范如英，武子濤，盛劍秋

北京軍區(qū)總醫(yī)院消化內(nèi)科，北京 100700

核周型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體在潰瘍性結(jié)腸炎診斷中的意義

范如英，武子濤，盛劍秋

北京軍區(qū)總醫(yī)院消化內(nèi)科，北京 100700

目的 了解血清中核周型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(pANCA)對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎診斷的敏感性及特異性。方法 本文采用間接免疫熒光法對(duì)我院51例潰瘍性結(jié)腸炎、15例克羅恩病、30例對(duì)照患者血清中核周型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果 51例潰瘍性結(jié)腸炎患者中32例核周型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體陽性，其敏感性及特異性分別為62.75%及95.56%。15例克羅恩病患者中有2例陽性核周型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體陽性，陽性率為13.33%，30例對(duì)照組未發(fā)現(xiàn)核周型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體陽性患者，組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 血清中抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎具有一定的敏感性及高度的特異性，對(duì)其檢測(cè)有利于潰瘍性結(jié)腸炎的診斷及鑒別診斷。

核周型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體;潰瘍性結(jié)腸炎;診斷

1 資料與方法

1.1 患者來源 2007年1月—2012年2月我院住院患者中潰瘍性結(jié)腸炎患者51例，男23例，女28例，平均年齡(41.8±14.5)歲;克羅恩病患者15例，男10例，女5例，平均年齡(40.5±20.0)歲;對(duì)照組為排除腸道及自身免疫病的其他患者30例，男19例，女11例，平均年齡(59.8±15.2)歲。所有潰瘍性結(jié)腸炎及克羅恩患者均符合2001年成都全國(guó)炎癥性腸病學(xué)術(shù)研討會(huì)制定的標(biāo)準(zhǔn)［1］。

1.2 試劑和方法

1.2.1 標(biāo)本采集:空腹采集不抗凝血2～3 mL，以2 500 r/min離心15 min，分離血清。

1.2.2 核周型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體的檢測(cè):采用間接免疫熒光薄片法。試劑盒購(gòu)自德國(guó)歐盟公司，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作，取25 μL采用PBS緩沖液1∶10稀釋的血清至加樣板反應(yīng)區(qū)，將生物薄片載片蓋在加樣板的凹槽中，室溫孵育30 min。采用PBS緩沖液沖洗3次并在PBS液中浸泡5 min，加20 μL熒光標(biāo)記的羊抗人IgG，室溫孵育30 min后PBS沖洗3次。熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。結(jié)果判斷:熒光細(xì)胞核周圍呈線條狀分布者為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。樣本率的比較采用卡方檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

潰瘍性結(jié)腸炎患者pANCA特異性為95.56%，陽性檢出率即敏感性為62.75%，顯著高于克羅恩病組及對(duì)照組，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.005，見表1)

表1pANCA在UC、CD及對(duì)照組間的比較Tab 1 Comparison of pANCA in UC，CD and control groups

3 討論

炎癥性腸病是一種慢性非特異性炎癥性疾病，它包括潰瘍性結(jié)腸炎及克羅恩病，多發(fā)生在年輕人群中，其發(fā)病率有增高趨勢(shì)，嚴(yán)重影響了人們的健康及生活質(zhì)量。由于克羅恩病及潰瘍性結(jié)腸炎有相似的臨床表現(xiàn)，為臨床診治帶來很大困難，臨床鑒別主要靠臨床、腸鏡、病理實(shí)驗(yàn)室檢查進(jìn)行綜合分析診斷，且需排除感染性腸炎、缺血性腸炎及功能性腸病腸預(yù)激綜合征。目前認(rèn)為其發(fā)病機(jī)制由多種因素相互作用所致，主要包括環(huán)境、免疫、遺傳、感染因素。其中免疫因素備受關(guān)注，尋找有利于炎癥性腸病診斷及鑒別診斷的血清標(biāo)志物，是臨床工作者不懈努力的方向。初步研究表明患者血清pANCA的檢測(cè)有利于炎癥性腸病的診斷及鑒別診斷。

