郭繼文 李德強

增殖細胞核抗原(PCNA)在甲狀腺癌中的表達及意義

郭繼文 李德強

目的研究PCNA在甲狀腺癌組織、甲狀腺良性腫瘤組織及癌旁組織中的表達，并與甲狀腺癌患者的年齡、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否等進行比較，探討其與甲狀腺癌侵襲/轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組化的方法檢測25例甲狀腺癌組織、17例癌旁組織及26例甲狀腺良性腫瘤組織中PCNA的表達情況，并對數(shù)據(jù)進行分析。結(jié)果PCNA蛋白在甲狀腺癌組織、癌旁組織及甲狀腺良性腫瘤組織中的表達率分別為68.00%、23.53%和19.23%，經(jīng)統(tǒng)計學分析，PNCA蛋白在甲狀腺癌與癌旁組織(P=0.029)、甲狀腺癌與甲狀腺良性腫瘤組織(P=0.018)之間的表達率差異有顯著性差異，而癌旁組織與良性腫瘤組織之間無顯著性差異(P＞0.05)。PCNA蛋白在Ⅰ期+Ⅱ期、Ⅲ期+Ⅳ期患者中的表達率分別為42.86%、100%，經(jīng)統(tǒng)計學分析，兩組間的表達率有統(tǒng)計學差異(P=0.021)。PCNA蛋白在伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺癌組織中的表達率分別為83.33%及28.57%，兩者有顯著性差異(P=0.011)。結(jié)論PCNA在甲狀腺癌中的表達率明顯高于癌旁組織及甲狀腺良性腫瘤組織;PCNA的表達與甲狀腺癌的臨床分期關(guān)系密切，臨床分期越晚，PCNA的表達率越高。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移甲狀腺癌PCNA表達率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。

甲狀腺癌;增殖細胞核抗原;免疫組化

研究表明許多腫瘤的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及預(yù)后與腫瘤細胞的增殖活性關(guān)系密切。增殖細胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen，PCNA)是細胞增殖相關(guān)核抗原中比較受關(guān)注的一種。本研究對PCNA在甲狀腺癌組織、癌旁組織及甲狀腺良性腫瘤組織中的表達進行檢測，并與甲狀腺癌患者年齡、臨床分期、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移進行比較，探討其與甲狀腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2010年8月至2011年8月甲狀腺手術(shù)切除的新鮮標本68例。其中甲狀腺癌標本25例，包括甲狀腺乳頭狀癌18例，濾泡癌3例，髓樣癌4例。甲狀腺良性標本26例，包括橋本甲狀腺炎5例，甲狀腺腺瘤9例，結(jié)節(jié)性甲狀腺腫12例，另外收集17例甲狀腺癌旁組織。

1.2 采集標本 手術(shù)中收集癌灶中央組織約0.5cm×0.5cm×0.5cm，在距離癌灶至少1cm處收取癌旁組織，所有標本均裝進無菌管內(nèi)，入液氮罐冷凍后放入-80℃冰箱保存，所有標本術(shù)后均行病理檢查。

1.3 免疫組化檢測 蛋白檢測采用鏈霉素抗生物素蛋白-生物素免疫染色方法。石蠟包埋甲狀腺病理標本，4μm連續(xù)切片，入60℃烤箱烘干，二甲苯脫蠟，酒精梯度脫水，蒸餾水漂洗，抗原修復(fù)，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，血清封閉后加入一抗，工作濃度1:50，37℃孵育1h。PBS沖洗，去除PBS液后每張切片加一滴生物素標記的二抗，室溫下孵育10min，滴加DAB工作液，于鏡下觀察顯色，出現(xiàn)陽性染色后再充分水洗，蘇木素復(fù)染，PBS沖洗返藍，酒精脫水干燥，樹膠封固。對照:從步驟6，同時設(shè)立空白對照(不加一抗)其余操作不變，用已知陽性切片作陽性對照。

1.4 結(jié)果判斷 隨機選擇10個高倍(×400)視野，根據(jù)染色程度和染色細胞百分率進行分析評分。A、表達數(shù)量:①表達陽性細胞數(shù)是0為0分;②表達陽性細胞數(shù)≤25%為1分;③表達陽性細胞數(shù)介于26% ～50%為2分;④表達陽性細胞數(shù)介于51% ～75%為3分;⑤ 表達陽性細胞數(shù)＞75%為4分。B、表達強度:①沒有陽性信號，為0分;②陽性信號弱為淡棕色且呈細顆粒狀，為1分;③陽性信號中等為棕色且呈粗顆粒狀，為2分;④陽性信號強烈為棕褐色且呈小塊狀，為3分。將兩者得分相加，陰性(-)為0分，弱陽性(+)為2～3分，中度陽性(++)為4～5分，強陽性(+++)為6～7分。

1.5 統(tǒng)計學方法 計數(shù)資料采用χ2檢驗及四表格確切概率法，SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計學處理。

2 結(jié)果

2.1 免疫組織化學染色結(jié)果 PCNA蛋白主要在細胞核表達，棕黃色顆粒，部分細胞細胞漿內(nèi)也可見到PCNA蛋白的表達。

2.2 甲狀腺癌組織、癌旁組織及甲狀腺良性腫瘤組織中PCNA蛋白的表達 如表1所示PCNA蛋白在甲狀腺癌組織、癌旁組織及甲狀腺良性腫瘤組織中的表達率分別為68.00%、23.53%和19.23%，經(jīng)統(tǒng)計學分析，甲狀腺癌與癌旁組織(P=0.029)、甲狀腺癌與甲狀腺良性腫瘤組織(P=0.018)之間的PCNA表達率有顯著性差異，而癌旁組織與良性腫瘤組織之間的PCNA表達率無顯著性差異(P＞0.05)。

