韓梅，易勝國，楊嘵鳳，侯雪，羅曉梅

（四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院分析測試中心，四川成都610066）

香水魚調(diào)料中多種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的測定

韓梅，易勝國，楊嘵鳳，侯雪，羅曉梅

（四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院分析測試中心，四川成都610066）

建立凝膠滲透色譜凈化-氣相色譜法測定香水魚調(diào)料中的14種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法。樣品中的有機(jī)磷農(nóng)藥用乙腈提取，凝膠滲透色譜凈化,經(jīng)毛細(xì)管柱（DB-1701P，30 m×0.25 mm×0.25 μm）分離，氣相色譜-火焰光度檢測器（FPD）檢測。方法檢出限為0.0026 mg/kg～0.033 mg/kg;相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=5）為1.0%～12.6%;14種有機(jī)磷農(nóng)藥平均回收率在75.82%～123.50%，該方法能滿足香水魚調(diào)料中有機(jī)磷農(nóng)殘測定的要求。

凝膠滲透色譜；氣相色譜；有機(jī)磷農(nóng)藥殘留；香水魚調(diào)料

Abstract:A gas chromatographic method was established for determination of 14 organophosphous pesticide residues in spicy boiled fish seasoning with gel permeation chromatography (GPC)clean-up.The pesticide residues were extracted from samples with acetonitrile and purified with GPC column,then separated by a capillary column（DB-1701P,30 m×0.25 mm×0.25 μm）with flame photometric detector(FPD),the limits of detection of this method ranged from 0.0026 mg/kg-0.033 mg/kg.The recoveries of 14 organophosphous pesticides in spicy boiled fish seasoning ranged from 75.82%-123.50%and the RSDs(n=5)of recoveries were ranged in 1.0%-12.6%.Therefore,this method can satisfy the requirements for the analysis of organophosphous pesticide residues in the spicy boiled fish seasoning samples.

Key words：gel permeation chromatography;gas chromatography;multi-organophosphrous pesticides residues;spicy boiled fish seasoning

有機(jī)磷農(nóng)藥作為一種殺蟲劑、殺螨劑，被廣泛地使用在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中[1]，它們會(huì)殘留在組成香水魚調(diào)料的各種成分之中，如豆瓣、菜籽油、辣椒、香辛料等。同時(shí)某些生產(chǎn)者在運(yùn)輸、加工、儲(chǔ)藏過程中為了防蚊蠅、防腐敗等原因，非法使用有機(jī)磷農(nóng)藥，造成農(nóng)藥殘留，危害人體健康，因此有必要對(duì)調(diào)料中的有機(jī)磷農(nóng)殘進(jìn)行監(jiān)測。但關(guān)于調(diào)料中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量檢測方法的研究卻少見文獻(xiàn)報(bào)道。目前食品中多種有機(jī)磷農(nóng)藥的測定方法主要有氣相色譜法[2]、氣質(zhì)法[3]，其中樣品前處理方法大多采用丙酮等極性溶劑作為提取溶劑，對(duì)于含油脂、色素、香料等復(fù)雜基質(zhì)的香水魚調(diào)料的農(nóng)殘測定會(huì)出現(xiàn)較大的干擾，且嚴(yán)重污染儀器。而采用凝膠滲透色譜技術(shù)（GPC）可除去油脂、色素等物質(zhì)[3-9]，凈化樣品溶液。因此，本文采用了凝膠色譜柱凈化樣品溶液，建立了氣相色譜FPD檢測器測定香水魚調(diào)料中多種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留方法，樣品色譜圖中14種有機(jī)磷農(nóng)藥能達(dá)到良好分離，大大降低背景雜質(zhì)干擾，降低儀器污染程度，且方法簡單、準(zhǔn)確、回收率好。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

美國AgiLent7890A氣相色譜儀：配有FPD檢測器、7683B自動(dòng)進(jìn)樣器；凝膠滲透色譜儀：美國J2 Scientific，配有內(nèi)充Bio-BeadsS-X3玻璃柱（22g，20cm×2 cm）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：瑞士 Büchi；HY－5 回旋振蕩器：常州國華電器有限公司;香水魚調(diào)料樣品產(chǎn)自四川。

丙酮、乙腈、均為色譜純；乙酸乙酯、環(huán)己烷為分析純，去離子水；氯化鈉為分析純；甲胺磷等14種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)購于北京中國標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)開發(fā)公司標(biāo)樣開發(fā)部,均為100 mg/L。

有機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：準(zhǔn)確吸取100 mg/L單一標(biāo)液各1 mL，置于50 mL容量瓶中，用丙酮稀釋定容至刻度，此混合儲(chǔ)備液濃度為2.0 mg/L。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，用丙酮稀釋成不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液。

