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        不同外源激素對(duì)清遠(yuǎn)筆架茶愈傷組織誘導(dǎo)的影響

        2012-09-12 00:55:44歐少云陳珊陳春蘭劉細(xì)群
        湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2012年16期
        關(guān)鍵詞:愈傷組織

        歐少云 陳珊 陳春蘭 劉細(xì)群

        摘要:采用清遠(yuǎn)筆架茶[Camellia sinensis (L.)O. Kuntze]的嫩葉作為外植體,探索不同外源激素種類(lèi)及濃度對(duì)清遠(yuǎn)筆架茶愈傷組織誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明,在培養(yǎng)基1/2MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L中誘導(dǎo)效果最好,誘導(dǎo)率為86.7%,且愈傷組織生長(zhǎng)健壯。

        關(guān)鍵詞:清遠(yuǎn)筆架茶[Camellia sinensis (L.)O. Kuntze];外源激素;愈傷組織

        中圖分類(lèi)號(hào):Q949.758.4;Q943.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):0439-8114(2012)16-3626-02

        Effects of Type and Concentration of Exogenous Hormone on Callus Induction of Qingyuanbijia Tea

        OU Shao-yun,CHEN Shan,CHEN Chun-lan,LIU Xi-qun

        (Qingyuan Polytechnic,Qingyuan 511510,Guangdong,China)

        Abstract: Using the tender leaf of Qingyuanbijia tea[Camellia sinensis(L.)O. Kuntze] as explants, the effects of type and concentration of exogenous hormone on callus induction was studied. The results showed that 1/2MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 1.0mg/L had the best callus induction efficiency with an induction rate of 86.7%, and the callus growed vigorously.

        Key words: Qingyuanbijia tea [Camellia sinensis(L.)O. Kuntze]; exogenous hormone; callus

        清遠(yuǎn)筆架茶[Camellia sinensis (L.)O. Kuntze]屬于山茶科(Theaceae)山茶屬(Camellia),是清遠(yuǎn)筆架山種植的特有地方品種,葉橢圓形,芽葉黃綠色,葉質(zhì)硬,適合制作為綠茶,茶湯香氣清長(zhǎng)持久,滋味爽口而滑,帶甜甘味,有解暑、化痰、生津之功效。目前清遠(yuǎn)筆架茶主要通過(guò)有性形式進(jìn)行繁殖,但利用種子繁殖發(fā)芽率很低。歐少云等[1]用嫩葉、嫩莖和花瓣進(jìn)行試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),嫩葉的愈傷組織的誘導(dǎo)率最高。本文采用清遠(yuǎn)筆架茶的嫩葉作為外植體,以MS和1/2MS為基本培養(yǎng)基,以6-BA、NAA、2,4-D為外源激素,研究不同外源激素種類(lèi)及濃度對(duì)清遠(yuǎn)筆架茶嫩葉愈傷組織誘導(dǎo)的影響,為今后研究清遠(yuǎn)筆架茶植株的快繁技術(shù)打下基礎(chǔ)。

        1材料與方法

        1.1材料

        清遠(yuǎn)筆架茶的嫩葉取自清遠(yuǎn)市筆架山農(nóng)場(chǎng);外源激素有6-BA、NAA、2,4-D;基本培養(yǎng)基有MS、1/2MS。

        1.2方法

        1.2.1培養(yǎng)基的制備(單位:mg/L)①以1/2MS為基本培養(yǎng)基,添加6-BA(0、1.0、2.0、4.0)和NAA(0、0.5、1.0、2.0)或者添加6-BA(0、1.0、2.0、4.0)和2,4-D(0、0.5、1.0、2.0)形成試驗(yàn)組合。②以MS為基本培養(yǎng)基,添加6-BA(0、1.0、2.0、4.0)和NAA(0、0.5、1.0、2.0)或6-BA(0、1.0、2.0、4.0)和2,4-D(0、0.5、1.0、2.0)形成試驗(yàn)組合。

        1.2.2培養(yǎng)基的滅菌所有培養(yǎng)基和接種器具均用高壓蒸汽滅菌鍋于121 ℃滅菌20 min,冷卻待用。

        1.2.3外植體的消毒處理取清遠(yuǎn)筆架茶剛展開(kāi)的嫩葉,用軟毛筆蘸取洗潔精稀釋液小心清洗,用流水沖洗1.0~1.5 h后,用潔凈紗布吸干;于超凈工作臺(tái)上用體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇處理20 s,用無(wú)菌水漂洗2次,然后將其置于1 g/L HgCl2溶液中浸泡10~20 min;用無(wú)菌水漂洗5~6次,用無(wú)菌濾紙吸干表面水分待用。

        1.2.4接種把經(jīng)過(guò)消毒處理的嫩葉切成1 cm2左右、具葉脈的小葉塊,將小葉塊上表面朝上,接種于按1.2.1的方法制得的培養(yǎng)基中,每瓶接種5個(gè)小葉塊,每種培養(yǎng)基共接種10瓶。試驗(yàn)3次重復(fù),結(jié)果?。炒蔚钠骄?。