ANCA是針對(duì)中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞顆粒蛋白的特異性抗體，是血管炎患者的自身抗體，是診斷血管炎的一種特異性指標(biāo)。采用間接免疫熒光法可將ANCA分為胞漿型(cANCA)、核周型(pANCA)和不典型(xANCA)，其中cANCA自身抗原為蛋白酶3(PR3)，cANCA陽性主要見于韋格納肉芽腫。pANCA陽性與潰瘍性結(jié)腸炎有關(guān)，但其相關(guān)抗原目前尚不確定，可能存在多種抗原，包括過氧化物酶、乳鐵蛋白、溶菌酶、β葡萄糖苷激酶、組織蛋白酶G、彈力蛋白酶。近年研究表明中性粒細(xì)胞嗜天青顆粒內(nèi)的一種具有殺菌活性的蛋白質(zhì)即殺菌/通透性增高蛋白質(zhì)，有可能是UC患者pANCA相關(guān)抗原［2］。國(guó)內(nèi)外報(bào)道pANCA在UC患者中的陽性率為40% ～85%，而在CD患者中陽性率低于5% ～10%［3-4］，在正常人群中其陽性率僅為0～5%。本研究結(jié)果表明pANCA在UC患者中的陽性率為62.75%，而在CD患者中陽性率為13.33%，在對(duì)照組人群中其陽性率為0，與上述結(jié)果相一致。進(jìn)一步說明血清pANCA檢測(cè)對(duì)于UC患者診斷特異性強(qiáng)，且具有一定敏感性，對(duì)其檢測(cè)有利于UC患者的診斷及與CD的鑒別診斷。對(duì)于UC患者pANCA陽性率是否與疾病的嚴(yán)重程度有關(guān)，目前尚存在爭(zhēng)議，有研究［3］認(rèn)為pANCA的檢測(cè)水平與UC嚴(yán)重程度有關(guān)，該文作者認(rèn)為pANCA陽性的UC患者腸黏膜血管炎的發(fā)生率高于pANCA陰性的UC患者，并且伴有血管炎的UC患者腸黏膜病理組織學(xué)炎癥程度也較嚴(yán)重，提示UC相關(guān)的ANCA可能參與了血管介導(dǎo)的血管炎的發(fā)生［5］。另一項(xiàng)研究［6］表明，pANCA 的表達(dá)與 UC 的嚴(yán)重程度無關(guān)，該爭(zhēng)議需要大樣本多中心的研究進(jìn)一步闡明?？傊?，pANCA為UC特異性強(qiáng)的血清學(xué)標(biāo)志物，對(duì)其檢測(cè)有利于UC的診斷及鑒別診斷。

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The significance of perinuclear anti-neutrophil cytoplasmic antibodies in diagnosis of ulcerative colitis

FAN Ruying，WU Zitiao，SHENG Jianqiu
Department of Gastroenterology，the Military General Hospital of Beijing PLA，Beijing 100700，China

ObjectiveTo study the sensibility and specificity of detection of perinuclear anti-neutrophil cytoplasmic antibodies(pANCA)in diagnosis of ulcerative colitis(UC).MethodsSerum samples were obtained from 51 patients with ulcerative colitis(UC)，15 patiens with Crohn’s disease(CD)and 30 patients without intestinal disease as control.pANCA was detected by indirect immunofluorescence assay.ResultsThe sensibility and specificity of p-ANCA in UC patients were 67.75%and 95.56%respectively，but the positive of pANCA in CD patients was 13.33%(2/15).No patients was positive in control group(P ＜0.05).ConclusionSerum pANCA in patients with UC shows a moderately sensibility and a high specificity，it is useful for the diagnosis of UC and differentiation between UC and CD.

Perinuclear anti-neutrophil cytoplasmic antibodies;Ulcerative colitis;Diagnosis

R574.62

A

1006－5709(2012)08－0758－02

2012-03-08

10.3969/j.issn.1006-5709.2012.08.021

范如英，E-mail:fanry2@sohu.com