楊 凌，張正香，莫開林，付卓銳

(1.四川大學化工學院，四川 成都 610065;2.四川省林業(yè)科學研究院，四川 成都 610081)

杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)屬杜仲科植物，為我國特有的單科目、單屬科、單種屬植物。四川是我國杜仲發(fā)源地及主產(chǎn)區(qū)之一，省內(nèi)大部分縣市均有分布。僅廣元市旺蒼縣現(xiàn)有杜仲面積就超過2萬hm2，早在1998年國家林業(yè)局就將旺蒼縣命名為“中國名特優(yōu)經(jīng)濟林杜仲之鄉(xiāng)”。杜仲性味甘、微辛、溫，無毒，有很多保健功能，如作強壯劑、安胎藥、降血壓藥等［1］。長期以來，杜仲僅以皮入藥，杜仲資源綜合利用率很低。經(jīng)過國內(nèi)外學者近20多年的大量研究表明:杜仲葉與皮化學成分，特別是有效成分基本一致，且杜仲葉中綠原酸的含量還高于杜仲皮。綠原酸是一種具有利膽、抗菌、降壓、抗腫瘤、降脂、清除自由基等多種藥理作用的物質(zhì)［2］?；诰G原酸已知的藥理作用、廣泛的應用前景及我國我省杜仲葉資源的極其豐富，將杜仲葉提取綠原酸產(chǎn)業(yè)化具有很好的社會效益和經(jīng)濟效益。為了解不同生境，不同樹齡，不同季節(jié)杜仲葉中綠原酸含量變化狀況，為工業(yè)化生產(chǎn)時杜仲葉的采收提供科學依據(jù)，本研究分別在四川廣元、蒲江杜仲基地采集杜仲葉樣品，進行了不同影響因素下杜仲葉中綠原酸含量的變化特征研究［3～5］。

1 研究區(qū)域概況

研究區(qū)域主要為廣元市和蒲江縣。廣元市屬于亞熱帶濕潤季風氣候，年降雨量800 mm～1000 mm，日照數(shù)1300 h～1400 h，年平均氣溫17℃左右。年平均氣溫16.1℃，7月份氣溫26.1℃，1月份氣溫4.9℃。年平均降雨108 mm，日照1398.0 h，無霜期264.5 d，四季分明，適宜生物繁衍生息。蒲江屬亞熱帶濕潤季風氣候，冬無嚴寒，夏無酷暑，氣候溫和，雨量充沛，宜種性廣。年平均氣溫16.4℃，日照1122 h，降雨1280 mm，相對濕度84%，常年無霜期302 d。

2 材料與方法

2.1 試劑與儀器

原料:杜仲葉采自四川省蒲江縣、廣元市等幾大杜仲基地

試劑:綠原酸標準品(中國藥品生物制品檢定所);其他試劑均為AR級;

儀器:紫外分光光度計(上海精密儀器廠生產(chǎn)的752N型)。

2.2 分析方法

目前，綠原酸的測定方法較多，本文采用紫外可見分光光度法測定杜仲葉中的綠原酸的含量。該法操作簡單，相對標準偏差較小，測定結(jié)果重復性好，所得數(shù)據(jù)精確［6］。

2.2.1 最大吸收峰的確定

精確稱取綠原酸標準品10mg，用純凈水稀釋定容于10 ml的容量瓶中，搖勻。吸取上述標準液1 ml，用0.2 M的鹽酸稀釋至10 ml，以0.2 M的鹽酸為空白，采用島津UV－251紫外可見分光光度計于200 nm～400 nm波長范圍掃描，結(jié)果表明該標準液在328 nm處有最大吸收峰，故選擇328 nm為測定波長。

2.2.2 標準曲線制作

分別精密稱取0.020 g綠原酸標準品，用純凈水稀釋至 50 ml，分別取 0 ml、0.4 ml、0.8 ml、1 ml、1.2 ml、1.6 ml上述標準液，放入25 ml容量瓶中，用0.2 M的鹽酸稀釋至25 ml，在328 nm處測吸光度A。

通過數(shù)據(jù)處理得回歸方程為:C=19.049x－0.0744，線性相關系數(shù)R=0.999。

綠原酸的含量(%)=(A×25×50)/(514×W)

式中 W——樣品的重量(g);

A——吸光值。

2.2.3 樣品處理及含量分析

圖1 綠原酸標準曲線

每次采集的杜仲葉樣品陰干后，準確稱取5 g杜仲葉粉放入250 ml磨口瓶中，加入40%乙醇溶液100 ml后密閉，于80℃水浴加熱提取25 min，放冷后過濾，用40%乙醇20 ml洗渣，合并提取液和洗滌液。取0.2 ml于25 ml容量瓶中，用0.2 M的鹽酸稀釋至刻度。在328 nm處測定吸光度A，然后求出綠原酸的含量，同時測樣品的水分，然后換算出絕干葉中綠原酸的含量。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同月份及樹齡杜仲葉中綠原酸含量變化實驗結(jié)果

蒲江杜仲葉基地不同采收期不同樹齡杜仲葉中綠原酸含量分析如下:

