陳娥，吳育利

(海南海藥實業(yè)發(fā)展股份有限公司，海南?？?70204)

·藥物與臨床·

粉針無菌分裝過程中影響粉針劑質(zhì)量的因素

陳娥，吳育利

(海南海藥實業(yè)發(fā)展股份有限公司，海南海口570204)

目的嚴(yán)格控制無菌分裝的整個環(huán)境過程，確保藥品產(chǎn)品質(zhì)量。方法針對影響抗生素粉針劑質(zhì)量的幾個環(huán)境因素包括壓差、溫濕度、微生物污染、塵埃粒子數(shù)、包裝材料進(jìn)行實驗分析，總結(jié)這幾個因素對粉針劑質(zhì)量有何影響。結(jié)果超出所規(guī)定的指標(biāo)的各環(huán)境因素都會導(dǎo)致粉針半成品、成品質(zhì)量檢測不合格。結(jié)論應(yīng)該嚴(yán)格控制各項規(guī)定指標(biāo)，使其符合GMP要求。

粉針劑；壓差；溫濕度；微生物污染；包裝材料

注射用無菌粉末又稱粉針。臨床前用滅菌注射用水溶解后注射，是一種較常用的注射劑，適用于在水中不穩(wěn)定的藥物，特別是對濕熱敏感的抗生素及生物技術(shù)藥物，本實驗以注射用頭孢西丁鈉為例。

1 粉針質(zhì)量的環(huán)境因素分析

1.1 壓差、溫濕度、微生物污染、塵埃粒子、包裝材料對粉針的影響在亞潔凈狀態(tài)下做10批小樣對注射用頭孢西丁鈉粉針成品進(jìn)行考察，見表1。從表1中可看出所列舉的5個環(huán)境因素對粉針質(zhì)量都有影響，在亞潔凈狀態(tài)下做的10批小樣不合格率都超過了10%，檢測各因素對粉針質(zhì)量到底有何影響，將做如下的實驗進(jìn)行具體分析。

表1 影響粉針成品不合格因素統(tǒng)計表

2 壓差對粉針質(zhì)量的影響

2.1 儀器與試劑微壓差表，GWF-5J微粒分析儀；注射用頭孢西丁鈉，硫酸肼，烏洛托品。

2.2 方法

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制稱取硫酸肼1.00 g，置于100 ml量瓶中，加水適量使溶解，并用水稀釋至刻度，搖勻，放置4～6 h；取此溶液與等容量的10%烏洛托品溶液混合，搖勻，于25℃避光靜置24 h，取該溶液15.0 ml放100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，見表2。

表2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制(ml)

2.2.2 壓差對粉針成品相關(guān)檢測結(jié)果的影響在風(fēng)量測定之后，將待測區(qū)域的所有門都關(guān)閉并開啟房間中的排風(fēng)機或除塵機，通過墻壁上安裝的微壓差表讀出房間之間的壓差，然后再通過5次風(fēng)速、風(fēng)量的改變再重新測定壓差，將5次不同壓差條件下生產(chǎn)的粉針小樣進(jìn)行溶液澄清度、可見異物和成品不容性微粒檢測[1]，結(jié)果見表3。從以上6組數(shù)據(jù)可看出壓差處于5.2 Pa以上的各項相關(guān)檢測均符合國家藥典標(biāo)準(zhǔn)，壓差在5.2 Pa以下的成品質(zhì)量不合格。

