邵 鑫，周 潔，姚 武

（1.黃山職業(yè)技術(shù)學(xué)院，安徽黃山245000；2.黃山學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院，安徽黃山245041）

燈盞花素片中燈盞乙素含量的HPLC法測(cè)定

邵 鑫1，周 潔2，姚 武2

（1.黃山職業(yè)技術(shù)學(xué)院，安徽黃山245000；2.黃山學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院，安徽黃山245041）

燈盞乙素是從中藥燈盞花中提取的黃酮類有效成分。用HPLC法測(cè)定燈盞花素片中燈盞乙素的含量，采用C8反相柱，流動(dòng)相為乙腈∶水∶醋酸∶2%磷酸=20∶77.5∶2.0∶0.5（V/V）的混合溶液，流速1.2ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)335nm。該方法在0.03-0.24μg的范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，平均回收率為98.05%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差是1.9%。此方法快速、簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，可用于燈盞乙素的含量測(cè)定。

燈盞花素片；燈盞乙素；高效液相色譜法

燈盞花素片是燈盞花中提取的黃酮類有效成分制成的片劑，其主要有效成分為燈盞乙素(Seutellarin)，主要用于治療高血壓、腦栓塞等疾病。為了提高藥物的生物利用度，最大限度發(fā)揮藥效，需要建立準(zhǔn)確可靠的檢測(cè)方法來控制產(chǎn)品質(zhì)量、滿足臨床研究及藥代動(dòng)力學(xué)研究的需要。燈盞乙素的定量測(cè)定方法，已有不少報(bào)道。比如用LC/MS/MS方法[1]定量測(cè)定，此種方法定性定量準(zhǔn)確、靈敏度高，但需三級(jí)四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜作為HPLC的檢測(cè)器，儀器昂貴無法推廣。有文獻(xiàn)報(bào)道了以甲醇、水、乙酸混合液作為流動(dòng)相的HPLC方法，[2,3]但該方法保留時(shí)間較長(zhǎng)，導(dǎo)致分析時(shí)間也較長(zhǎng)。另有文獻(xiàn)以乙腈、水、乙酸為流動(dòng)相，[4,5]改善了分離效果，保留時(shí)間縮短。本文探索了以乙腈+水+醋酸+磷酸為流動(dòng)相，測(cè)定燈盞花素片中燈盞乙素的含量。實(shí)驗(yàn)證明在最佳條件下，保留時(shí)間進(jìn)一步縮短，且峰形良好，靈敏度進(jìn)一步提高，得到了類似串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)器的效果，實(shí)現(xiàn)了對(duì)燈盞乙素的簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確測(cè)定。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Agilent1200高效液相色譜儀（四元泵，C8反相柱，六通閥進(jìn)樣器，紫外可見光度檢測(cè)器，色譜工作站）。AL104型電子天平（上海天達(dá)儀器有限公司），SYC智能超級(jí)恒溫水槽（鞏義市英峪予華儀器廠），KQ-200VDB型雙頻數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），微孔濾膜（上海市新亞凈化器件廠）。

燈盞花素片（云南玉溪望子隆生物制藥有限公司），呈黃棕色。燈盞乙素標(biāo)準(zhǔn)品（上海融禾醫(yī)藥科技有限公司，純度>98%）。甲醇、磷酸為分析純，乙腈為色譜純。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法和色譜條件

取一定量的燈盞花素片于研缽中研成粉末，準(zhǔn)確稱量100mg樣品，至于小燒杯中，加入甲醇適量溶解，超聲20min，冷至室溫，轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻后微孔濾膜抽濾，回收濾液待用。

色譜條件：C8反相柱（4.6mm×150mm,5μm）；流動(dòng)相為乙腈∶水∶醋酸∶2%磷酸=20∶77.5∶2∶0.5（V/V）；流速：1.2mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為335nm。燈盞乙素對(duì)照品和燈盞花素片試液的色譜曲線如圖1。

圖1 燈盞乙素標(biāo)準(zhǔn)品(A)和燈盞花素片(B)的HPLC曲線

2 結(jié)果與討論

2.1 線性關(guān)系考查

稱取20mg燈盞乙素對(duì)照品用甲醇溶解定容為25mL，再稀釋50倍，得到準(zhǔn)確濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述色譜條件下依次進(jìn)樣2、5、10、15、20μL。以燈盞乙素進(jìn)樣量X（μg）與峰面積Y作線性回歸，得燈盞乙素進(jìn)樣量X（μg）及峰面積Y的回歸方程為Y=351.9X+8.110，相關(guān)系數(shù)為r=0.9981，表明燈盞乙素在0.032μg-0.32μg間進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.2 精密度實(shí)驗(yàn)

