王小文 (中南大學(xué)湘雅醫(yī)院，湖南 長沙 410007)

胃癌是常見的消化道腫瘤之一，其發(fā)病機(jī)制是基因表達(dá)失調(diào)、細(xì)胞凋亡及遷移調(diào)控等多因素參與的過程〔1〕。生存素(Survivin)基因是一種抗凋亡基因〔2〕，編碼的Survivin蛋白在絕大多數(shù)腫瘤組織中高表達(dá)，是抑制細(xì)胞凋亡的重要因素。半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)是細(xì)胞凋亡機(jī)制中重要的效應(yīng)分子〔3〕，本研究的目的是通過對老年胃癌組織及癌旁組織Survivin及caspase-3的檢測，探討二者在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用及相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2008年5月至2011年5月本院手術(shù)切除的老年胃癌組織42例，同時選取32例癌旁組織做對照，所有標(biāo)本均行病理檢驗證實。42例老年胃癌患者中男30例，女12例，年齡60～85歲，中位數(shù)年齡72.1歲。腫瘤大?。? cm者26例，≥5 cm者16例。分化程度:未分化型17例，分化型25例。浸潤深度:T1～2者18例，T3～4者24例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者27例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者15例，TNM分期Ⅰ～Ⅱ期15例，Ⅲ～Ⅳ期27例。32例對照者男25例，女7例，年齡60～84歲，中位數(shù)年齡71.6歲。兩組患者在性別、年齡等臨床資料方面差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法 標(biāo)本經(jīng)甲醛固定、石蠟包埋后切片，采用免疫組織化學(xué)染色方法進(jìn)行檢測。兔抗人多克隆抗體Survivin、caspase-3鼠抗人抗體購自武漢博士德生物工程有限公司，S-P試劑盒及DAB顯色劑購自于北京中山生物制品公司，嚴(yán)格按試劑盒要求進(jìn)行試驗。以胃癌陽性切片為陽性對照，PBS代替一抗為陰性對照。

1.3 判定方法 Survivin、caspase-3以胞質(zhì)中出現(xiàn)明顯的棕黃色顆粒為陽性，無顯色為0分，淡黃色為1分，黃色2分，棕黃色3分。另外，以陽性細(xì)胞百分率計分，5%以下為0分，6% ～25%為1分，26% ～50%為2分，51% ～75%為3分，＞75%為4分。兩種積分相乘，0分為陰性，1～4分弱陽性，5～8分中等陽性，9～12分強(qiáng)陽性，弱陽性以上標(biāo)本計為陽性病例。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計分析軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計量資料用 表示，采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，Survivin與caspase-3的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織與癌旁組織Survivin與caspase-3表達(dá)率比較胃癌組織及癌旁組織Survivin陽性率分別為47.6%(20/42)和15.6%(5/32)，caspase-3陽性率分別為 31.0%(13/42)和56.3%(18/32)，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。

2.2 Survivin、caspase-3表達(dá)與胃癌組織臨床病理特征的關(guān)系Survivin表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤及臨床分期顯著相關(guān)(P＜0.05);caspase-3與組織分化、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及浸潤相關(guān)(P＜0.05)。見表1。

2.3 Survivin與caspase-3的相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，胃癌組織Survivin與caspase-3表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，r值為－0.287，P 值為0.012。

表1 胃癌組織Survivin與caspase-3表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系〔n(%)〕

3 討論

Survivin 是IAP基因家族成員，在人類胚胎組織及腫瘤組織中有不同程度表達(dá)，具有抗凋亡活性和促細(xì)胞增殖作用。已有的研究表明:Survivin高表達(dá)預(yù)示腫瘤患者預(yù)后不良，生存期縮短，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用〔4，5〕。

本組結(jié)果顯示:胃癌組織Survivin陽性率顯著高于癌旁組織，而caspase-3陽性率顯著低于癌旁組織。Survivin是目前為止發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)凋亡抑制因子，在大多數(shù)惡性腫瘤中高表達(dá)，并可抑制 caspase、P53 等誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡〔6，7〕。Survivin 在抑制腫瘤細(xì)胞凋亡的同時，還具有促進(jìn)細(xì)胞增殖和調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂的作用〔8，9〕。Survivin基因位于胞核及胞質(zhì)中，只有當(dāng)胞質(zhì)中存在caspase時，Survivin才能發(fā)揮其抑制細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂的雙重功能〔10〕。

Caspase家族是導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的蛋白酶系統(tǒng)，在細(xì)胞凋亡機(jī)制網(wǎng)絡(luò)中，caspase蛋白酶級聯(lián)反應(yīng)處于核心地位。而caspase-3被稱為死亡蛋白酶，是細(xì)胞凋亡下游的關(guān)鍵酶，涉及了凋亡的兩條途徑——死亡受體凋亡途徑和線粒體凋亡途徑〔11～13〕。在caspase凋亡級聯(lián)反應(yīng)通路中，caspase-3可被外在凋亡通路和內(nèi)在凋亡通路激活，對凋亡程序的執(zhí)行發(fā)揮樞紐的作用〔14〕。

Survivin與caspase-3不僅參與了老年胃癌的發(fā)生，同時也促進(jìn)了胃癌的浸潤及轉(zhuǎn)移，通過胃癌細(xì)胞Survivin與caspase-3表達(dá)的檢測，可預(yù)測胃癌生物學(xué)行為的惡性程度。Survivin高表達(dá)抑制了caspase-3的表達(dá)，可能是通過其BIR分子中氨基酸殘基 Trp67、Pro33、Cys34、caspase-3、caspase-7 結(jié)合，抑制了caspase酶的凋亡作用、參與細(xì)胞調(diào)控及調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂的多種生物作用。

綜上所述，Survivin與caspase-3參與了老年胃癌的發(fā)生及轉(zhuǎn)移浸潤，其可能機(jī)制為Survivin在癌組織的高表達(dá)抑制了caspase-3的表達(dá)，最終促進(jìn)胃癌病程的發(fā)展。Survivin和caspase-3的表達(dá)強(qiáng)度與胃癌的臨床病理特征及發(fā)展趨勢密切相關(guān)，可作為胃癌的病情觀察及評估預(yù)后的預(yù)測指標(biāo)。

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2 Kappler M，Ror S，Taubert H，et al.The effects of knockdown of wild-type survivin，surviving-2B or surviving-delta3 on the radiosensitization in soft tissue sarcoma cells in vitro under different oxygen conditions〔J〕.Cancer Gene Ther，2007;14(12):994-1001.

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