江呂泉 高坤祥 鄭 建 陳 建 吳 昊 陳林松 (武警江蘇總隊醫(yī)院胸外科，江蘇 揚州 225000)

非小細(xì)胞肺癌起源于肺泡上皮細(xì)胞和支氣管黏膜柱狀上皮細(xì)胞，其發(fā)展過程中機體多種基因和蛋白異常表達(dá)，并起促進(jìn)作用〔1〕。Kindlin－2是黏著斑蛋白家族重要成員，在腫瘤中高表達(dá)，其可能具有調(diào)節(jié)整合素的作用，并促進(jìn)細(xì)胞間黏附作用的改變〔2〕。Kiss－1是新發(fā)現(xiàn)的基因和蛋白，研究認(rèn)為其是重要的腫瘤抑制基因〔3〕。本實驗應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)探討非小細(xì)胞肺癌組織中Kindlin－2與Kiss－1的半定量表達(dá)，關(guān)注其相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 臨床材料 唐都醫(yī)院及本院2005年1月至2010年2月非小細(xì)胞肺癌術(shù)后留取的新鮮標(biāo)本作為觀察組，納入均符合WHO關(guān)于非小細(xì)胞肺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)病理學(xué)診斷醫(yī)師確診，患者隨訪資料完整。排除術(shù)前進(jìn)行放、化療的患者，共觀察89例，其中男性49例，女性40例，年齡50～79歲，平均60.3歲。同時選取同期病理證實為正常的肺組織53例作為對照組，其中男性30例，女性23例，年齡49～78歲，平均60.4歲。兩組在一般資料的比較中，無明顯差異。

1.2 方法 Kindlin－2與Kiss－1蛋白均購自武漢博士德生物技術(shù)有限公司，應(yīng)用Beckman Coulter公司生產(chǎn)流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。具體步驟參照劉愛東等〔4〕應(yīng)用的方法。實驗均由同一主管技師完成，減少誤差，嚴(yán)格質(zhì)控。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 按照Mordve等提出的流式細(xì)胞學(xué)定量分析的方法，采用熒光指數(shù)(FI)表示Kindlin－2或Kiss－1蛋白表達(dá)的相對含量。計算公式為:FI=(非小細(xì)胞肺癌中蛋白Kindlin－2或Kiss－1表達(dá)的平均熒光強度 －對照樣品平均熒光強度)/正常對照樣品平均熒光強度。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SAS6.12統(tǒng)計軟件，定量資料比較采用t檢驗，同時進(jìn)行線性相關(guān)性分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組 Kindlin－2與 Kiss－1表達(dá) Kindlin－2蛋白在觀察組中的表達(dá)量明顯高于對照組(P＜0.001)，Kiss－1在觀察組中的表達(dá)量明顯低于對照組(P＜0.01)，見表1。

表1 Kindlin-2與Kiss-1在觀察組與對照組中的表達(dá)

2.2 Kindlin－2與Kiss－1蛋白的表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床病理特征的關(guān)系 Kindlin－2與Kiss－1蛋白與非小細(xì)胞肺癌的有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、胸膜侵犯及不同Ki67表達(dá)中的差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05)，見表2。

表2 Kindlin-2與Kiss-1蛋白的表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床病理特征的關(guān)系

2.3 非小細(xì)胞肺癌中Kindlin－2與Kiss－1蛋白表達(dá)的相關(guān)性

對觀察組中Kindlin－2與Kiss－1的表達(dá)進(jìn)行線性相關(guān)分析，結(jié)果顯示Kindlin－2與 Kiss－1的表達(dá)具有負(fù)相關(guān)性(r= －0.46，P=0.023 5)。

3 討論

非小細(xì)胞肺癌近年來其發(fā)病率、復(fù)發(fā)率和死亡率呈上升趨勢。目前證實腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移與預(yù)后有關(guān)，其具體調(diào)節(jié)機制雖不明確，但是人們也發(fā)現(xiàn)了多種與轉(zhuǎn)移相關(guān)的蛋白。Kindlin作為黏著斑蛋白家族，均與細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞遷移、黏附及增殖有關(guān)，其中以Kindlin－2的功能最為廣泛，其可能與整合素β1或轉(zhuǎn)化生長因子具有內(nèi)在的共同作用位點。惡性腫瘤中Kindlin－2高表達(dá)，有觀點認(rèn)為Kindlin－2是從整合素通路的角度促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展〔5，6〕。Kiss－1作為一種抑癌基礎(chǔ)，是應(yīng)用微細(xì)胞介導(dǎo)技術(shù)在黑色素細(xì)胞株中發(fā)現(xiàn)的，定位于染色體1q32，包括4個外顯子，編碼產(chǎn)生54個氨基酸〔7〕，惡性腫瘤中Kiss－1低表達(dá)，使腫瘤從基因和蛋白水平失去了對腫瘤增殖及轉(zhuǎn)移的抑制作用，腫瘤進(jìn)展加速，惡性潛能升高〔8〕。

本實驗提示非小細(xì)胞肺癌發(fā)生過程中，Kindlin－2與Kiss－1的改變均起著某種促進(jìn)作用。實驗結(jié)果顯示Kindlin－2與Kiss－1的表達(dá)與腫瘤有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、胸膜侵犯及不同Ki67的表達(dá)密切相關(guān)，由于以上因素均與腫瘤進(jìn)展有關(guān)，同時與腫瘤的預(yù)后有關(guān)，因此提示Kindlin－2與Kiss－1蛋白不僅對腫瘤的進(jìn)展有促進(jìn)作用，還可能對判斷預(yù)后有一定價值。本研究提示二者在腫瘤的進(jìn)展中可能具有內(nèi)在作用。Kiss－1可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞質(zhì)內(nèi) NF－κB 蛋白的活性〔9，10〕，使其與 Kindlin－2 的結(jié)合降低，減少其合成，從而抑制腫瘤細(xì)胞的機動性、趨化性及侵襲性〔11〕，可這可能是二者協(xié)同作用的一個方面，但是其具體機體尚有待進(jìn)一步研究。Kindlin－2還參與整合蛋白活化、腫瘤的細(xì)胞遷移和增殖，由于Ki67是當(dāng)今觀察增殖指數(shù)的重要標(biāo)志蛋白，因此，Kindlin－2在不同Ki67表達(dá)率的差別也是Kindlin－2增殖作用的直接體現(xiàn)。也有觀點認(rèn)為Kindlin－2對腫瘤的血管新生有一定作用〔5〕，而 Kiss－1 對血管新生無明顯的作用，此機制可能是Kindlin－2促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的一個獨立通路方向，與Kiss－1的表達(dá)無關(guān)。

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