蘇娟萍 馮瑪莉 靳桂春

山西省中醫(yī)院脾胃病科 (山西太原，030012)

非酒精性脂肪性肝病 (non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)是指除外酒精和其他明確的損肝因素所致的，以彌漫性肝細(xì)胞大泡性脂肪變、伴或不伴炎癥為主要特征的臨床病理綜合征。NAFLD雖通常被認(rèn)為是一種良性及靜止的病變，但可在較短期內(nèi)發(fā)展為不可逆的肝損害，同時(shí)還可能是代謝綜合征的原發(fā)疾病。近年來，NAFLD的發(fā)病率和檢出率日漸增多，其肝纖維化的發(fā)生率高達(dá)25%，且約1.5% ～8%的患者可進(jìn)展為肝硬化［1］，在總?cè)巳褐械幕疾÷蕿?5% ～30%左右，已成為一種全球性的疾病［2］。目前西藥治療以降脂及保肝藥為主，但缺乏針對(duì)性治療藥物。虎藻脂肝消膠囊為筆者臨床經(jīng)驗(yàn)方，多年的臨床應(yīng)用顯示其具有良好療效。為進(jìn)一步評(píng)價(jià)該藥物治療NAFLD的作用，為其臨床用藥提供依據(jù)，特對(duì)此復(fù)方制劑進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物 虎藻脂肝消膠囊 (由虎杖、海藻、黃芪、決明子、黃柏、赤芍等藥物組成)，山西省中醫(yī)藥研究院制劑室提供。用時(shí)以蒸餾水分別配制成濃度為0.188g/ml、0.375g/ml、0.75g/ml的混懸液。多烯磷脂酰膽堿膠囊 (易善復(fù))，購自賽諾菲安萬特 (北京)制藥有限公司，批號(hào)D9098，用時(shí)以蒸餾水配制成濃度為11.4mg/ml的溶液。

1.1.2 試劑 花生油為市售，山東魯花集團(tuán)生產(chǎn);脫氧膽酸鈉、膽固醇購自天津大茂化學(xué)試劑廠 (批號(hào)：20090928、20100126);SOD、MDA試劑盒購自南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20100302、20100302;葡糖糖試劑盒購自北京北化康泰臨床試劑有限公司，批號(hào)：200910628;胰島素試劑盒購自北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司，批號(hào)：20100326。

1.1.3 動(dòng)物 大鼠，SD種，清潔級(jí)，雌雄各半，體重 (200±10)g，山西省中醫(yī)藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室提供，合格證號(hào)：SXCK(晉)-0002。

1.1.4 主要儀器 KDC-1044低速離心機(jī) (科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司);HH-W21電熱恒溫水箱 (上海醫(yī)用恒溫設(shè)備廠);BP310P電子天平 (德國(guó)賽多利斯公司生產(chǎn));UV3000紫外可見光分光光度計(jì) (日本島津);DXC-800全自動(dòng)生化分析儀 (美國(guó)貝克曼庫爾特有限公司);XTL-2000光學(xué)顯微鏡 (上海宙山精密儀器廠)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物分組及模型建立 取大鼠62只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽性 (多烯磷脂酰膽堿)對(duì)照組、虎藻脂肝消膠囊低劑量組、中劑量組、高劑量組 (簡(jiǎn)稱治療低、中、高劑量組)共6組，除模型對(duì)照組12只外，其余每組10只。上述分組中正常對(duì)照組10只大鼠給予正常飼料，自由飲水。其余52只大鼠給予180g/L濃度的蔗糖水自由飲用，第1周每日以10ml/kg高脂乳劑灌胃，從第2周調(diào)整至20ml/kg，正常對(duì)照組大鼠每日以等量蒸餾水灌胃。高脂乳劑的制備參考文獻(xiàn)報(bào)道［3］，其主要成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.17的花生油、0.07的膽固醇、0.07的蔗糖、0.04的全脂奶粉及0.004的膽酸鹽。持續(xù)12周后，隨機(jī)取模型對(duì)照組大鼠兩只行肝臟病理組織學(xué)檢查，證實(shí)其發(fā)生輕～中度脂肪變性，造模完成。

