陳凱，周銀鳳，王玉棟，周折沖

（廣東藥學(xué)院附屬第一醫(yī)院口腔科，廣東廣州510080）

HPV感染和臨床相關(guān)資料與舌根癌預(yù)后關(guān)系的初步研究

陳凱，周銀鳳，王玉棟，周折沖

（廣東藥學(xué)院附屬第一醫(yī)院口腔科，廣東廣州510080）

目的評估HPV感染和臨床相關(guān)資料對舌根癌預(yù)后的影響。方法記錄56例舌根癌患者的相關(guān)臨床資料，包括診斷時年齡、性別、TNM分期、復(fù)發(fā)與否、治療方案和死亡原因，并對其中51例患者運(yùn)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase chain reaction，PCR）檢測其HPV感染狀態(tài)，統(tǒng)計分析HPV感染和臨床相關(guān)資料與預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果年齡越小則預(yù)示患者預(yù)后較好（P=0.015）。HPV陽性的腫瘤患者，其存活率有顯著變好的趨勢，但未能達(dá)到統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.140）。此外，通過多元分析發(fā)現(xiàn)年齡（P=0.004）是獨立的預(yù)后影響因子。結(jié)論年齡在臨床上可用作評估舌根癌預(yù)后的指標(biāo)。

舌根癌；年齡；人乳頭瘤病毒；預(yù)后因子

頭頸部腫瘤占所有腫瘤的3%～4%，其最主要危險因素是飲酒和吸煙[1-2]。2007年國際癌癥研究署（International Agency on Research for Cancer，IARC）提出人乳頭瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）也是口咽部鱗狀細(xì)胞癌的一個重要危險因素[3]。在許多國家，口咽部腫瘤的發(fā)生率逐步上升[1，4-6]，但是吸煙率下降，故HPV感染增多被認(rèn)為可能是導(dǎo)致該數(shù)據(jù)上升的原因[1，7]。同時較多證據(jù)顯示HPV是口咽癌陽性預(yù)后因子，HPV感染陽性的腫瘤患者，尤其是非吸煙患者，其生存率較HPV陰性的腫瘤患者高[7-8]。

舌根癌是口咽癌的主要組成部分，且和HPV感染密切相關(guān)。近年來，對口咽癌的治療已經(jīng)加強(qiáng)[7]。目前，患者多接受誘導(dǎo)化療或加強(qiáng)高分次放療，且部分患者使用表皮生長因子受體（Epidermal growth factor receptor，EGFR）抑制劑，這些往往導(dǎo)致一些額外的副作用。為了明確哪些因素會影響舌根癌患者的預(yù)后，我們檢測了廣東藥學(xué)院附屬第一醫(yī)院和廣州醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院1985-2010年間舌根癌的發(fā)病率和HPV感染發(fā)生率，評估HPV感染狀態(tài)及臨床相關(guān)資料與生存率之間的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 病例選擇1985-2010年間，廣東藥學(xué)院附屬第一醫(yī)院和廣州醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院有65例患者被診斷患有舌根部鱗狀細(xì)胞癌。本研究已經(jīng)通過了廣東藥學(xué)院附屬第一醫(yī)院倫理委員會認(rèn)證，5例患者不愿意參加本實驗，其他患者均簽署了知情同意書。對患者進(jìn)行進(jìn)一步追蹤，由一名資深病理醫(yī)生進(jìn)行再次診斷，其中4例患者被排除，最終有56例患者納入實驗。

1.2 臨床相關(guān)資料采集對最終納入實驗的56例患者記錄其臨床相關(guān)資料，內(nèi)容包括診斷時年齡、性別、TNM分期、復(fù)發(fā)與否、治療方案和死亡原因，見表1。56例患者中53例接受了放療預(yù)治療，并進(jìn)行了存活率分析，2例患者僅接受姑息治療，1例患者未采集到有效數(shù)據(jù)。