        1.2.5培養(yǎng)將接種后的外植體均放在25 ℃下暗培養(yǎng)2周,然后在散射光下以14 h/d繼續(xù)光照培養(yǎng)。試驗(yàn)3次重復(fù),結(jié)果?。炒蔚钠骄怠?/p>

        2結(jié)果與分析

        培養(yǎng)30 d后統(tǒng)計(jì)的愈傷組織誘導(dǎo)情況見(jiàn)表1至表4。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),用1/2MS作為基本培養(yǎng)基比用MS對(duì)清遠(yuǎn)筆架茶嫩葉愈傷組織誘導(dǎo)的效果更好。由表1至表4可知,在不添加外源激素的情況下,清遠(yuǎn)筆架茶嫩葉無(wú)法有效地形成愈傷組織;只添加6-BA不添加NAA、2,4-D,或只添加NAA或2,4-D不添加6-BA,也不能有效地誘導(dǎo)愈傷組織的形成;當(dāng)6-BA濃度為1.0、4.0 mg/L時(shí),不管添加的NAA或2,4-D濃度是低還是高,也不能誘導(dǎo)愈傷組織的形成;只有當(dāng)6-BA濃度為2.0 mg/L時(shí),添加一定濃度的NAA或2,4-D才能誘導(dǎo)愈傷組織的形成,且在6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L組合下愈傷組織誘導(dǎo)率最高,愈傷組織的狀態(tài)最好。

        3討論

        基本培養(yǎng)基中的大量元素對(duì)茶樹(shù)組織培養(yǎng)影響很大。成浩等[2]認(rèn)為,MS培養(yǎng)基中大量元素減半,不僅有利于莖段的誘導(dǎo)和生長(zhǎng),而且有利于減少莖段的褐化率,提高成活率。張婭婷等[3]研究發(fā)現(xiàn),基本培養(yǎng)基1/2MS比MS培養(yǎng)效果好,而且MS中含有的無(wú)機(jī)離子濃度較高,對(duì)芽的分化具有一定的抑制作用。但在實(shí)際應(yīng)用中,大多數(shù)學(xué)者在誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)時(shí)采用全量的大量元素,而在生根培養(yǎng)時(shí)采用半量的大量元素[4]。本試驗(yàn)也得到了與上述研究相同的結(jié)果,即用1/2MS作為基本培養(yǎng)基比用MS在誘導(dǎo)清遠(yuǎn)筆架茶嫩葉愈傷組織形成上的效果好。

        生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的種類(lèi)和濃度配比是影響外植體能否成功啟動(dòng)的關(guān)鍵因素之一。董德賢[5]用茶樹(shù)的新梢作材料誘導(dǎo)再生植物,結(jié)果表明,在生長(zhǎng)誘導(dǎo)中培養(yǎng)基的生長(zhǎng)素濃度發(fā)揮著關(guān)鍵作用。李家華等[6]探討了不同激素配方對(duì)大葉種茶樹(shù)新梢組織培養(yǎng)的效果,結(jié)果表明,6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 4.0 mg/L促進(jìn)腋芽形成單生芽的效果最好,6-BA 10.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L誘導(dǎo)愈傷組織形成和腋芽分化均獲得了較好效果,6-BA 4.0 mg/L促進(jìn)叢芽形成的效果最好。本研究發(fā)現(xiàn),在培養(yǎng)基1/2MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L中清遠(yuǎn)筆架茶嫩葉愈傷組織的誘導(dǎo)效果最好,誘導(dǎo)率為86.7%,且愈傷組織生長(zhǎng)健壯??梢?jiàn),生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)在清遠(yuǎn)筆架茶的組織培養(yǎng)中發(fā)揮著重要的作用。

        參考文獻(xiàn):

        [1] 歐少云,陳春蘭,鄭正.清遠(yuǎn)筆架茶不同器官誘導(dǎo)愈傷組織的研究[J].科技資訊,2011(24):3.

        [2] 成浩,李素芳. 茶樹(shù)微繁殖技術(shù)的研究與應(yīng)用[J].中國(guó)茶葉,1996(2):29-31.

        [3] 張婭婷,張偉. 藪北茶的組織培養(yǎng)[J].周口師范學(xué)院學(xué)報(bào),2004,21(5):74-76.

        [4] 程柳,湯浩如.茶樹(shù)組織培養(yǎng)及影響因素[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,35(7):1960-1963.

        [5] 董德賢. 茶樹(shù)組織培養(yǎng)的研究[J].茶業(yè)通報(bào),1989,57(1):49.

        [6] 李家華,周紅杰,李明珠.不同激素配方對(duì)大葉種茶樹(shù)新梢組織培養(yǎng)的效果[J].云南農(nóng)業(yè)科技,2001(3):27-28.

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