1.2.2 給藥 造模完成后，低、中、高劑量組大鼠每日分別以0.188g/ml、0.375g/ml、0.75g/ml濃度的虎藻脂肝消膠囊混懸液各20ml/kg灌胃。陽性對(duì)照組大鼠每日給予11.4mg/ml濃度多烯磷脂酰膽堿20ml/kg灌胃。模型對(duì)照組和正常對(duì)照組每日以等量蒸餾水灌胃。均自由飲用自來水，共持續(xù)6周。

1.2.3 指標(biāo)檢測(cè) 動(dòng)物殺檢前禁食12小時(shí)稱體重，10%的烏拉坦溶液麻醉后腹主動(dòng)脈取血，離心分離血清，-4℃保存用于生化指標(biāo)檢測(cè)。按照試劑盒說明書要求，采用TBA法測(cè)定MDA，氧化酶法測(cè)定SOD、FBG，放免法測(cè)FINS。以空腹血糖 (FBG) ×空腹胰島素 (FINS)/22.5計(jì)算胰島素抵抗指數(shù) (HOMA-IR)［4］。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 11.5進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)。以P＜0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 虎藻脂肝消膠囊對(duì)大鼠血清SOD、MDA的影響 模型組SOD較正常組顯著降低而MDA顯著升高 (P＜0.01)，提示模型組大鼠體內(nèi)清除自由基的能力下降，且機(jī)體細(xì)胞受到自由基的攻擊。中、高劑量組大鼠SOD與模型組相比顯著升高，(P＜0.05和P＜0.01);而陽性對(duì)照組及低、高劑量組大鼠MDA與模型組相比顯著降低 (P＜0.05)?；⒃逯蜗z囊對(duì)大鼠體內(nèi)自由基的清除有顯著改善作用。見表1。

表1 各組大鼠血清SOD、MDA檢查結(jié)果比較(±s)

表1 各組大鼠血清SOD、MDA檢查結(jié)果比較(±s)

與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與正常對(duì)照組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01; 與陽性對(duì)照組比較，●P ＜0.05

組別 n SOD(U/ml) MDA(nmol/L)正常對(duì)照組 10 163.226±8.851＊＊● 4.760±2.000＊＊模型對(duì)照組 9 141.541 ±18.645△△● 7.300 ±2.343△△●陽性對(duì)照組 9 152.957±14.353△ 5.333±2.095*治療低劑量組 10 154.958 ±24.464 5.220 ±2.662*治療中劑量組 10 159.677 ±19.291* 5.660 ±2.690治療高劑量組 9 162.437±11.330＊＊ 5.333±2.435*

2.2 虎藻脂肝消膠囊對(duì)大鼠血糖、血清胰島素及胰島素抵抗指數(shù)的影響 模型組大鼠在FBG、FINS及HOMA-IR 3項(xiàng)指標(biāo)上與正常對(duì)照組比較差異均有顯著性意義 (P＜0.01)，提示存在胰島素抵抗。低劑量組大鼠FBG與模型組比較顯著降低 (P＜0.05);FINS改善以陽性對(duì)照組及高劑量組明顯 (P＜0.01);而陽性對(duì)照組、低劑量組、高劑量組大鼠在HOMA-IR的改善上，與模型組比較差異具有顯著性意義 (P＜0.01)，提示對(duì)模型大鼠的胰島素抵抗有較好的改善作用。見表2。

表2 各組大鼠血清FBG、FINS、HOMA-IR檢查結(jié)果比較(±s)

表2 各組大鼠血清FBG、FINS、HOMA-IR檢查結(jié)果比較(±s)

與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與正常對(duì)照組比較，△P＜0.05，△△P ＜0.01; 與陽性對(duì)照組比較，●P ＜0.05，●●P ＜0.01

組別 n FBG(mmol/L)FINS(mmol/L)HOMA-IR正常對(duì)照組 10 3.164 ±0.870＊＊●●23.659 ±1.855＊＊●●3.336 ±0.991＊＊●模型對(duì)照組 9 4.687 ±1.497△△33.333 ±6.334△△●●6.722 ±1.586△△●●陽性對(duì)照組 9 5.180 ±1.177△△19.542 ±3.662＊＊△△4.558 ±1.656＊＊△治療低劑量組 10 3.497±1.142＊●●31.916 ±6.276△△●●4.818 ±1.321＊＊△治療中劑量組 10 4.440±1.047△△28.847 ±6.357△●●5.689 ±1.764△治療高劑量組 9 4.687±1.471△△21.326 ±6.286＊＊4.325 ±1.536＊＊

