周衛(wèi)華 石慧娟 楊梅松竹 鐘 飛 米長忠 (吉首大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖南 吉首 416000)

酒精濫用和由此導(dǎo)致的酒精依賴已成為現(xiàn)代社會嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題〔1〕，蛇菰科為雙子葉多年生寄生肉質(zhì)草本植物，具有補肝益腎，止血生肌，調(diào)經(jīng)活血，清熱醒酒之功效〔2〕，廣西瑤族和黔南布依族民間有飯酒前服用蛇菰解酒的習(xí)俗。蛇菰的解酒毒作用已經(jīng)得到證實〔3〕，臨床試用于肝炎和肝硬化有一定療效〔4〕。但蛇菰提取物對酒精性肝損傷的保護(hù)作用還未見報道，本實驗利用大鼠酒精性肝損傷模型，研究蛇菰提取物對酒精誘導(dǎo)的肝損傷模型大鼠的保肝作用及其可能機制，為其開發(fā)提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 雄性Wistar大鼠40只，體重200～250 g，由湖南斯萊克景達(dá)實驗動物有限公司提供。蛇菰:購自吉首市益豐藥店，經(jīng)吉首大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室鑒定。無水乙醇(國藥集團化學(xué)試劑公司);谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)試劑盒(20100827);谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)試劑盒(20100828);丙二醛(MDA)試劑盒(批號20110616);超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(批號20110616);谷胱苷肽過氧化物酶(GSH-Px)試劑盒(20110615);BCA蛋白濃度測定試劑盒(20110905)，均購自南京建成生物工程研究所。

1.2 方法

1.2.1 蛇菰水提物的制備 蛇菰全草50℃過夜干燥，粉碎過60目篩子，量取50 g用蒸餾水500 ml溶解，煎煮1 h，過濾得濃縮液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得其浸膏12.76 g，將其配置成50 ml，相當(dāng)于每毫升含生藥1 g，實驗時稀釋至所需濃度。

1.2.2 實驗分組與給藥 40只大鼠購回后適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d，將40只大鼠隨機分為正常組、模型組、蛇菰水提物低劑量組和高劑量組各10只。造模〔5〕共需10 d，正常組:6.0 ml/kg生理鹽水灌胃，1 h后50%葡萄糖14 ml/kg灌胃;模型組:每天定時以6.0 ml/kg生理鹽水灌胃，1 h后二鍋頭14 ml/kg灌胃;蛇菰水提物組:蛇菰水提物低劑量組和高劑量組定時分別給予1.5 g/kg和3 g/kg蛇菰水提物灌胃，1 h后以二鍋頭14 ml/kg灌胃。

1.2.3 血清ALT和AST的活性測定 第11天，用20%的烏拉坦麻醉大鼠，摘眼球取血，3 500 r/min離心10 min，取上清，按試劑盒說明書，測定血清AST和ALT活性。

1.2.4 肝組織蛋白質(zhì)、MDA、SOD、GSH-Px含量及活性的測定用20%的烏拉坦麻醉大鼠，解剖取相同部位的肝組織冰浴研磨10 min，然后用玻璃勻漿器研磨10 min，用冷生理鹽水配制成10%肝勻漿液，4 000 r/min離心10 min，取上清液，按試劑盒說明書，測定肝組織蛋白質(zhì)、MDA含量和SOD、GSH-Px活性。

1.2.5 肝組織病理學(xué)檢查 用20%的烏拉坦麻醉大鼠，解剖取其肝右中葉，10%的甲醛固定24 h，常規(guī)脫水透明，石蠟包埋，切片，片厚5 μm，HE染色，光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果并照相。

2 結(jié)果

2.1 蛇菰水提物對酒精性肝損傷大鼠血清ALT和AST的影響 模型組大鼠血清AST和ALT活性顯著高于正常組(P＜0.01)，而蛇菰水提物不同劑量組血清AST和ALT明顯低于模型組(P ＜0.01)，見表1。

表1 蛇菰水提物對酒精性肝損傷大鼠血清ALT和AST的影響(，n=10)

表1 蛇菰水提物對酒精性肝損傷大鼠血清ALT和AST的影響(，n=10)

與模型組比較:1)P＜0.01

組別 AST(U/L) ALT(IU/L)正常組 65.54±12.041) 58.55±11.751)模型組 164.82±31.09 170.59±30.75蛇菰低劑量組 110.76±15.221) 115.32±16.781)蛇菰高劑量組 90.98±26.781) 85.02±27.581)

2.2 蛇菰水提物對酒精性肝損傷大鼠肝組織SOD，GSH-Px活性和MDA含量的影響 與正常組相比，模型組的SOD和GSHPx活性顯著降低(P＜0.01)，MDA含量顯著升高(P＜0.01);蛇菰水提物各劑量組的SOD和GSH-Px活性升高，與模型組差異顯著(P＜0.01)，MDA的含量降低與模型組差異顯著(P＜0.01)，見表2。

表2 蛇菰水提物對酒精性肝損傷大鼠肝組織SOD，GSH-Px活性和MDA含量的影響(，n=10)

