唐維政，孫鴻高

(海南省農(nóng)墾總醫(yī)院東湖院區(qū)檢驗(yàn)科，海南?？?70311)

乙型肝炎病毒PreS1抗原與HBV DNA載量及HBeAg的關(guān)系探討

唐維政，孫鴻高

(海南省農(nóng)墾總醫(yī)院東湖院區(qū)檢驗(yàn)科，海南?？?70311)

目的探討乙型肝炎病毒（HBV）前S1(PreS1)抗原與HBV DNA熒光定量結(jié)果及HBeAg之間的相關(guān)性，以了解PreS1抗原在反映HBV復(fù)制中的價(jià)值。方法對(duì)475例熒光定量PCR檢測(cè)HBV DNA陽性患者的血清PreS1抗原和HBVm結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果475例HBV DNA陽性患者中，PreS1抗原的陽性率為88.4%，且血清中HBV DNA載量水平與PreS1抗原陽性檢出率間不存在顯著相關(guān)性(χ2=0.41，P＞0.05)；HBeAg陽性率為50.9%，不同HBV DNA載量水平下HBeAg陽性檢出率間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=94.27，P＜0.01)，HBeAg陽性檢出率隨著HBV DNA載量增加而增加；HBV DNA陽性者血清中PreS1抗原陽性率與HBeAg陽性率之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=148.05，P＜0.01)。HBeAg陽性患者中PreS1抗原陽性率為92.6%，HBeAg陰性患者中PreS1抗原陽性率為84.1%，兩組PreS1抗原陽性率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.26，P＜0.01)。結(jié)論P(yáng)reS1抗原是判斷HBV復(fù)制的良好指標(biāo)，其與HBeAg沒有相關(guān)性，對(duì)HBV的復(fù)制和療效判斷優(yōu)于HBeAg，PreS1抗原可作為HBV DNA熒光定量的有益補(bǔ)充，用來判斷病毒復(fù)制情況。

乙型肝炎病毒；前S1抗原；HBV DNA

我國(guó)是乙型肝炎的高發(fā)區(qū)，慢性HBV攜帶者傳染性強(qiáng)弱、患者治療效果等始終是醫(yī)生和患者都十分關(guān)注的問題。過去認(rèn)為HBeAg陰性的乙肝患者傳染性弱，是否有病毒的復(fù)制，不進(jìn)行HBV DNA檢測(cè)則無法判斷。HBV DNA是診斷乙肝病毒復(fù)制的金標(biāo)準(zhǔn)，但其對(duì)檢測(cè)條件要求嚴(yán)格，一些單位不能開展，而且因DNA序列變異等原因，HBV DNA檢測(cè)也存在假陰性。近年來隨著乙肝病毒PreS1抗原檢測(cè)試劑盒的推廣應(yīng)用，對(duì)其在乙肝臨床診斷中的意義進(jìn)行了很多探討，但結(jié)論不一。本研究通過對(duì)HBV DNA陽性患者的PreS1抗原及HBVm進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)，探討PreS1抗原對(duì)乙肝病毒復(fù)制的診斷意義。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源2011年3月至2011年8月間本院門診及住院HBV DNA檢測(cè)陽性并同時(shí)檢測(cè)前S1抗原及HBVm的慢性乙型病毒性肝炎患者及慢性乙肝病毒攜帶者共475例，男301例，女174例；年齡20～65歲，平均40.4歲。

1.2 方法PreS1抗原檢測(cè)采用ELISA雙抗夾心法，試劑盒由湖北武漢康珠生物技術(shù)有限公司提供。HBVm采用ELISA法測(cè)定，試劑盒由廈門新創(chuàng)科技有限公司提供。ELISA法實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按試劑說明書進(jìn)行，酶標(biāo)儀為芬蘭雷勃Wellscan k3。HBV DNA檢測(cè)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法，儀器型號(hào)Taqman 33A，儀器和試劑均由上海復(fù)興長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司提供。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS16.0軟件統(tǒng)計(jì)，樣本率的差別采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 陽性檢查情況在475例HBV DNA陽性(病毒載量≥1×103copies/ml)的慢性乙肝患者及乙肝病毒攜帶者中，PreS1抗原陽性率為88.4%，HBeAg陽性率為50.9%，檢出率之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=148.05，P＜0.01)，見表1。

表1 475例HBV DNA陽性者血清中PreS1抗原與HBeAg檢出情況

2.2 血清中不同HBV DNA載量水平之間PreS1抗原與HBeAg檢出情況檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，不同HBV DNA載量水平下PreS1抗原檢出率間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而HBeAg檢出率隨HBV DNA載量水平增高而增高，不同HBV DNA載量水平下HBeAg檢出率之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見表2。

表2 不同HBV DNA載量水平下PreS1抗原與HBeAg檢出情況

2.3 不同載量水平下的檢出情況在475例HBV DNA陽性者血清中，HBeAg陽性和HBeAg陰性患者的PreS1抗原陽性率分別為92.6%和84.1%，兩組間PreS1抗原陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見表3。