連續(xù)對(duì)同一燈盞花素片樣品進(jìn)行5次平行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏標(biāo)準(zhǔn)差RSD=0.51%，可見方法精密度良好。

2.3 回收率實(shí)驗(yàn)

在已知燈盞乙素含量的燈盞花素片樣品中準(zhǔn)確加入一定量的燈盞乙素標(biāo)樣，按上述色譜條件進(jìn)樣，平行測(cè)定5次，平均回收率為98.05%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.9%，結(jié)果見表1。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

2.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

燈盞花素片穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)是將燈盞花素片按實(shí)驗(yàn)方法超聲處理后，定容至25ml，取2ml稀釋到100ml，用0.45μm微孔濾膜過濾，所得濾液在室溫自然光下分別放置0h，1h，2h，14h，17h，31h后在相同色譜條件下進(jìn)樣10μL進(jìn)行測(cè)量，結(jié)果見表2，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.0%，說明方法穩(wěn)定性良好。

表2 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.5 樣品測(cè)定

為25mL的樣品液2mL，分別都用甲醇稀釋到100mL，用0.45μm微孔濾膜過濾，按色譜條件進(jìn)樣10μL，計(jì)算樣品中燈盞乙素的含量，結(jié)果見表3。

表3 燈盞花素片中燈盞乙素的含量（n=3）

3 結(jié)論

通過配制一定濃度的燈盞乙素對(duì)照品，用紫外分光光度計(jì)在220nm-500nm范圍進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果燈盞乙素在335nm處有最大吸收，所以紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)選為335nm。

本文實(shí)驗(yàn)采用流動(dòng)相為乙腈∶水∶醋酸∶2%磷酸=20∶77.5∶2∶0.5（V/V），結(jié)果燈盞乙素對(duì)照品和燈盞花素片樣品在2.2min處均出現(xiàn)特征峰，與其它文獻(xiàn)比較，保留時(shí)間更短，提高了分析測(cè)定的速度，分析靈敏度也進(jìn)一步提高。同時(shí)，燈盞花素片中的其它成分對(duì)測(cè)定沒有影響，證明此方法對(duì)燈盞乙素具有很好的專屬性。

[1]曲峻，王義明，羅國(guó)安，等.LC/MS/MS的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)方法定量測(cè)定燈盞乙素[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2000，35(2):139-141.

[2]馮紹華，楊振乾，張靜.HPLC法測(cè)定燈盞花素片中燈盞花乙素的含量，中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2005，6（5）：29-31.

[3]Xiong F,Wang H,Cheng J,Zhu J B.Determination of scutellarin in mouse plasma and different tissues by high-performance liquid chromatography.Journal of Chromatography B,2006,835(1,2):114-118.

[4]李廷釗，周萍，劉文庸，等.HPLC法測(cè)定燈盞細(xì)辛中燈盞花乙素的含量[J].中草藥，2004，35(11):1304-1305.

[5]王躍飛，潘桂湘，高秀梅，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定不同產(chǎn)地?zé)舯K細(xì)辛中4種有效成分的含量[J].藥物分析雜志，2009，29(3)：416-419.

責(zé)任編輯：胡德明

Abstract:Breviscapine is an active extract of flavonoids from traditional Chinese medicine Erigeron breviscapus(Vant.).An HPLC method for the determination of seutellarin in beviscapine tablets is reported.The sample is analyzed on a C8 column with a mobile phase containing acetonitrile(20%),water(77.5%),HAc(2%)and 2%H3PO4(0.5%).The flow rate and detection wavelength are 1.2 mL/min and 335 nm respectively.The calibration curve shows a good linearity within the range of 0.03-0.24μg.The average recovery is 98.05%and RSD is 1.9%.Being simple,rapid and accurate,this method can be used in the quantitative determination of scutellarin.

Key Words:breviscapine tablet;scutellarin;HPLC

Determination of Scutellarin in Breviscapine Tablets by HPLC

Shao Xin1,Zhou Jie2,Yao Wu2
(1.Huangshan Vocational College,Huangshan245000,China;2.School of Chemistry and Chemical Engineering,Huangshan University,Huangshan245041,China)

O657

A

1672-447X（2012）03-0053-002

2012-01-20

安徽省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（11040606M41）；安徽省教育廳自然科學(xué)研究項(xiàng)目（KJ2010B215）；黃山學(xué)院博士人才啟動(dòng)項(xiàng)目（2009xkjq001）

邵鑫（1965-），安徽黃山人，黃山職業(yè)技術(shù)學(xué)院高級(jí)講師，研究方向?yàn)橹参镔Y源有效成分。