表2 蛇菰水提物對酒精性肝損傷大鼠肝組織SOD，GSH-Px活性和MDA含量的影響(，n=10)

與模型組比較:1)P＜0.01，2)P＜0.05

組別 SOD(U/mg) SH-Px(U/mg) MDA(nmol/mg)正常組 27.60±4.981) 44.76±7.391) 9.38±1.581)模型組 12.79±1.94 24.56±4.76 19.34±3.26蛇菰低劑量組 17.48±3.781) 32.08±4.952) 15.82±2.432)蛇菰高劑量組 21.38±3.581) 36.12±5.641) 14.83±2.722)

2.3 肝組織的病理學(xué)檢查 大體解剖肉眼觀察可見，正常組大鼠肝臟呈紅褐色，質(zhì)地柔軟，富有彈性。酒精性肝損傷組大鼠肝臟體積增大，淤血明顯，肝臟表面有少量點狀出血。蛇菰水提物組肝臟輕度腫大，比較接近正常組。顯微鏡觀察如圖1所示，正常組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列，大小均勻，無變性、壞死等病理改變，肝索排列整齊，無炎癥細(xì)胞浸潤;模型組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)被破壞，肝索排列紊亂，肝細(xì)胞呈大面積水腫變性，胞漿疏松透亮，部分肝細(xì)胞脂肪變，匯管區(qū)有炎細(xì)胞浸潤;蛇菰水提物處理組較模型組肝細(xì)胞水腫和脂肪變程度明顯減輕，炎細(xì)胞浸潤程度也有所減輕。

圖1 蛇菰水提物酒精性肝損傷大鼠肝組織的影響(HE，×400)

3 討論

本研究證實大鼠酒精性肝損傷模型是成功的。經(jīng)蛇菰水體物干預(yù)后，大鼠肝組織脂肪變性和炎癥浸潤明顯減輕，大鼠血清ALT、AST活性下降，表明蛇菰對酒精性肝損傷有顯著的保護(hù)作用。

乙醇經(jīng)胃腸道吸收，約90%在肝細(xì)胞內(nèi)氧化代謝。乙醇代謝產(chǎn)生大量有害自由基，包括O－2、H2O2、OH－及C2H5O－和C2H5OH－〔6〕;機體抗氧化能力不足以應(yīng)付自由基的積累，氧化應(yīng)激便發(fā)生在肝臟中，氧化應(yīng)激在肝功能損害中發(fā)揮重要作用〔7〕。由此產(chǎn)生的自由基氧化生物膜脂質(zhì)，破壞肝細(xì)胞膜及線粒體膜的正常結(jié)構(gòu)，最終導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的改變〔8〕。MDA是脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，可作為反映機體組織或細(xì)胞受自由基攻擊和損傷的指標(biāo);GSH-Px和SOD是體內(nèi)主要的抗氧化的酶，其活力的高低反映了機體清除自由基和抗氧化能力的高低。本研究中模型組大鼠MDA含量顯著升高，而SOD和GSH-Px活性顯著降低。而灌胃給予蛇菰可增強肝臟的SOD和GSH-Px活性，并降低其MDA含量，其護(hù)肝作用可能是通過增強肝細(xì)胞內(nèi)清除自由基的酶的活性實現(xiàn)的。王慧等〔9，10〕研究表明，蛇菰提取物具有較強的抗氧化活性;而蛇菰中含有三萜類、苯丙素類、甾醇類、鞣質(zhì)類、黃酮類及其苷類等多種化學(xué)成分，其中三萜類、苯丙素類及黃酮類均具有抗氧化活性，但具體是哪一種成分具有保肝作用，需要進(jìn)一步研究。

1 Moriarty KJ，Platt H，Crompton S，et al.Collaborative care for alcohol-related liver disease〔J〕.Clin Med，2007;7(2):125-8.

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4 陳吉炎，李 聰，王雪芹，等.蛇菰屬藥用植物的種類與研究進(jìn)展〔J〕. 時珍國醫(yī)國藥，2010;21(8):2032-4.

5 張維麗，潘 玲，胡勝軍，等.枳黃方對急性酒精性肝病大鼠TNF-α和內(nèi)毒素的影響〔J〕.中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，2006;16(2):99-100.

6 Conde de la Rosa L，Moshage H，Nieto N.Hepatocyte oxidant stress andalcoholic liver disease〔J〕.Rev Esp Enferm Dig，2008;100(3):156-63.

7 Niemela O，Parkkila S，Juvonen RO，et al.Cytochromes P450 2A6，2E1，and 3A and production of protein-aldehyde adducts in the liver of patients with alcoholic and non-alcoholic liver diseases〔J〕.J Hepatol，2000;33(6):893-901.

8 Bailey SM，Cunningham CC.Contribution of mitochondria to oxidative stress associated with alcoholic liver disease〔J〕.Free Radic Biol Med，2002;32(1):11-6.

9 王 慧，張紅歧，鄔昊洋，等.筒鞘蛇菰提取物及松柏苷的抗氧化作用研究〔J〕.三峽大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2009;31(3):99-101.

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