1.2 色譜條件

色譜柱：DB-1701P石英毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25μm），載氣為氮?dú)猓兌?99.999%），流量2.0mL/min?？諝饬髁?20 mL/min，氫氣流量75 mL/min。柱溫：初溫100℃不保持，以25℃/min升至200℃，再以10℃/min升至240℃保持10 min。進(jìn)樣口溫度230℃；檢測器溫度250℃；尾吹為氮?dú)?0 mL/min。進(jìn)樣方式為不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量1.0 μL。

1.3 方法

1.3.1 試樣提取及濃縮

稱取經(jīng)均質(zhì)化處理的15.00 g試樣，置于250 mL具塞錐形瓶中，加入15 mL水，再加入乙腈30 mL，在振蕩器上振搖30 min，過濾，濾液收集于盛有5 g～7 g氯化鈉的50 mL具塞比色管中，振搖1 min，靜置分層2 h。準(zhǔn)確吸取10 mL乙腈溶液（上層）置100 mL旋蒸瓶中，40℃水浴減壓濃縮至近干，用乙酸乙酯+環(huán)己烷（1+1）10.0 mL的混合溶液溶解殘?jiān)^0.45 μm濾膜，供凝膠凈化。

1.3.2 GPC凈化

流動(dòng)相為環(huán)己烷+乙酸乙酯（1+1），流速為4.7mL/min，進(jìn)樣量為5.0 mL。收集10 min～16 min流出的組分于旋蒸瓶中，40℃蒸發(fā)至近干，用丙酮準(zhǔn)確定容到2.5 mL，供氣相色譜測定。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)系列制備方法

分別吸取 0.25、0.5、1.0、3.0、5.0 mL 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（2.0 mg/mL）于10 mL容量瓶中，用丙酮稀釋定容至刻度，配成 0.05、0.1、0.2、0.6、1.0 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)使用液。按照1.2色譜分析條件進(jìn)行測定，進(jìn)樣量1.0 μL。

2 結(jié)果與討論

2.1 氣相色譜條件的選擇

根據(jù)有機(jī)磷農(nóng)藥的理化性質(zhì)，試驗(yàn)了具有中等極性的毛細(xì)管柱 DB-1701（30 m×0.32 mm×0.25 μm)、DB-50+（30 m×0.25 mm×0.25 μm）、DB-XLB（30 m×0.25 mm×0.25 μm）、DB-1701P（30 m×0.32 mm×0.25 μm）對(duì)有機(jī)磷的分離效果，結(jié)果表明DB-1701P柱分離效果好，峰形較好，能滿足定量分析的要求。另外本文對(duì)進(jìn)樣口、檢測器、程序升溫速率等色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，得到了1.2的色譜條件，在此條件下得到的標(biāo)準(zhǔn)譜圖見圖1。

2.2 樣品預(yù)處理?xiàng)l件的選擇

食品中的有機(jī)磷農(nóng)藥通常采用單一極性有機(jī)溶劑如丙酮[2]、乙酸乙酯[4，6]、乙腈[7-8]，也有采用混合溶劑如乙腈+水[3]方式提取。由于香水魚調(diào)料的基質(zhì)復(fù)雜，用丙酮、乙酸乙酯提取時(shí)，會(huì)提取出大量的油脂、辣椒色素等雜質(zhì)，給下一步的提純帶來困難；用乙腈作為提取溶劑既能保證充分提取農(nóng)藥，又能減少對(duì)油脂等雜質(zhì)的共提取[3,7-8]。其次，因樣品含水量很少，提取時(shí)需加入一定量的水。經(jīng)試驗(yàn)選用V（樣品）∶V（水）∶V（乙腈）=1∶1∶2作為該樣品中農(nóng)藥組分的提取劑,既能得到高的提取效率,又能在很大程度上降低油脂肪和香辛類物質(zhì)對(duì)分析的干擾。由于不同的提取、過濾方式對(duì)結(jié)果沒有顯著性的影響，本文采用傳統(tǒng)的振蕩提取和濾紙過濾方式，操作簡單、實(shí)用。

