梁少強(qiáng) 涂青松 黃 榮 蔣 軍 姜武忠 袁 君 曾曉紅 何 瀚 周菲菲

1.廣東省佛山市第一人民醫(yī)院腫瘤中心放療科，廣東佛山 528000；2.中南大學(xué)湘雅醫(yī)院放療科，湖南長沙 410008

惡性腫瘤細(xì)胞增殖迅速，使得細(xì)胞耗氧量不斷增加，同時(shí)腫瘤組織新生血管往往不足導(dǎo)致腫瘤組織缺氧。缺氧誘導(dǎo)因子-1（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）的轉(zhuǎn)錄因子在腫瘤適應(yīng)缺氧的機(jī)制中起著關(guān)鍵的調(diào)控作用[1]。筆者采用免疫組織化學(xué)法檢測宮頸癌組織中HIF-1α表達(dá)的水平，并進(jìn)行臨床追蹤隨訪，研究HIF-1α在宮頸癌轉(zhuǎn)移和預(yù)后中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集筆者所在科室2007年1月～2009年12月經(jīng)病理確診為宮頸癌患者的瘤體活檢組織標(biāo)本40例，均為鱗癌。年齡31～74歲，平均（51.2±2.9）歲；按1994年FIGO分期，Ⅰ期4例，Ⅱ期18例，Ⅲ期14例，Ⅳ期4例；病理分級，低分化7例，中分化27例，高分化6例。宮頸炎組織標(biāo)本10例，宮頸非典型增生組織標(biāo)本10例，兩者均來自同時(shí)期的活檢宮頸組織。

1.2 方法

試劑：兔抗人HIF-1α多克隆抗體（IgG）；抗原修復(fù)液Ⅰ及通用型SABC染色試劑盒和DAB顯色試劑盒均購自武漢博士德生物工程有限公司。采用常規(guī)免疫組織化學(xué)SABC法。切片常規(guī)脫蠟脫水，3%過氧化氫乙醇溶液阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，微波抗原修復(fù)，正常非免疫動(dòng)物血清，室溫下孵育10 min，滴加一抗HIF-1α，工作濃度均為1∶100，4℃冰箱中過夜，滴加生物素標(biāo)記的第二抗體，置入37℃恒溫箱中孵育30 min，加入鏈酶親和素-生物素-過氧化物酶溶液，室溫下孵育10 min，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹膠封片，設(shè)陰性對照（以PBS代替一抗）以及陽性對照（已知的乳腺癌陽性反應(yīng)組織）。

1.3 結(jié)果判斷

免疫組化染色的結(jié)果參考Krajewska等標(biāo)準(zhǔn)判斷，采用雙盲法在顯微鏡下進(jìn)行評分。先按陽性細(xì)胞比例將無、1%～25%、26%～50%、51%～75%及76%～100%依次計(jì)為0～4分；再按染色強(qiáng)度將無、弱、中、強(qiáng)分別計(jì)為0～3分，最后綜合兩部分得分。如某片有25%弱陽性（1×1）、50% 中 等 陽 性（2×2）及 25% 強(qiáng) 陽 性（1×3），則 總 分 為1+4+3=8。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包統(tǒng)計(jì)。計(jì)量資料采用（）表示，單因素進(jìn)行方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 宮頸癌組織HIF-1α的表達(dá)

HIF-1α陽性染色主要集中在腫瘤細(xì)胞胞漿，胞核也有少許染色。在宮頸癌組織、宮頸炎組織和宮頸非典型增生組織中均有一定程度的表達(dá)，分別為（8.60±1.77）、（7.20±1.32）、（5.10±1.20），方差分析顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。且宮頸癌組HIF-1α表達(dá)水平最高，宮頸炎組表達(dá)最低，組間兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 宮頸癌組織HIF-1α的表達(dá)與臨床的關(guān)系

HIF-1α分別與宮頸癌臨床分期、放療敏感性和骨、肺、肝等遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和5年生存期有關(guān)（P＜0.05）。見表1。