表3 壓差對粉針成品相關(guān)檢測結(jié)果的影響

3 溫濕度對粉針質(zhì)量的影響

3.1 儀器與試劑儀器：濕度計、溫度計；試劑：注射用頭孢西丁鈉。

3.2 方法通過空調(diào)系統(tǒng)調(diào)整潔凈室內(nèi)溫度，將在不同溫度下生產(chǎn)的粉針小樣作澄清度與粉末色澤檢查，結(jié)果見表4。通過車間空調(diào)凈化系統(tǒng)在潔凈生產(chǎn)區(qū)進(jìn)行6次調(diào)整，在風(fēng)量、風(fēng)壓調(diào)整后，在待測的房間有代表性的工作區(qū)或中心點，用濕度計讀出室內(nèi)相對濕度值，然后在6次不同濕度條件下，按照我國醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))浮游菌的測試方法GB/ T16293-1996、醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))沉降菌的測試方法GB/T16294-1996規(guī)定的方法測定。分別取膠塞、西林瓶(10 ml)5個按干燥失重法進(jìn)行檢查[2]，結(jié)果見表5。分裝半成品澄清度：溶液應(yīng)澄清，如混濁，應(yīng)小于1號標(biāo)準(zhǔn)濁度液。由實驗數(shù)據(jù)可看出，溫度為28℃以上時粉針半成品溶液澄清度已經(jīng)大于1號標(biāo)準(zhǔn)濁度液，粉末色澤開始變黃；相對濕度為65%時，沉降菌已超出標(biāo)準(zhǔn)，膠塞、西林瓶水份及成品外觀檢測均不合格；溫度28℃以下，相對濕度為65%下時，成品檢測均合格。

表4 潔凈室溫度變化對粉針的影響

表5 潔凈室(區(qū))相對濕度對粉針的影響

4 微生物污染對粉針質(zhì)量的影響

4.1 培養(yǎng)基無菌性實驗材料：TSB/SCDM培養(yǎng)基(即胰酶咯胨大豆培養(yǎng)基)、西林瓶。方法：將滅菌后的TSB/SCDM培養(yǎng)基分裝于50支西林瓶中，蓋塞、封口后在30℃～35℃恒溫培養(yǎng)一周。結(jié)果：西林瓶TSB/SCDM培養(yǎng)基中無任何微生物生長，可用于培養(yǎng)基模擬粉針分裝試驗。

4.2 培養(yǎng)基模擬粉針分裝試驗為了使模擬分裝試驗結(jié)果與實際生產(chǎn)狀況更接近，將模擬分裝試驗的時間選擇在一次正常的批分裝生產(chǎn)后、區(qū)域熏蒸消毒之前。材料：乳糖(作模擬分裝用無菌粉末)、TSB/ SCDM培養(yǎng)基(經(jīng)無菌性試驗檢驗合格)、10 ml注射器、西林瓶、分裝樣品3 000瓶。方法：將1.0 g乳糖分裝到無菌西林瓶中，在用注射器將TSB/SCDM培養(yǎng)基8 ml注入瓶中，蓋膠塞，封鋁蓋，在30℃～35℃恒溫下進(jìn)行微生物培養(yǎng)一周。結(jié)果及計算：在實際工作中可根據(jù)模擬分裝中發(fā)現(xiàn)的污染瓶數(shù)、95%可信限控制上限進(jìn)行計算，見表6。根據(jù)統(tǒng)計學(xué)概率計算方法，污染率計算公式為[3]：污染率%＝(95%可信限的控制上限/模擬分裝的瓶數(shù))×100%經(jīng)檢驗，此次模擬分裝實驗污染瓶數(shù)為1，查表得95%可信限的控制上限為4.743 9，因此(4.743 9/3 000)×100%＝0.16%＞0.1%。

4.3 結(jié)論此次模擬分裝并不符合污染率的可接受標(biāo)準(zhǔn)，證明微生物污染水平已超標(biāo)，則應(yīng)立即停止生產(chǎn)，對潔凈室進(jìn)行消毒滅菌。

表6 模擬分裝污染瓶數(shù)、95%可信限控制上限、至少分裝的瓶數(shù)的關(guān)系

5 塵埃粒子對粉針質(zhì)量的影響

將在某一萬級潔凈生產(chǎn)區(qū)內(nèi)在六次不同狀態(tài)下測定塵埃粒子粒數(shù)[4]，然后將6種不同狀態(tài)下的小樣成品、半成品作抽樣檢查。