2.3 GPC凈化條件的選擇

在凝膠滲透色譜（GPC）中[9]，大分子的蛋白質(zhì)、油脂、色素（葉綠素、葉黃素）、生物堿、聚合物等先被淋洗出來，農(nóng)藥等相對(duì)分子質(zhì)量較小如甲胺磷后被淋洗出來。這種分離特點(diǎn)正好為含有復(fù)雜基質(zhì)的香水魚調(diào)料中農(nóng)藥殘留檢測提供了一種很好的凈化途徑。為了確定有機(jī)磷農(nóng)藥在GPC柱（Bio-Beads SX3）上的流出規(guī)律，取1.0 mL的1.0 mg/mL 14種有機(jī)磷農(nóng)藥混和標(biāo)樣，包括分子量較小的甲胺磷，分子量較大的亞胺硫磷，用乙酸乙酯+環(huán)己烷（1+1）定容10.0 mL，按1.3.2的條件上GPC。先初篩，棄去前面7 min,從8 min開始收集8 min～10 min﹑11 min～13 min﹑14 min～16 min﹑17 min～19 min 4個(gè)片段。試驗(yàn)結(jié)果顯示前3個(gè)片段有農(nóng)藥流出，再細(xì)篩，從8 min開始到16 min，每1分鐘收集一個(gè)片段，結(jié)果顯示從9 min～15 min檢出有機(jī)磷農(nóng)藥，而空白基質(zhì)試驗(yàn)中，油脂、色素等雜質(zhì)在9 min之前基本流出，考慮凝膠色譜柱有拖尾情況發(fā)生，最后將GPC收集時(shí)間確定為9 min～16 min，共7 min，收集流出液32.9 mL。

2.4 方法的線性關(guān)系與檢出限

14種有機(jī)磷在上述色譜條件下，按1.3.3進(jìn)行色譜分析，得到峰面積與濃度作的校正曲線，獲得線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)，以3倍信噪比計(jì)算14種農(nóng)藥的檢出限，結(jié)果見表1。

表1 14種有機(jī)磷農(nóng)藥的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限Table 1 Regression equation,Correlation coefficients and Limits of detection of 14 organophosphorus pesticidesq

從表1可看出在測定范圍內(nèi)，有機(jī)磷峰面積（A）與濃度（C）成良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)除亞胺硫磷外均在0.999以上，能滿足定量分析要求。

2.5 方法的準(zhǔn)確度和精密度

在一香水魚調(diào)料中加入14種有機(jī)磷農(nóng)藥的混和標(biāo)準(zhǔn)溶液（添加水平為 0.05、0.1、0.2 mg/kg）,按本法測定，每個(gè)水平重復(fù)5次，進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，得到14種有機(jī)磷農(nóng)藥的回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表2。

表2 14種有機(jī)磷在香水魚調(diào)料中的添加回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差Table 2 Recoveries and precision of 14 organophosphorus pesticides in spicy boiled fish seaning samples

續(xù)表2 14種有機(jī)磷在香水魚調(diào)料中的添加回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差Continue table 2 Recoveries and precision of 14 organophosphorus pesticides in spicy boiled fish seaning samples

空白樣品及香水魚調(diào)料加標(biāo)回收色譜圖見圖2、圖3。從表2可以得出：添加水平為0.05 mg/kg的有機(jī)磷農(nóng)藥的平均回收率為75.82%～122.64%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD（n=5）為1.0%～12.6%;添加水平為0.1 mg/kg有機(jī)磷農(nóng)藥的平均回收率為77.83%～112.25%，RSD（n=5）為1.9～9.3；添加水平為0.2 mg/kg有機(jī)磷農(nóng)藥的平均回收率為 81.40%～123.55%，RSD（n=5）為 1.9%～9.4%；方法具有較好的準(zhǔn)確度及精密度，同時(shí)從空白樣品色譜圖和添加回收色譜圖（圖2、圖3）可看出14種農(nóng)藥與基質(zhì)干擾物能夠較好地分離，且峰形對(duì)稱。

3 結(jié)論

本文采用GPC凈化除去了香水魚調(diào)料基質(zhì)中一些大分子量的基質(zhì)共提物，獲得了較滿意的凈化效果，采用GC-FPD檢測，方法簡便、靈敏，可操作性強(qiáng)，可以滿足各種香水魚調(diào)料中多種農(nóng)藥殘留分析的要求。此外，在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)毒死蜱添加回收偏低，其原因可能是基質(zhì)效應(yīng)，因?yàn)榛|(zhì)效應(yīng)顯著存在于有機(jī)磷農(nóng)藥的測定過程中[10]，既使樣品經(jīng)過GPC凈化，也可能存在基質(zhì)效應(yīng)。關(guān)于有機(jī)磷農(nóng)藥在調(diào)料基質(zhì)中的基質(zhì)效應(yīng)有待進(jìn)一步研究。

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Determination of Muti-Organophosphrous Pesticide Residues in Spicy Boiled Fish Seasoning

HAN Mei,YI Sheng-guo,YANG Xiao-feng,HOU Xue,LUO Xiao-mei
（Testing Center of Sichuan Academy of Agricultural Sciences,Chengdu 610066,Sichuan,China）

2011-11-22

韓梅（1969—），女（漢），副研究員，碩士研究生，主要從事食品檢驗(yàn)工作。