表1 PCNA在甲狀腺癌組織、癌旁組織及甲狀腺良性腫瘤組織中的表達

2.3 PCNA蛋白與臨床病理特征的關(guān)系 如表2所示PNCA蛋白在Ⅰ期+Ⅱ期、Ⅲ期+Ⅳ期患者中的表達率分別為42.86%、100%，經(jīng)統(tǒng)計學分析，兩組間的表達率有統(tǒng)計學差異(P=0.021)。PCNA蛋白在伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移甲狀腺癌表達率為83.33%，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達率為28.57%，兩者有顯著性差異(P=0.011)。

表2 PCNA蛋白與臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

3.1 PCNA的基本結(jié)構(gòu)和功能 細胞增殖相關(guān)核抗原的探討對了解細胞的生長，損傷組織的修復(fù)及惡性腫瘤轉(zhuǎn)移等有很重要的意義。PCNA與細胞的增殖周期關(guān)系密切，它的分子量約為36KD，是一種酸性非組蛋白核蛋白，性質(zhì)相對穩(wěn)定，半衰期為20h左右。人類的PCNA基因定位于第20號染色體上，含有5個內(nèi)含子和6個外顯子，是一個長約7.0KB的斷裂基因［1］。有學者認為在正常的細胞周期中，PCNA的表達與DNA復(fù)制有關(guān)，因此它可以作為一個反映S期的標志物，也有作者認為在細胞周期中主要是與復(fù)制有關(guān)的PCNA所占的比例變化較大，而PCNA的總體水平變化不太顯著。PCNA是細胞周期能夠順利進行及DNA合成的必須蛋白質(zhì)之一，其作用機制目前不清楚。用PCNA的反義寡聚脫氧棱苷酸處理了Balb/c3T3細胞株之后，其細胞周期和DNA合成抑制，說明PCNA在DNA復(fù)制中起重要作用。此外，PCNA在DNA損傷修復(fù)過程中也發(fā)揮了重要作用［2］。

3.2 PCNA與腫瘤的關(guān)系 本組數(shù)據(jù)顯示，PCNA在甲狀腺癌組的表達率為68.00%，而在癌旁組織和良性腫瘤中表達率分別為23.53%和19.23%，低于甲狀腺癌中的表達。PCNA在不同TNM分期及淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移的標本中有顯著性差異，在TNMⅢ+Ⅳ和具有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中，PCNA的表達明顯高于TNMⅠ+Ⅱ和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，由此看出在甲狀腺癌的臨床分期轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移中，PCNA起到了很重要的作用。De Marzo等［3］的研究表明，PCNA是細胞核DNA合成必需的核蛋白之一，由于癌前病變和癌組織的DNA合成紊亂，其PCNA表達明顯增加。目前關(guān)于不同腫瘤組織中PCNA的表達情況，及其與腫瘤的臨床分期、病理分級、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移等綜合起來分析的研究較多，但研究結(jié)果并不一致，多數(shù)傾向于PNCA在實體腫瘤中的表達與病理分期關(guān)系密切，其隨著腫瘤的惡性程度增高而表達增加，并且與腫瘤的轉(zhuǎn)移、浸潤等生物學行為密切相關(guān)。Kayaselcuk等［4］發(fā)現(xiàn)PCNA陽性率與中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤組織類型和分級呈正相關(guān)。國外學者對PCNA在前列腺癌、胃癌、肺癌、乳腺癌等組織中的表達進行檢測，發(fā)現(xiàn)PCNA高表達患者預(yù)后不良［5-9］。本組研究表明PCNA與甲狀腺癌腫瘤的生長和浸潤以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間存在著密切相關(guān)性，即PCNA表達率高的甲狀腺癌細胞惡性程度高，細胞增殖活躍，侵襲性大，轉(zhuǎn)移機會高，預(yù)后不良。因此PCNA有可能成為甲狀腺癌的輔助診斷及良惡性甲狀腺病變鑒別診斷的標志物之一。

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Expression of proliferating cell nuclear antigen in thyroid carcinoma and its clinical significance

GUO Ji-wen，LI De-qiang.Department of Surgery，Development Zone Hospital of Guangong，Guangdong 510730，China

ObjectiveTo explore the expression of PCNA in human thyroid carcinoma and the relationship between PCNA expression and clinical pathological features(patient’s age，clinical stage，limph node metastasis，).MethodsThe expression of PCNA in 25cases of human thyroid carcinoma tissues，17cases of paraneoplastic tissue and 26cases of adenoma was detected by immunohistochemistry.ResultsThe expression of PCNA in thyroid carcinoma tissues，adenoma，paraneoplastic tissue were 68.00%、19.23%and 23.53%，statistical difference was found between thyroid carcinoma tissues and paraneoplastic tissue(P=0.029)，between thyroid carcinoma tissues and adenoma tissue(P=0.018).The expression rate of PCNA in stageⅠ+Ⅱand stageⅢ +Ⅳwere 42.86%and 100%，statistical difference was found between them(P=0.021).ConclusionPCNA expression is higher in thyroid carcinoma tissues compared with paraneoplastic tissue and adenoma tissue.The thyroid carcinoma cells proliferation capacity is increase，degree of malignancy is higher and facilitates metastasis occurred which PCNA expressed.

Thyroid carcinoma;Proliferating cell nuclear antigen;Immunohistochemistry

510730廣州開發(fā)區(qū)醫(yī)院外科(郭繼文);湛江中心人民醫(yī)院外科(李德強)