TNF-α、IL-6含量的影響 (±s，n=8)

表3 黃芪對阿霉素誘導(dǎo)心衰大鼠血清TNF-α、IL-6含量的影響 (±s，n=8)

注:＊＊P＜0.01，與對照組比;##P＜0.01，與模型組比較

組別 TNF-α(ng/ml) IL-6(ng/L)對照組0.58±0.08 107.24±12.68模型組 2.54±0.18＊＊ 234.32±32.91＊＊黃芪組 1.44±0.22## 159.71±22.65##

3 討論

近年來隨著對心衰的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制研究不斷深入，心衰治療策略也有了根本性轉(zhuǎn)變。即從短期血液動力學(xué)和藥理學(xué)措施轉(zhuǎn)變?yōu)殚L期的修復(fù)性策略。阻斷神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的激活，阻斷心肌重塑成為心衰治療的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。目前的治療包括應(yīng)用β受體阻滯劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑、洋地黃類及非洋地黃類正性肌力藥、利尿劑、醛固酮拮抗劑和血管緊張素受體拮抗劑等，但效果仍不理想。臨床上，可以觀察到黃芪注射液對心力衰竭癥狀有改善作用，但深入的作用機(jī)制和應(yīng)用后相關(guān)指標(biāo)的變化仍需深入研究和探討。

本實(shí)驗(yàn)采用阿霉素誘導(dǎo)建立的是毒物致心力衰竭模型［1，2］，阿霉素可以誘導(dǎo)產(chǎn)生大量自由基引起心肌能量代謝損害［3］。血流動力學(xué)的結(jié)果表明，阿霉素建立的心衰模型是成功的。已有研究表明應(yīng)用黃芪注射液治療后可增加左心室射血分?jǐn)?shù)［4］，改善心功能。黃芪還具有很強(qiáng)的正性肌力作用［5，6］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，應(yīng)用黃芪注射液治療后，心衰模型大鼠的血流動力學(xué)指標(biāo)，包括LVSP、LVEDP、+dp/dtmax，-dp/dtmax等都得到了顯著改善。而黃芪注射液改善血流動力學(xué)指標(biāo)，保護(hù)心臟作用的機(jī)理，可能是通過維持心肌損傷小鼠的SOD活性，減少脂質(zhì)過氧化物MDA的生成，調(diào)控機(jī)體自由基的平衡實(shí)現(xiàn)的［7］。實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)［8］，黃芪注射液對阿霉素誘導(dǎo)小鼠心肌細(xì)胞凋亡具有拮抗作用，這也是黃芪產(chǎn)生這種作用的機(jī)制之一。

心室重構(gòu)是心功能不全發(fā)展的必然過程，也是影響預(yù)后最主要的指標(biāo)之一。本研究對左室質(zhì)量的測定顯示，應(yīng)用黃芪注射液后，左室質(zhì)量指數(shù)降低，說明黃芪可抑制心室重構(gòu)。其機(jī)理可能與心肌局部血管緊張素Ⅱ含量明顯降低有關(guān)［9］。同時黃芪還可以抑制心肌纖維化，降低凋亡基因［10］。

研究證實(shí)，慢性心力衰竭患者血清細(xì)胞因子IL-6、TNF-α顯著高于正常對照組，且隨著心功能的惡化而逐漸升高，細(xì)胞炎性因子TNF-α、IL-6水平與心功能分級正相關(guān)［11］，血清IL-6和TNF-α水平是CHF嚴(yán)重程度有用預(yù)測指標(biāo)。神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞因子系統(tǒng)的持續(xù)激活是導(dǎo)致心室重塑和心衰惡化的重要原因［12-14］。IL-6調(diào)節(jié)免疫和炎癥反應(yīng)，還能通過直接損傷心肌細(xì)胞和促進(jìn)心肌細(xì)胞肥大和加重心室重構(gòu)。TNF-a可以誘導(dǎo)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOs)表達(dá)，從而刺激心肌組織產(chǎn)生大量NO，直接促發(fā)心肌細(xì)胞凋亡;還可以降低心肌細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷酸腺苷水平，使三磷酸腺苷(ATP)合成不足，引起心肌收縮性減退;促進(jìn)心肌蛋白質(zhì)分解加速，導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡而進(jìn)一步損害心功能［15］，造成心衰惡化。本實(shí)驗(yàn)中模型組大鼠的TNF-α、IL-6明顯高于對照組，與上述研究結(jié)果一致，說明IL-6和TNF-α參與了心衰的發(fā)生和發(fā)展，應(yīng)用黃芪注射液后IL-6和TNF-α指標(biāo)較心衰模型組有顯著降低，提示黃芪可降低心衰發(fā)展中的炎性因子水平，阻斷參與心衰發(fā)展的炎性反應(yīng)。

本研究從血流動力學(xué)、心室重量指數(shù)，炎性因子水平等角度證實(shí)，黃芪對阿霉素誘導(dǎo)的心衰有保護(hù)作用，能夠改善心衰小鼠血液動力學(xué)指標(biāo)，逆轉(zhuǎn)心室的重構(gòu)，抑制炎癥反應(yīng)。為心衰治療方法和臨床用藥提供了客觀依據(jù)，也豐富了中醫(yī)藥治療充血性心力衰竭的理論。

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