表3 HBV DNA陽性者PreS1抗原與HBeAg相關(guān)分析

3 討論

目前認(rèn)為熒光定量PCR直接檢測(cè)患者血清HBV DNA載量，是反映HBV感染、復(fù)制及判斷治療效果的金標(biāo)準(zhǔn)。PreS1是HBV外膜蛋白的重要組成成分之一，在介導(dǎo)HBV感染和免疫清除中具有重要的作用。近年來，國(guó)內(nèi)外臨床研究表明PreS1抗原可作為判斷HBV復(fù)制的指標(biāo)。我們的研究表明，在HBV DNA陽性乙肝患者中，PreS1抗原和HBeAg的陽性率分別為88.4%和50.9%，PreS1抗原檢出率顯著高于HBeAg，表明PreS1抗原反映HBV復(fù)制時(shí)優(yōu)于HBeAg，與文獻(xiàn)報(bào)道相似[1-2]，但有的作者報(bào)道HBeAg檢出率顯著高于PreS1抗原[3]，可能與所選病例的感染狀態(tài)不同有關(guān)。

表2所示，無論病毒載量的高低，PreS1抗原檢出率間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這與PreS1抗原存在于病毒表面的理論相符，但有的報(bào)道PreS1隨HBV DNA含量的增加而增加[1]，與我們觀察的結(jié)果不同。HBeAg檢出率隨HBV DNA載量水平增高而增高，在HBV DNA載量≥1×107copies/ml組，PreS1抗原與HBeAg的陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表現(xiàn)出與HBV DNA高度相符，這提示在HBV低水平復(fù)制時(shí)檢測(cè)PreS1抗原更有意義。

在HBV DNA陽性情況下，HBeAg總的陰性率達(dá)49.0%。HBeAg陰性者中PreS1抗原的陽性率達(dá)84.1%，可能是由于HBV基因組前C區(qū)發(fā)生變異導(dǎo)致HBeAg表達(dá)障礙，此時(shí)HBeAg陰性并不表明HBV復(fù)制停止，過去認(rèn)為HBeAg陰性的乙肝病毒攜帶者傳染性低是不科學(xué)的。我國(guó)部分省市HBeAg陰性的慢性乙型肝炎患者經(jīng)過核酸序列測(cè)定，證實(shí)HBV前C區(qū)或C區(qū)啟動(dòng)區(qū)突變率為17.6%～78.9%。本文研究的475例HBV DNA陽性的標(biāo)本中仍有55例PreS1抗原陰性，可能與前S區(qū)缺失突變有關(guān)。Sugauchi等[4]研究表明，HBV攜帶者前S區(qū)缺失突變率為23%。國(guó)內(nèi)蔣棟等[5]檢測(cè)363例慢性乙型肝炎和無癥狀攜帶者血清，發(fā)現(xiàn)30例存在前S區(qū)缺失突變，而前S區(qū)突變并不影響病毒的復(fù)制和裝配。由于前C區(qū)突變的頻率遠(yuǎn)高于前S區(qū)突變，這可能是在反映HBV復(fù)制方面HBeAg不如PreS1靈敏的原因。

我們?cè)诮y(tǒng)計(jì)HBV DNA定量檢測(cè)結(jié)果小于1×l03copies/ml的55例患者中發(fā)現(xiàn)，HBVm檢測(cè)中有6例為“大三陽”模式，其他為“小三陽”模式，但有45例PreS1抗原為陽性，可能與選擇的病例一直在抗病毒治療有關(guān)，即抗病毒治療后，患者體內(nèi)HBV DNA載量下降至FQ-PCR的檢測(cè)限以下(＜1×103copies/m1)，肝細(xì)胞內(nèi)仍有病毒存在,或引物對(duì)應(yīng)的DNA序列變異等原因所致。

綜上所述，傳統(tǒng)上根據(jù)HBeAg是否陽性來判斷HBV的復(fù)制情況是很不嚴(yán)謹(jǐn)?shù)?。全面而真?shí)地反映HBV復(fù)制的情況都應(yīng)進(jìn)行血清PreS1抗原測(cè)定，有條件的最好同時(shí)進(jìn)行HBV DNA定量檢測(cè)。PreS1抗原是反映病毒復(fù)制的良好指標(biāo)，在HBeAg陰性或HBV DNA載量下降至FQ-PCR的檢測(cè)限以下或引物對(duì)應(yīng)的DNA序列變異時(shí)，PreS1抗原在病毒復(fù)制的監(jiān)測(cè)方面可以作為HBV DNA監(jiān)測(cè)不足的補(bǔ)充。

[1]占國(guó)清,譚華炳,李芳,等.血清乙型肝炎病毒前S1抗原對(duì)判定HBV DNA復(fù)制的臨床價(jià)值[J].實(shí)用肝臟病雜志,2011,14(2): 103-105.

[2]張春平,楊洋,譚太昌,等.乙型肝炎病毒載量與血清學(xué)標(biāo)志及PreS1抗原的關(guān)系[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2005,9(3):334-336.

[3]竇亞玲,李永哲,劉志肖,等.乙型肝炎病毒前S1抗原檢測(cè)的臨床價(jià)值[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2006,29(8):714-716.

[4]Sugauchi F,Ohno T,Orito E,et a1.Influence of hepatitis B virus genotypes 0n the development of PreS deletion and advanced liver disease[J].J Med Virol,2003,70(4):537-544.

[5]蔣棟,許軍,李若冰,等.乙型肝炎病毒前S基因區(qū)缺失突變發(fā)生機(jī)制的探討[J].病毒學(xué)報(bào),2002,18(4):317-324.

R512.6+2

B

1003—6350（2012）21—095—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.21.041

2012-03-31）

唐維政（1964—），男，江蘇省宿遷市人，副主任技師。