3 討論

由于NAFLD影響因素眾多，發(fā)病機(jī)制不明確，目前尚無治療NAFLD的特效藥物。1998年Day［5］提出了著名的“二次打擊”學(xué)說，認(rèn)為胰島素抵抗 (IR)在NAFLD的發(fā)病機(jī)制中占有重要地位。研究提示，NAFLD可能是促炎和抑炎因子在IR初次打擊的基礎(chǔ)上觸發(fā)或抑制氧化應(yīng)激和肝內(nèi)脂質(zhì)過氧化不平衡，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行二次打擊的結(jié)果［6］。

氧自由基有較強(qiáng)的生物學(xué)活性，能與生物膜上的多價(jià)不飽和脂肪酸作用，發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，造成細(xì)胞及亞微結(jié)構(gòu)的損害。自由基造成生物體系損傷的重要因素是產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化物，其中最主要的是MDA。脂質(zhì)過氧化終產(chǎn)物MDA可形成蛋白加合物，刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體，介導(dǎo)免疫損傷。SOD通過歧化作用清除體內(nèi)氧自由基，減少脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，維持生物膜的正常結(jié)構(gòu)和功能，在自由基的產(chǎn)生與清除平衡中起著重要作用。

Mattews等［4］認(rèn)為，基礎(chǔ)狀態(tài)下血糖和胰島素的自我平衡是胰島β細(xì)胞、肝臟、外周組織三者相互作用的結(jié)果，從而提出評(píng)估IR的數(shù)學(xué)模型-自我平衡模型分析法 (Homeostasis model assessment，HOMA)：IR=(FBG × FINS)/22.5。有研究結(jié)果顯示，其與公認(rèn)的評(píng)價(jià)IR的“金指標(biāo)”C-葡萄糖胰島素鉗夾技術(shù) (glucose insulin clamp technique，CLAMP)相關(guān)性好［7］。

在前期的研究中，已證實(shí)虎藻脂肝消膠囊可降低大鼠血清中TG、TC、LDL-C水平，改善大鼠肝細(xì)胞脂肪變性程度，減輕脂肪對(duì)肝細(xì)胞造成的水腫以及炎癥損害［8］。本實(shí)驗(yàn)提示其治療NAFLD的作用可能與其減輕NAFLD患者胰島素抵抗水平、增強(qiáng)機(jī)體氧自由基清除能力有關(guān)，但其具體機(jī)制尚需進(jìn)一步深入研究。

［1］曾民德.脂肪肝［J］.中華消化雜志，1999，19(2)：120-122.

［2］石繡江，王曉忠，曾斌芳.非酒精性脂肪肝的研究進(jìn)展 ［J］.新疆中醫(yī)藥，2010，28(2)73-75.

［3］張蕾，戴敏，陳禮明，等.高脂高糖誘導(dǎo)脂肪肝胰島素抵抗大鼠模型的建立［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2009，25(6)：825-828.

［4］MATTEWS DR，HOSKER JP，RUDENSKI AS，et al.Homeostasis model assessment：insulin resistance and beta-cell function form fasting plasma.glucose and insulin concentrations in man［J］.Diabetologia，1985，28(7)：412-419.

［5］DAY C，JAMES O.Steatohepatitis：A tale of two “hits”? ［J］.Gastoenterology，1998，114(4)：842-845.

［6］YCON D，LEE SH，PARK HS，et al.Hypoadipo-ncctincmia and insulin resistance arcassociated with nonalcoholic fatty liver disease［J］.Korean Med Sci，2005，20(3)：421-426.

［7］程瑩，薛剛，胡曉莉，等.幾種簡(jiǎn)易胰島素抵抗檢測(cè)方法的探討［J］.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，26(3)：261-262.

［8］蘇娟萍，馮瑪莉，靳桂春，等.虎藻脂肝消膠囊對(duì)大鼠非酒精性脂肪肝的實(shí)驗(yàn)研究.山西中醫(yī)，2011，27(11)：45-48.