1.3 檢測HPV的DNA水平由于受到采集石蠟標(biāo)本的限制，僅對51例患者運(yùn)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢測HPV的DNA水平。從3片10 μm石蠟包埋的標(biāo)本中提取DNA。使用PCR方法檢測HPV的DNA水平，采用的引物是通用引物Gp5+/6+[9]和CpI/IIG[10]，目的區(qū)域分別是基因序列中的L1和E1區(qū)。這種方法幾乎可以檢測出口咽部和頸部癌癥中所有的HPV類型[11]。所有的HPV陰性樣本也同樣進(jìn)行PCR及DNA擴(kuò)增[12]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法變量間的關(guān)聯(lián)性運(yùn)用卡方檢驗或者是Fisher's exact test進(jìn)行檢測。所有臨床相關(guān)資料和HPV狀態(tài)與預(yù)后的關(guān)系用Kaplan-Meier plot和時序檢驗進(jìn)行分析。HPV感染狀態(tài)和被認(rèn)為可能影響生存率的因子如年齡、TNM分期、分化的水平、性別等分別進(jìn)行單因素分析后再進(jìn)行多元分析，以評估對死亡率風(fēng)險的影響。使用SPSS13.0漢化版軟件，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者及其腫瘤臨床表現(xiàn)特性圖1顯示的是1985-2010年每5年為一個單位的舌根癌患者的數(shù)據(jù)，可以觀察到舌根癌患者的數(shù)量呈現(xiàn)逐年上升的趨勢。表1顯示56例患者及其腫瘤的特性，但是并未獲得可靠的吸煙習(xí)慣的數(shù)據(jù)。隨訪時間中位數(shù)為28個月（0～121個月），未死亡患者隨訪時間中位數(shù)為68個月（2～121個月）。通過單因素分析顯示年齡越年輕（P=0.015）則預(yù)示患者預(yù)后較好（表2）。通過多元分析發(fā)現(xiàn)年齡是一個影響預(yù)后的因素（表3）。以下因素通過單變量和多元分析均顯示在生存率上差異無統(tǒng)計學(xué)意義，包括有分化程度、TNM分期和性別（表2、表3）。

圖1 1985-2010年間舌根癌患者的數(shù)量

2.2 HPV狀態(tài)及與臨床表現(xiàn)及預(yù)后的關(guān)系對56例腫瘤標(biāo)本中的51例標(biāo)本進(jìn)行HPV狀態(tài)分析，總共有29例（56.86%）為HPV陽性，其中包括HPV類型12種；22例（43.14%）為HPV陰性。HPV陽性患者29例，其中男性19例，女性10例，年齡34～52歲，平均43歲。隨著舌根癌患者數(shù)量逐年增多，HPV陽性檢出率也明顯上升，可以從1985-1999年21例患者確診與2000-2010年30例患者確診對比得知（P=0.009，圖2）。另外HPV陽性的舌根癌患者(年齡中位數(shù)為44歲)較HPV陰性的舌根癌患者(年齡中位數(shù)為63歲)明顯年輕，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.039，Mann-Whitney檢驗）。對51例患者中的48例患者進(jìn)行存活率分析，其中排除了接受姑息療的患者（n=2）和治療數(shù)據(jù)未采集到的患者（n=1）（表1）。結(jié)果顯示HPV陽性的腫瘤患者與其疾病相關(guān)的存活率較好有顯著趨勢，但是未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.14，表2）。

表1 56例患者及其腫瘤臨床表現(xiàn)特性

表2 單因素分析結(jié)果

表3 多元分析結(jié)果

圖2 舌根癌患者HPV檢測狀況

3 討論

本研究顯示從1985年到2010年廣東藥學(xué)院附屬第一醫(yī)院和廣州醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院舌根癌的發(fā)病率逐年上升，同時HPV陽性的患者也逐年增多。且通過PCR分析HPV感染狀態(tài)可以推測其可能是舌根癌患者的一個預(yù)后影響因子。HPV狀態(tài)顯示其具有成為一個陽性預(yù)后因子的趨勢，但可能由于本研究病例數(shù)的限制，未能達(dá)到統(tǒng)計學(xué)上的顯著差異。

對于廣州市地區(qū)，之前未見舌根癌的發(fā)病率上升和HPV感染陽性發(fā)生率上升的相關(guān)報道，但是在我國其他地區(qū)及其他國家已有相關(guān)報道[13-14]。這也說明了對于這個逐漸增多的患者人群，尋找到能對日后的個性化治療有利的預(yù)測預(yù)后因子是非常有必要的。

本實驗發(fā)現(xiàn)年齡因素與預(yù)后密切相關(guān)，且呈獨立相關(guān)，正如期望，年輕患者的臨床預(yù)后較好[15]。另外HPV陽性的舌根癌患者的年齡中位數(shù)較HPV陰性舌根癌患者的年齡中位數(shù)明顯較小，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，與之前的臨床報道相一致[13]。

當(dāng)將HPV感染狀態(tài)和其他臨床相關(guān)資料如診斷時年齡、TNM分期、分化程度和性別進(jìn)行多元分析時，年齡仍然是一個強(qiáng)的顯著預(yù)后影響因子，這就說明年齡可能不依賴其他因素，是一個獨立的預(yù)后影響因子。因此本研究推測診斷時年齡可評估舌根癌患者的預(yù)后。在后期的研究中，將納入更多的患者，并分析不同的治療方法等因素，以分析這些因素是否具有評估舌根癌患者預(yù)后的價值。

本研究的一個局限是樣本量不足，這也可能是HPV感染狀態(tài)并未在統(tǒng)計學(xué)意義上認(rèn)定為顯著預(yù)后影響因子的原因。但是HPV感染狀態(tài)作為一種趨勢，這與之前的報道一致。在后期的研究中，還可以對腫瘤標(biāo)記物如CD44、p16、EGFR、血管內(nèi)皮生長因子、上皮鈣粘蛋白、環(huán)氧化酶-2（COX-2）、Ki-67、p27等在治療后的表達(dá)水平與預(yù)后之間的關(guān)系進(jìn)行分析，尋找可能影響預(yù)后的因子，以指導(dǎo)臨床上對舌根癌患者預(yù)后的評估。

[1]Hammarstedt L,Dahlstrand H,Lindquist D,et al.The incidence of tonsillar cancer in Sweden is increasing[J].Acta Otolaryngo,2007, l127(9)：988-992.