表1 蒲江杜仲基地不同樹齡不同月份杜仲葉中綠原酸含量

圖2 蒲江基地不同樹齡杜仲葉中綠原酸含量的月變化

從表1和圖2可以看出，杜仲葉中綠原酸含量隨月份有明顯的變化，4月份初生葉中綠原酸含量較高，隨后逐漸下降，在6月～7月時含量最低，然后又逐漸增高，到10月后，又達到較高水平。從表1不同樹齡杜仲葉各月份綠原酸含量的平均值可以看出，杜仲葉中綠原酸含量隨著樹齡的增大而降低。

3.2 不同產(chǎn)地不同坡向杜仲葉中綠原酸含量變化

采自蒲江，廣元兩地的不同樹齡不同坡向杜仲葉中綠原酸含量分析數(shù)據(jù)如表2所示。

表2 不同地區(qū)不同坡向杜仲葉中綠原酸含量

從表2數(shù)據(jù)可以看出，在樹齡相同的情況下，生長在陽坡的杜仲葉中綠原酸含量明顯高于生長在陰坡的杜仲葉中綠原酸含量;從同一產(chǎn)地不同樹齡杜仲葉綠原酸含量的對比可以看出，數(shù)據(jù)基本符合隨著樹齡增大綠原酸含量逐漸降低的趨勢，與表1數(shù)據(jù)所得結(jié)論一致。

3.3 不同的干燥方法對杜仲葉中綠原酸含量的影響

新鮮葉片含有大量水分，容易發(fā)霉、腐敗，導致其中活性物質(zhì)的大量損失。干燥可以去除新鮮葉片中的大部分水分，防止發(fā)霉、變色、蟲蛀及有效成分的分解和破壞，保證質(zhì)量，方便存儲。干燥的方法通常有曬干、烘干、陰干等。因此需要通過分析不同干燥方式對杜仲葉中綠原酸含量的影響，以此來確定工業(yè)化生產(chǎn)時杜仲葉的干燥方式。

將2010年9月16日采收的蒲江基地中樹齡為兩年的杜仲葉采用曬干、陰干和直接烘干(60℃)等不同的干燥方式干燥后測定其中的綠原酸含量，其值分別是:3.76%，3.99%，3.65%，可見陰干的干燥方式對杜仲葉中綠原酸的破壞性較小。因此建議工業(yè)化生產(chǎn)時杜仲葉的干燥采用陰干法。

3.4 杜仲葉的存儲時間對綠原酸含量的影響

2010年9月采自北川的杜仲葉，當時測綠原酸含量為2.03%，干燥后存儲，每3個月測其綠原酸含量，至2011年9月其綠原酸含量降至1.61%。由表3和圖3可以看出隨著杜仲葉存儲時間的延長，綠原酸含量會不斷下降，且隨著存儲時間的延長，綠原酸含量下降速度變緩。

表3 存儲時間對杜仲葉中綠原酸含量的影響

圖3 存儲時間對杜仲葉中綠原酸含量的影響

4 小結(jié)

4.1 季節(jié)影響

杜仲葉在不同發(fā)育階段其綠原酸含量是動態(tài)變化的，4月初生葉含量較高，此后不斷下降，直到幼果期含量最低，隨后又逐漸上升，到10月果熟期又達到較高水平。因此，采收杜仲葉的時間應當以果熟期為好，此時不僅葉中綠原酸含量高，而且葉的產(chǎn)量大，也不會對杜仲樹的生長產(chǎn)生影響。

4.2 樹齡影響

杜仲葉中綠原酸的含量隨樹齡不同而有所差異，基本符合隨著樹齡增大其綠原酸含量逐漸降低的趨勢。

4.3 坡向影響

在樹齡相同的情況下，生長在陽坡上的杜仲葉中綠原酸含量明顯大于生長在陰坡上杜仲葉中綠原酸的含量。這一結(jié)論與杜仲喜歡陽光充足的生長習性是相符的。因此杜仲應盡量種植于陽光充足之地。

4.4 存儲時間影響

存儲時間對杜仲葉綠原酸含量有影響，隨著貯藏時間的延長，綠原酸含量明顯降低，且隨著存儲時間的延長，綠原酸含量下降速度變緩。因此，為了減少杜仲葉采收后的綠原酸損失，應盡量減少存儲時間。

4.5 干燥方式影響

杜仲葉采用不同干燥方法將對綠原酸含量有影響。陰干，曬干，直接烘干3種干燥方式中陰干對杜仲葉中綠原酸含量影響最小。因此，建議實際生產(chǎn)中采用陰干的方式干燥杜仲葉。

［1］湯詩杰，李和平，賀善安.杜仲研究的現(xiàn)狀與展望［J］.林業(yè)科技開發(fā)，2007，21(2):8 ～12.

［2］劉軍海，任惠蘭，裘愛泳.杜仲葉中綠原酸的提取研究［J］時珍國醫(yī)國藥，2008，19(5):1184 ～1186.

［3］張萬鋒.不同月份杜仲葉中綠原酸含量的研究.安徽農(nóng)業(yè)科學，2008，36(19):8145 ～8146.

［4］王太霞，趙紅艷，柴志艷，等.杜仲葉生長發(fā)育過程中結(jié)構和綠原酸含量的變化［J］.時珍國醫(yī)國藥，2009，20(3):635 ～636.

［5］高致明，王太霞，喜進安.杜仲葉在生長發(fā)育過程中化學成分含量和結(jié)構的變化［J］.河南農(nóng)業(yè)大學學報，1997，31(2):145～146.

［6］蘭小艷，張學俊.杜仲葉中綠原酸含量檢測的研究［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2010，37(4):53 ～55.