5.1 儀器與試劑塵埃粒子計數(shù)器試劑：注射用頭孢西丁鈉(1 g/瓶)、1號液、2號液。

5.2 方法在某一潔凈室內(nèi)，靜態(tài)。潔凈室溫度為25℃，潔凈室級別為萬級，相對溫度為47%，靜壓差為14 Pa下進(jìn)行檢測塵埃粒子對粉針的影響。結(jié)果見表7。

表7 不同塵埃粒子數(shù)時粉針相關(guān)檢測結(jié)果

5.3 結(jié)論當(dāng)≥0.5 μm的塵埃粒子個數(shù)達(dá)到286 902個/m3時，出現(xiàn)西林瓶可見異物檢測不合格，而當(dāng)≥0.5 μm和≥5 μm的粒子都超出檢測標(biāo)準(zhǔn)時，成品質(zhì)量都不合格。

6 包裝材料對粉針質(zhì)量的影響

用天然膠塞、丁基膠塞作為瓶塞對頭孢西丁鈉等4種抗生素粉針劑質(zhì)量的影響進(jìn)行了研究。

6.1 膠塞的透氣性對粉針劑質(zhì)量的影響[5-6]注射用粉末多采用天然橡膠塞，如果膠塞不緊則水分透過膠塞，而導(dǎo)致產(chǎn)品吸潮變質(zhì)。近年來，人工合成的丁基膠塞開始在市場出現(xiàn)，其透氣性比天然橡膠塞小十幾倍。實驗在相同條件下，不同種膠塞密封性不同對粉針劑質(zhì)量的影響；用同一條件下洗滌、干燥滅菌的西林瓶，分裝同一批注射用頭孢西丁鈉，再分別蓋上丁基膠塞、天然膠塞壓蓋后不封蠟，放置在溫度40℃，相對濕度為75%～90%的環(huán)境中進(jìn)行對比實驗，結(jié)果見表8。在相同條件下生產(chǎn)和貯存的粉針劑，使用天然膠塞的粉針劑外觀、水分、色級及含量四項指標(biāo)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于使用丁基膠塞的粉針劑，所以現(xiàn)在一些廠家已用丁基膠塞代替天然橡膠塞。

表8 不同膠塞對粉針質(zhì)量的影響

6.2 膠塞、瓶子所含的水分程度對粉針劑質(zhì)量的影響以10批理化性質(zhì)較穩(wěn)定的天然膠塞做實驗，測其吸水性，測試情況見表9。由表9對比分析，天然膠塞的吸水率明顯高于丁基膠塞，抗生素鈉鹽與鉀鹽均有吸濕性，入水后致使藥品失效，因此天然膠塞對粉針嚴(yán)密性有很大影響，以丁基膠塞替代天然膠塞已成為迫在眉睫的問題。

表9 丁基膠塞和天然膠塞吸水率情況統(tǒng)計表(%)

6.3 壓蓋及封蠟嚴(yán)密性對粉針劑質(zhì)量的影響取相同條件下分裝的80萬U注射用抗生素鈉為樣品，分鋁蓋不松動沾蠟、鋁蓋松動沾蠟、鋁蓋不松動不沾蠟、鋁蓋松動不沾蠟4種情況進(jìn)行考察(都使用天然膠塞)，每種情況取300支，放置在溫度40℃，相對濕度75%～90%的環(huán)境中，保存6個月，結(jié)果見表10。由表10可以看出，樣品在高溫、高濕的實驗條件下貯存6個月，壓蓋及沾蠟嚴(yán)密度對粉針劑質(zhì)量有很大影響，鋁蓋松動及不沾蠟(在生產(chǎn)過程中主要表現(xiàn)為漏蠟)都會引起粉針劑的結(jié)塊、變黃，并且使用天然膠塞時，不沾蠟比鋁蓋松動對粉針劑質(zhì)量的影響更大。