[2]WHO：IARC Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risk of Chemicals to Humans[J].Lyon(France)：International Agency for Research on Cancer,1986,38：35-394.

[3]WHO：IARC Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risk to Humans.Human Papillomaviruses[J].Lyon(France)：InternationalAgency for Research on Cancer,2007,90：45-179.

[4]Frisch M,Hjalgrim H,Jaeger AB,et al.Changing patterns of tonsillar squamous cell carcinoma in the United States[J].Cancer Causes Control,2000,11(6)：489-495.

[5]Syrjanen S.HPV infections and tonsillar carcinoma[J].J Clin Pathol,2004,57(5)：449-455.

[6]Braakhuis BJ,Visser O,Leemans CR：Oral and oropharyngeal cancer in the Netherlands between 1989 and 2006：Increasing incidence,but not in young adults[J].Oral Oncol,2009,45(9)：85-89.

[7]薛萬林,劉春利.口腔鱗狀細(xì)胞癌及白斑人乳頭瘤病毒16型感染的臨床研究[J].臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志,2012,28(5)：293-294.

[8]Ragin CC,Taioli E.Survival of squamous cell carcinoma of the head and neck in relation to human papillomavirus infection：review and meta-analysis[J].Int J Cancer,2007,121(8)：1813-1820.

[9]de Roda Husman AM,Walboomers JM,van den Brule AJ,et al.The use of general primers GP5 and GP6 elongated at their 3'ends with adjacent highly conserved sequences improves human papillomavirus detection by PCR[J].J Gen Virol,1995,76(4)：1057-1062.

[10]Tieben LM,ter Schegget J,Minnaar RP,et al.Detection of cutaneous and genital HPV types in clinical samples by PCR using consensus primers[J].J Virol Methods,1993,42(2-3)：265-279.

[11]Ramqvist T,Du J,Lunden M,et al.Prevaccination prevalence of human papillomavirus types in the genital tract of 15-23 year-old women attending a youth health clinic in Stockholm,Sweden[J]. Scand J Infect Dis,2011,43(2)：115-121.

[12]Dahlgren L,Mellin H,Wangsa D,et al.Comparative genomic hybridization analysis of tonsillar cancer reveals a different pattern of genomic imbalances in human papillomavirus-positive and-negative tumor[J].Int J Cancer,2003,107(2)：244-249.

[13]何愛娥.人乳頭瘤病毒和人巨細(xì)胞病毒與口腔癌的關(guān)系[J].臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志,2008,24(9)：528-529.

[14]Nasman A,Attner P,Hammarstedt L,et al.Incidence of human papillomavirus(HPV)-positive tonsillar carcinoma in Stockholm,Sweden：an epidemic of viral-induced carcinoma[J].Int J Cancer,2009, 125(2)：362-366.

[15]Lindquist D,Romanitan M,Hammarstedt L,et al.Human papillomavirus is a favourable prognostic factor in tonsillar cancer and its oncogenic role is supported by the expression of E6 and E7[J].Mol Oncol1,2007,5(3)：350-355.

Correlation of HPV infection and related clinical data with the prognosis of tongue base carcinoma.

CHEN Kai, ZHOU Yin-feng,WANG Yu-dong,ZHOU Zhe-chong.Department of Stomatology,the First Affiliated Hospital of Guangdong Pharmaceutical University,Guangzhou 510080,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo study the correlation of HPV and related clinical data with the prognosis of tongue base carcinoma.MethodsThe clinical data was collected from 56 patients of tongue base carcinoma,including age at diagnosis,gender,TNM stage,relapse,treatment and cause of death.Fifty-one of the 56 patients were tested for HPV by polymerase chain reaction(PCR).The data were statistically analyzed.ResultsYounger patients were found to have better prognosis(P=0.015).Patients with HPV-positive were found to have a better disease-specific survival,but this did not reach statistical significance(P=0.140).Furthermore,multivariate analysis showed that age was the independent influence factor of the prognosis(P=0.004).ConclusionAge could be used as an independent factors in the evaluation of the prognosis.

Tongue base carcinoma;Age;Human papillomavirus;Prognostic factor

R739.86

A

1003—6350（2012）22—028—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.22.009

2012-06-25)

陳凱（1982—），男，廣東省廣州市人，住院醫(yī)師，本科。E-mail:chenkai198211@yahoo.cn