楊惠蓮，謝靜，冷靜

(1.重慶市食品藥品檢驗(yàn)所，401121;2.重慶市中醫(yī)院藥劑科，400021)

八珍袋泡茶是由黨參、當(dāng)歸、川芎、白術(shù)、茯苓、甘草、白芍、熟地黃等八味藥組成的中藥成方制劑，具有補(bǔ)氣益血的作用，用于氣血兩虛、面色萎黃、食欲不振、四肢乏力、月經(jīng)過多等癥。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》第五冊(cè)，自1991年收錄后至今未做完善和提高，僅有性狀、顯微鑒別、干燥失重、裝量差異、浸出物及茶劑項(xiàng)下的常規(guī)檢查等項(xiàng)。2010年，我所接受了國(guó)家藥典委員會(huì)下達(dá)的提高八珍袋泡茶質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的任務(wù)，開始著手研究并建立了該品種中主要藥味的薄層色譜(thin layer chromatography，TLC)鑒別法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器939全自動(dòng)薄層制板器(重慶市南岸貝爾德儀器技術(shù)廠)，CAMAG REPROSTAR3薄層色譜成像儀(瑞士CAMAG公司)。

1.2 材料八珍袋泡茶(重慶希爾安藥業(yè)有限公司，每袋裝2.4 g，批號(hào):100301，100302，100303)。對(duì)照藥材黨參(批號(hào):121057-200805)、當(dāng)歸(批號(hào):120927-201014)、川芎(批號(hào):120918-200809)、白術(shù)(批號(hào):120925-200708)、茯苓(批號(hào):121117-200605)均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。硅膠G購(gòu)自青島海洋化工有限公司，實(shí)驗(yàn)用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 黨參的TLC鑒別本品2袋，取內(nèi)容物，加水100 mL煎煮30 min，濾過，濾液濃縮至近干，加稀鹽酸20 mL、三氯甲烷30 mL，加熱回流1 h，放冷，分取三氯甲烷液，酸液再用三氯甲烷30 mL提取1次，合并三氯甲烷液，揮干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液。按八珍袋泡茶處方，除去黨參，模擬工藝同法制成陰性對(duì)照溶液。另取黨參對(duì)照藥材2 g，加水50 mL，同法制成對(duì)照藥材溶液。吸取上述3種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(20∶4∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)。陰性對(duì)照色譜在相應(yīng)位置上無干擾(圖1)。

2.2 當(dāng)歸、川芎的TLC鑒別本品1袋，取內(nèi)容物，研細(xì)，加乙醚20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液揮干，殘?jiān)迎h(huán)己烷1 mL使溶解，作為供試品溶液。按八珍袋泡茶處方，除去當(dāng)歸、川芎，模擬工藝同法制成陰性對(duì)照溶液。另取當(dāng)歸、川芎對(duì)照藥材各0.5 g，分別同法制成對(duì)照藥材溶液。吸取上述4種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(波長(zhǎng)365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照色譜在相應(yīng)位置上無干擾(圖2)。

2.3 白術(shù)的TLC鑒別本品2袋，取內(nèi)容物，研細(xì)，加50%乙醇20 mL加熱回流1 h，濾過，濾液蒸至近干，加水20 mL使溶解，再加水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20 mL，分取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。按八珍袋泡茶處方，除去白術(shù)，模擬工藝同法制成陰性對(duì)照溶液。另取白術(shù)對(duì)照藥材0.5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(8∶2∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱10 min，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照色譜在相應(yīng)位置上無干擾(圖3)。

圖1 黨參薄層色譜圖

圖2 當(dāng)歸、川芎薄層色譜圖

2.4 茯苓的TLC鑒別方法以“2.2”項(xiàng)供試品溶液為供試品溶液。按八珍袋泡茶處方，除去茯苓，模擬工藝同法制成陰性對(duì)照溶液。另取茯苓對(duì)照藥材4 g，加乙醚50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液揮干，殘?jiān)迎h(huán)己烷1 mL使溶解，制成對(duì)照藥材溶液。吸取上述3種溶液10～20 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-三氯甲烷-丙酮(7∶3∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，放置15 min后，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的黃綠色熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照色譜在相應(yīng)位置上無干擾(圖4)。

圖3 白術(shù)薄層色譜圖

圖4 茯苓薄層色譜圖

3 討論

《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部收載的八珍顆粒[1]的處方與本制劑的處方一致，黨參在方中為君藥，故筆者首先參考藥典方法對(duì)黨參的TLC鑒別方法進(jìn)行了初步實(shí)驗(yàn)，結(jié)果供試品色譜中在與黨參對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。筆者又考察了自制板和市售玻璃預(yù)制板、常溫(25℃)和低溫(7℃)、不同相對(duì)濕度(20%和80%)，通過對(duì)上述耐用性和專屬性的考察，結(jié)果證明該方法專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，可用于八珍袋泡茶中黨參的薄層鑒別。