表10 壓蓋及粘蠟嚴(yán)密度對粉針劑質(zhì)量的影響

7 討論

潔凈室內(nèi)相鄰不同的房間內(nèi)都存在壓差，因為壓差隔離是防止?jié)崈羰覂?nèi)受到污染的一個重要手段，人員與物品的流動都會造成污染。根據(jù)GMP規(guī)定，相鄰不同級別房間的壓差絕對值應(yīng)大于等于5 Pa(0.5 mm水柱)，由實驗看出，壓差大于5 Pa時，相關(guān)檢測都符合中國藥典規(guī)定，但壓差＜6 Pa時，超出了本廠內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)(≥10 μm的粒子應(yīng)≥2 000個，≥25 μm的粒子應(yīng)少于等于200個)，所以為了提高粉針的質(zhì)量，壓差維持在6.0 Pa以上能較好的控制成品的不溶性微粒。

無菌室溫度、濕度的控制不僅應(yīng)考慮防止微生物的生長，而且還應(yīng)慮無菌室內(nèi)操作者工作條件的舒適狀況等。由實驗結(jié)果可知，溫度過高藥粉容易變黃，稀釋后溶液混濁，且人體易感悶熱，出汗，造成環(huán)境的污染。溫度過低人體易感寒冷。潔凈室相對濕度(HR)的高低同樣對藥品與人體兩方面都有影響，過低易產(chǎn)生靜電，人體舒適感差；過高易長菌。所以，根據(jù)我國實際，冬夏溫、濕度要求都應(yīng)降低，全年溫、濕度應(yīng)在18℃～26℃與45%～60%范圍內(nèi)變化較合適，確保符合GMP要求。

評價無菌模擬分裝試驗結(jié)果的主要指標(biāo)之一就是微生物污染水平，發(fā)達(dá)國家GMP一般明確要求控制生產(chǎn)各步的微生物污染水平，尤其對無菌制劑，產(chǎn)品最終滅菌或除菌過濾前的微生物水平必須嚴(yán)格控制。而微生物的特點是在一定的環(huán)境條件下會迅速繁殖，數(shù)量急劇增加，而且空氣中存在的微生物能通過各種途徑污染已清潔的設(shè)備。因此，為防止污染或降低污染發(fā)生的概率，在無菌室設(shè)計時應(yīng)該注意提供方便有效的無菌室消毒條件，而且每個無菌粉針劑生產(chǎn)企業(yè)均應(yīng)指定其無菌模擬分裝驗證制度，以保證無菌粉針劑分裝工藝過程符合無菌粉針劑分裝要求。

潔凈室塵埃粒子數(shù)的多少對粉針成品不溶性微粒檢測結(jié)果有很大的影響，人員的數(shù)量、動作幅度、走路的快慢等都會影響潔凈室的塵埃粒子數(shù)，因此，潔凈室應(yīng)控制熱源數(shù)量，且操作熱源的動作應(yīng)緩慢、平穩(wěn)，應(yīng)盡量避免不必的動作，減少產(chǎn)塵量。

在粉針生產(chǎn)過程中，膠塞的吸濕性及透氣性、壓蓋及沾蠟的嚴(yán)密度對粉針劑質(zhì)量的影響非常大，是引起粉針劑在有效期內(nèi)結(jié)塊、變黃的主要因素。如膠塞.瓶子水分偏高，其直接接觸藥粉而吸潮結(jié)塊，一般生產(chǎn)條件，應(yīng)控制膠塞水分≤0.05%，瓶子水分≤0.5 mg/只，另外包裝加紙盒，以保證藥品質(zhì)量。因此，為了保證產(chǎn)品質(zhì)量，保證人民用藥安全，我們必須嚴(yán)格控制生產(chǎn)過程中對產(chǎn)品質(zhì)量有影響的各種因素。為了減少粉針劑有效期內(nèi)結(jié)塊、變黃情況的發(fā)生，應(yīng)保證生產(chǎn)中使用的膠塞彈性好，膠塞與西林瓶密封嚴(yán)，鋁蓋不松動，封蠟均勻、嚴(yán)密。

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R944.1+1

B

1003—6350（2012）18—086—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.18.041

2012-06-26)

陳娥(1964—)，女，海南省東方市人，制藥工程師，本科。