楊瑞瑞 吳 芳 郄留霞 陜西省食品藥品檢驗所 （西安 710061）

冰片為常用中藥，具有開竅醒神，清熱止痛的功效。多用于熱病神昏、驚厥，中風痰厥，氣郁暴厥，中惡昏迷，胸痹心痛，目赤，口瘡，咽喉腫痛，耳道流膿。多入丸、散、片、膠囊等劑型使用。冰片、天然冰片、艾片在《中國藥典》2010年版一部中均有收載，【含量測定】項下分別測定龍腦、右旋龍腦、左旋龍腦，并且在各自的【檢查】項下收載了樟腦的檢查。

我們查到的《中國藥典》2010年版一部、《中成藥地標升國標》、《衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑》、《新藥轉正標準》等現行標準中共涉及到的含冰片制劑約890個品種，15類劑型，僅有74個品種在制劑項下對冰片含量進行控制。大部分含冰片的制劑中沒有冰片的控制指標，或有的僅在【鑒別】項下通過薄層色譜法、化學反應等方法進行控制。

為了有效控制含冰片制劑中冰片的質量，通過大量的實驗工作，建立了含冰片制劑中冰片的含量測定及樟腦限量檢查方法，并對部分常用制劑進行了測定。

1 儀器、試藥及試劑 1.1 儀器 Agilent 6890N氣相色譜儀，FID檢測器；XWK－Ⅲ無油空氣泵（天津華生分析儀器廠）；Sartorius AG ME 235S型電子分析天平。超聲波清洗器（無錫超聲電子設備有限公司）。

1.2 對照品及試劑 冰片對照品（批號為11671－200401），天然冰片對照品（批號為 111688－200501），樟腦對照品（批號為110747－200206）均購自中國藥品生物制品檢定所；水楊酸甲酯、乙醇、無水乙醇、乙酸乙酯等試劑均為分析純。

1.3 樣品 樣品均為市售，陰性對照樣品系按處方和生產工藝自制不含冰片的制劑。

2 對照品溶液、內標溶液及供試品溶液的制備

2.1 內標溶液的制備 精密稱取水楊酸甲酯2.0g，置于1000mL容量瓶中，加入乙酸乙酯至刻度，搖勻，作為貯備液；精密量取貯備液250mL，置于1000mL容量瓶中，加入乙酸乙酯至刻度，搖勻即得。

2.2 對照品溶液制備及校正因子計算 取冰片對照藥材適量，精密稱取兩份，分別置25mL量瓶中，加內標溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取2μL，注入氣相色譜儀，計算校正因子。見表1。

表1 校正因子計算結果

2.3 供試品溶液的制備 2.3.1 片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、散劑：樣品研細后取樣適量（使制成的溶液中冰片含量約為0.4mg／mL），置適宜的容量瓶中，加內標適量超聲15min，放涼，加內標溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.2 液體制劑：注射劑、口服液等可用內標液直接稀釋制成供試品溶液（含冰片約0.4mg／mL）。

2.3.3 大蜜丸：取大蜜丸，剪碎，取適量，精密稱定，精密加入硅藻土等量，研勻，精密稱取適量，置錐形瓶中，精密加適量內標液密塞，稱定重量，超聲處理15min，放冷，再稱定重量，用內標液補足減失的重量，搖勻，取續(xù)濾液，即得（含冰片約0.4mg／mL）。

2.3.4 膏劑：取適量膏劑，剪成條狀，置500mL圓底燒瓶中，加入150mL水，連結揮發(fā)油提取器，由揮發(fā)油測定器上端加水至溢流入圓底燒瓶為止，加入1mL甲苯，加熱回流4h，靜置冷卻，取甲苯層置于適宜的量瓶，并用適量的乙酸乙酯洗滌揮發(fā)油測定器，洗滌液并入量瓶中，加適量內標貯備溶液后，用乙酸乙酯定容至刻度，搖勻即得（每mL含內標0.5mg、含冰片約為0.4mg）。

3.試驗方法與結果 3.1 色譜條件選擇 條件一：采用彈性石英毛細管柱（柱長30m，內徑0.320mm，膜厚度0.50μm）DB－WAX（聚乙二醇－20M，Agilent公司）；程序升溫：初始溫度120℃，以每min10℃的速率升溫至180℃，保持3min；進樣口溫度為220℃，檢測器溫度為250℃；分流比為5：1。

條件二：程序升溫：初始溫度110℃，以每min10℃的速率升溫至180℃，保持3min；其余同條件一。

條件三：采用彈性石英毛細管柱（柱長30m，內徑0.320mm，膜厚度0.25μm），HP－FFAP（聚乙二醇硝基苯改性，Agilent公司）；程序升溫：初始溫度120℃，以每分鐘10℃的速率升溫至180℃，保持3min；其余同條件一。

條件四：采用彈性石英毛細管柱（柱長30m，內徑0.320mm，膜厚度0.25μm）OV－17（苯基甲基硅酮，涂布濃度為10%）；其余同條件一。

實驗結果表明，各條件下（除條件四外），分離度、理論塔板數等相關參數無顯著差異，龍腦、異龍腦及內標物（水楊酸甲酯）色譜峰分離度均大于4，理論板數按龍腦峰計算均不低于4000。條件四下，樟腦和龍腦、異龍腦不能達到基線分離。綜合考慮后選擇色譜條件一作為實驗用色譜方法。