當(dāng)歸、川芎功效相近且具有相似的化學(xué)成分，均含有藁本內(nèi)酯等揮發(fā)性成分、阿魏酸等酸性水溶性成分[2-3]。為增加鑒別的專屬性，得到較多的色譜信息，TLC以當(dāng)歸、川芎對(duì)照藥材為對(duì)照，制備缺當(dāng)歸和川芎的雙陰性對(duì)照溶液，同時(shí)參考《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部當(dāng)歸[鑒別](2)項(xiàng)下供試品溶液的制備方法及TLC條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)[1]?？紤]到正己烷毒性較大，將展開劑中的正己烷改為環(huán)己烷，按前述條件進(jìn)行了耐用性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果證明該方法專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，能夠用于八珍袋泡茶中當(dāng)歸和川芎的薄層鑒別。

白術(shù)主要含揮發(fā)油，含量約為1.4%，其主要成分為蒼術(shù)酮、蒼術(shù)醇等[4]。另外還含有內(nèi)酯類成分、多糖類成分、谷氨酸等多種氨基酸以及樹脂、白術(shù)三醇、維生素A等物質(zhì)[5]。本品處方中白術(shù)為炒制品，據(jù)報(bào)道，白術(shù)炒制后揮發(fā)油的含量均有不同程度下降[6-7]，而其內(nèi)酯類成分如白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ等則有不同程度的增加[8-10]。筆者首先以蒼術(shù)酮對(duì)照品為對(duì)照進(jìn)行預(yù)試，結(jié)果供試品色譜中不能檢視到蒼術(shù)酮的斑點(diǎn)，故參考《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部八珍顆粒[1]及呂武清等[11]對(duì)其進(jìn)行了TLC鑒別方法的探索研究，并進(jìn)行了專屬性和耐用性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果證明該方法專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，能夠用于八珍袋泡茶中白術(shù)的薄層鑒別。

茯苓主要含多糖、三萜、脂肪酸、甾醇、酶等化學(xué)成分，因本方中藥味較多，要鑒別萜類和多糖類成分干擾較大，故參考文獻(xiàn)方法對(duì)其脂溶性部分進(jìn)行提取后再進(jìn)行鑒別[12]。經(jīng)過預(yù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，可以用鑒別當(dāng)歸、川芎的供試品溶液作為本項(xiàng)的供試品溶液，分別考察了“2.2”項(xiàng)的展開劑、環(huán)己烷-三氯甲烷-丙酮(7∶3∶1)、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶5∶0.5)[1]，結(jié)果以正文所述的展開劑展開后Rf值適中。另外考察了直接于紫外光燈(365 nm)下檢視，發(fā)現(xiàn)陰性對(duì)照有干擾，故改為10%硫酸乙醇顯色后放置15 min，再在紫外光燈(365 nm)下檢視，此時(shí)陰性對(duì)照無干擾，并進(jìn)行了耐用性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果證明該方法專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，能夠用于八珍袋泡茶中茯苓的薄層鑒別。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:124，224，436.

[2]武愛玲，王蘇靜，趙新杰.川芎的研究概述[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2009，2(1):101－102.

[3]劉穎.淺議當(dāng)歸的化學(xué)成分與臨床藥理作用[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2010，8(27):51－53.

[4]龍全江，徐雪琴，胡昀.白術(shù)的化學(xué)、藥理與炮制研究進(jìn)展[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2004，11(11):1033－1034.

[5]池玉梅，李偉，文紅梅，等.白術(shù)多糖的分離純化和化學(xué)結(jié)構(gòu)研究[J].中藥材，2001，24(9):647－648.

[6]陳玉英，張?zhí)祈?，鐘?白術(shù)不同炮制品的質(zhì)量比較[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2005，11(7):86－87.

[7]賈天柱，王延年，許明.白術(shù)炮制前后揮發(fā)油的薄層及氣質(zhì)聯(lián)用對(duì)比[J].遼寧中醫(yī)雜志，1998，25(9):431－432.

[8]文紅梅，張愛華，王莉，等.炮制對(duì)白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯I的含量影響[J].中藥材，1999，22(3):125－126.

[9]李偉，文紅梅，崔小兵，等.炮制對(duì)白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯II的含量影響[J].中藥材，2006，29(5):487－498.

[10]李偉，文紅梅，崔小兵，等.白術(shù)的炮制機(jī)制及其倍半萜成分轉(zhuǎn)化的研究[J].中國(guó)中藥雜志，2006，31(19):1600－1604.

[11]呂武清，龍新華.中成藥中的藥材薄層色譜鑒別[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1997:185－191.

[12]袁祥慧，楊帆，楊惠蓮.五苓片中桂枝、茯苓的薄層色譜鑒別[J].海峽藥學(xué)，2010，22(6):59－60.