劉曉燕

(江蘇省泗洪縣人民醫(yī)院藥劑科 223900)

HPLC法測定活絡鎮(zhèn)痛片中淫羊藿苷的含量

劉曉燕

(江蘇省泗洪縣人民醫(yī)院藥劑科 223900)

目的建立高效液相色譜法測定活絡鎮(zhèn)痛片中淫羊藿苷的含量測定方法。方法KromasilC18(5μm，250x4.6mm);流動相:甲醇 －0.4%磷酸溶液(55:45);檢測波長:270nm，柱溫:35℃。結果 淫羊藿苷在0.072～0.36μg范圍內線性關系良好(r=0.9999)，平均回收率為99.18%(n=5)，RSD為1.89%。結論結果準確，重復性好，可用于該制劑的質量控制。

活絡鎮(zhèn)痛片;淫羊藿苷;含量測定;HPLC

活絡鎮(zhèn)痛片是由淫羊藿、天南星、紅花、防風、白芷、當歸等多味中藥組成的復方制劑。具有舒筋活血，消瘀止痛。主要用于閃腰岔氣，瘀血作痛，筋骨疼痛，腰痛、腿痛之功效。為控制該產品質量，保證療效，我們參考相關文獻［1－4］，用 HPLC法對其中的淫羊藿進行含量測定。

1 儀器與試藥

UNICO UV－2102型紫外分析儀;JASCO 2000液相色譜儀，JASCO UV－1575紫外檢測器，N2000色譜工作站;BRANSON SB3200超聲波清洗器;Satorius BS 110S型電子天平。

淫羊藿苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用)，甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

活絡鎮(zhèn)痛片樣品與陰性樣品均由江蘇省洪州醫(yī)藥有限公司提供。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 KromasilC －18柱(4.6mmx250mm，5μm);流動相:甲醇 －0.4%磷酸(55:45);流速:1.0ml/min;柱溫:35℃;檢測波長:270nm;進樣20μl。理論板數按淫羊藿苷峰計算應不低于2500。

2.2 對照品溶液與供試品溶液的制備精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含淫羊藿苷8μg的溶液，搖勻，作為對照品溶液。取本品10片，除去糖衣，研細，混勻。取0.5g，精密稱定，置索氏提取器中，加三氯甲烷適量，加熱回流提取至無色，藥渣揮干，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率120W，頻率50KHz)40分鐘，放冷，稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液1ml，用稀乙醇定容至5ml，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 陰性試驗取缺淫羊藿藥材的陰性樣品適量。按“2.2”供試品溶液的制備項下制得陰性對照溶液，并分別精密吸取供試品溶液、陰性溶液與對照品溶液，注入色譜儀，結果陰性樣品色譜在淫羊藿苷相應保留時間上沒有干擾峰。

2.4 線性關系的考察淫羊藿苷的標準曲線的繪制精密稱取淫羊藿苷對照品適量，置于50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成淫羊藿苷標準貯備液(36μg/ml)。精密吸取上述對照品溶液 1、2、3、4、5ml，分別用流動相稀釋至10ml，搖勻，制成濃度分別為3.6、7.2、10.8、14.4、18.0μg/ml的對照品溶液。精密吸取上述對照品溶液各20μl注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖。以進樣量(μg)為橫坐標(X)，以峰面積積分值A為縱坐標(Y)，進行線性回歸繪制標準曲線，計算得回歸方程:Y=1883324.167X+289.84，R=0.99995，結果表明淫羊藿苷在0.072－0.36μg范圍內呈良好的線性關系。

表1 對照品的標準曲線

2.5 進樣精密度試驗精密吸取同一濃度對照品溶液，依法測定，連續(xù)進樣5次，測定峰面積，RSD為1.28%。

2.6 穩(wěn)定性試驗 同一樣品供試液(批號040501)，每隔2小時測定一次，共測6次，其峰面積RSD為0.82%，表明樣品在10小時內具有良好的穩(wěn)定性。

2.7 重復性試驗 分別精密量取同一批號(批號040501)樣品5份，依法處理，測定，樣品含量為2.587、2.592、2.596、2.582、2.584mg/g，RSD 為 0.22%。

2.8 回收率測定精密量取已知含量的樣品(批號040501，含量為 2.588mg/g)5 份約 0.25g，各加入0.36mg/ml淫羊藿苷對照品溶液 1.5ml，依法處理，得供試品溶液。依法測定，并計算淫羊藿苷回收率為99.18%，RSD為1.89%，結果見表2

表2 加樣回收率試驗結果(n=5)

2.9 樣品測定分別精密量取不同批號的活絡鎮(zhèn)痛片樣品，按供試品溶液制備方法制備，如法測定，結果見表3

表3 樣品含量測定結果

3 討論

3.1 樣品提取條件的選擇在研究過程中分別進行了不同溶劑(稀乙醇、70%乙醇、95%乙醇、甲醇)、不同提取方法(加熱回流、超聲提取)和不同提取時間(20、30、40、50min)的比較，最后確定以稀乙醇超聲40min。

3.2 由于該品種為中藥復方制劑，樣品所含成分較多，因此先將樣品用三氯甲烷回流提取后取藥渣進行樣品的制備，以減少干擾。

［1］中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典(2002年增補本).北京:化學工業(yè)出版社，2000.8.

［2］張林，楊瑞琪.HPLC法測定復方蛾公口服液中淫羊藿含量［J］.黑龍江醫(yī)學，2001:25(4):258－259.

［3］王樹松，王曉風，徐鐸等，HPLC法測定益腎口服液中淫羊藿含量［J］.解放軍藥學學報，2001，17(5):282－283.

［4］中華人民共和國藥典委員會.中國藥典(一部).北京:化學工業(yè)出版社，2000.

ObjectiveTo establish a HPLC method for the determination

of Icariin in Huoluo zhentong pian.MethodsHPLC was used to quantitative analysis.The kromasil C18 column(5?m，250x4.6mm)was used，and mobile phase was composed of methanol－0.4%H3PO4/Water(55:45).Detection wavelength was at 270 nm at 35℃.Result The linear range of methods was 0.072 ～0.36ug(r=0.9999)，the average recovery was 99.18%(n=5)with RSD=1.89% .ConclusionThe result is accurate and the reproducibility is good.The method can be used for quality control of Tinctura

Huoluo zhentong pian;Icariin;determination;HPLC

R284

B ［學科分類代碼］310.4720

2012－04－05

1001—814X(2012)04—0020—02