表1 HIF-1α在宮頸癌組織中的表達(dá)與臨床的關(guān)系

3 討論

缺氧誘導(dǎo)因子-1是缺氧條件下廣泛存在于哺乳動(dòng)物和人體內(nèi)的一種轉(zhuǎn)錄因子。研究發(fā)現(xiàn)，由于乏氧腫瘤細(xì)胞內(nèi)一系列基因表達(dá)的改變可引起細(xì)胞凋亡抑制、細(xì)胞周期停滯、侵襲能力增強(qiáng)、對放化療不敏感等，而HIF-1α在其中起著中樞調(diào)節(jié)作用[2]，所以目前以HIF-1α為靶點(diǎn)的治療已成為新的研究熱點(diǎn)。

本研究結(jié)果顯示，HIF-1α在三組中均有一定程度的表達(dá)，但宮頸癌組織中HIF-1α的表達(dá)明顯高于宮頸炎組織及非典型增生宮頸組織（P＜0.05），說明：（1）HIF-1α 參與了宮頸癌的惡性轉(zhuǎn)化過程；（2）HIF-1α作為宮頸非典型增生發(fā)展成癌的一個(gè)標(biāo)志或信號，可用于篩查和評估高危人群，對預(yù)防和治療宮頸癌具有一定的臨床意義[3-4]。

本研究同時(shí)顯示，HIF-1α分別與宮頸癌臨床分期、放療敏感性和骨、肺、肝等遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和五年生存期有關(guān)（P＜0.05），提示HIF-1α的過表達(dá)與腫瘤的浸潤發(fā)展及轉(zhuǎn)移播散有關(guān)，與文獻(xiàn)報(bào)道相一致[5-6]。

HIF-1α可能通過抑制細(xì)胞凋亡及調(diào)控DNA修復(fù)過程的因子表達(dá)，使電離輻射對腫瘤細(xì)胞DNA的損傷無法固定；同時(shí)HIF-1α促進(jìn)血管生成、無氧代謝，使逃離電離輻射物理殺傷的腫瘤細(xì)胞獲得必要的生存條件，最終降低放療敏感性[7-8]。

HIF-1α的過表達(dá)與宮頸癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，即HIF-1α的表達(dá)促進(jìn)腫瘤新生血管生成及抑制細(xì)胞凋亡，使腫瘤細(xì)胞的生存能力增強(qiáng)，從而導(dǎo)致腫瘤易于發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，使患者5年生存期縮短，提示HIF-1α對于判斷宮頸癌的預(yù)后有一定價(jià)值，可作為預(yù)后不良的生物指標(biāo)之一[9-10]。

[1]Shimada T，Kojima K，Yoshiura K，et al.Characteristics of the peroxisome proliferators activated receptor gamma（PPAR gamma）ligand induced apoptosis colon cancer cells[J].Gut，2002，50（50）：658-664.

[2]Hamm JK，Park BH，F(xiàn)armer SR.A role for C/EBP beta in regulating peroxisome proliferators-activated receptor-gamma activity during adipogenesis in 3T3-L1 preadipocytes[J].Biol Chem，2001，276（21）：18464-18471.

[3]Kato M，Kusumi T，Tsuchida S，et al.Induction of differentiation and proliferators-activated receptor γ expression in colon cancer cell lines by troglitazone[J].Cancer Res Clin Oncol，2004，130（2）：73-79.

[4]Ravi R，Mookerjee B，Bhujwall Zm，et al.Regulation of tumor，orangiogensis by P53-induced degradation of hypoxia-inducible factor 1 alpha[J].Genes Dev，2000，14（1）：34-44.

[5]Leung SK，Ohh M.Playing tag with HIF：the VHL story[J].Biomed Biotechnol，2002，2（3）：131-135.

[6]Na X，Wu G.Overproduction of vascular endothelial growth factor related to von Hippel-Lindau tumor suppressor gene mutations and hypoxia-inducible factor-1 alpha expression in renal cell carcinomas[J].Urol，2003，170（2）：588-592.

[7]王麗華，李勝澤.HIF-1α和VEGF在宮頸癌中的表達(dá)及相關(guān)性研究[J].解剖與臨床，2008，13（3）：181-183，186.

[8]王立巖，許曉艷，盛敏佳，等.HIF-1α及VEGF在宮頸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2009，13（12）：1749-1750.

[9]吳春鳳，張丹丹，何志娟.HIF-1α在宮頸癌和宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達(dá)及意義[J].哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，43（5）：464-468.

[10]孔德璇，瞿全新，糜若然，等.HIF-1α，COX-2在宮頸癌中的表達(dá)及意義[J].山東醫(yī)藥，2009，49（44）：53-54.