3.2 提取溶劑選擇 精密稱取3份研細后的樣品（冠脈寧膠囊）適量（約含冰片10mg），分別置于25mL；量瓶中，各加內標溶液（內標溶液分別用乙酸乙酯、乙醇和無水乙醇配制）20mL，超聲15min，放冷，加內標溶液至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過后，精密吸取2μL，注入氣相色譜儀，測得峰面積，計算含量。

試驗結果表明，分別用乙酸乙酯、乙醇和無水乙醇作為溶劑，測定樣品中冰片含量，結果沒有顯著差異。乙酸乙酯提取的供試品溶液，雜質相對較少，并且可用于對液體制劑進行萃取，和《中國藥典》2010年版一部中冰片含量測定所用溶劑一致。故供試品溶液的提取（萃?。┻x乙酸乙酯作為溶劑。

3.3 專屬性試驗 按測定用樣品的處方和生產工藝，自制不含冰片的陰性對照樣品，按照供試品溶液的制備方法，制成陰性對照品溶液。按擬定的色譜法測定，記錄色譜圖。結果表明本方法測定冰片具有專屬性。見圖1。

圖1 對照品、樣品、陰性溶液氣相色譜圖

3.4 線性關系考察 精密稱取冰片對照藥材122.56mg，置25mL容量瓶中，加內標溶液（水楊酸甲酯濃度0.5046mg／mL）至刻度，搖勻，制成每1mL中含冰片4.9024mg的溶液，作為儲備液；精密吸取上述儲備液適量，依次加內標溶液（每1mL中含水楊酸甲酯0.5046mg）稀釋，分別制成1.9610mg·mL－1、0.9805mg· mL－1、0.4902mg· mL－1、0.1961mg· mL－1、0.0980mg· mL－1、0.0490mg·mL－1的溶液做為對照溶液；分別吸取上述儲備液及稀釋后的各溶液2μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積。以冰片峰面積與內標峰面積之比對進樣量進行線性回歸，求得方程為y＝1.3582x-0.0108，r＝1.00；表明冰片在0.098048μg～9.8048μg間呈良好的線性關系。

3.5 精密度試驗 精密吸取對照品溶液2μL，注入氣相色譜儀，連續(xù)進樣6次，記錄色譜峰，計算冰片峰面積與內標峰面積之比。結果比值均值為1.1165（n＝6），RSD為0.62%。表明精密度良好。

3.6 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液，每隔4h進樣1次，測定樣品溶液在24h內的峰面積，計算冰片峰面積與內標峰面積之比。結果比值均值為1.1158（n＝7），RSD為1.35%，表明樣品溶液制備后在24h內進樣穩(wěn)定性較好。

3.7 重復性試驗 取冠脈寧膠囊樣品，研勻，取約0.20g，精密稱定，置錐形瓶中，精密量取內標溶液（每1mL中含水楊酸甲酯為0.5046mg）10mL，稱定重量，超聲15min后，放冷，再次稱定重量，用內標溶液補足減失的重量。同法制備7份供試品溶液。按擬定的色譜方法測定，計算含量。結果冰片含量值為20.50mg·g－1，RSD為1.22%，表明重復性良好。

3.8 加樣回收率試驗 取冠脈寧膠囊樣品，研勻，取約0.1g（含冰片為20.50mg／g），精密稱取7份，分別置于具塞錐形瓶中并依次編號1～7。精密稱取冰片對照藥材20.6mg置100mL容量瓶中，加內標溶液（每1mL中含水楊酸甲酯為0.5046mg）溶解至刻度，制成對照品溶液。精密量取對照品溶液10mL分別加入1～7號錐形瓶中，同供試品溶液制成測定用溶液，按擬定的色譜方法測定，計算加樣回收率。結果表明加樣回收率良好。實驗數據及結果見表2。

表2 回收率實驗結果

圖2

3.9 樣品測定結果 測定了282批含冰片制劑中冰片的含量，結果相差懸殊，統(tǒng)計結果見表3。

表3 樣品中冰片測定結果

從測定結果可看出，除11批膠囊劑外，其他樣品中冰片含量98%達不到投料量的85%。說明樣品中普遍存在冰片投料不足或冰片質量欠佳的情況。

4 含量測定限度制定 根據樣品中冰片的測定結果，結合冰片在制劑中均以原藥粉入藥，樣品中冰片的含量應達到投料量的85%～115%。

5 討 論 采用氣相色譜法測定含冰片制劑中冰片的含量，方法簡單，靈敏度高，可有效控制含冰片制劑中冰片的含量。

該方法可同時用于含冰片制劑中樟腦的限量檢查，也可用于其它制劑中薄荷腦、樟腦、異龍腦、龍腦、水楊酸甲酯等的含量測定。色譜圖見圖2。

對內標物進行了選擇試驗，萘也可作為本實驗的內標物。

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