李篤軍，蘇維奇，朱元祺

（1.煙臺經(jīng)濟技術開發(fā)區(qū)醫(yī)院 檢驗科，山東 煙臺 264006；2.青島市市立醫(yī)院；3.青島大學醫(yī)學院 附屬醫(yī)院）

膠東地區(qū)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌耐藥性的研究

李篤軍1，蘇維奇2，朱元祺3

（1.煙臺經(jīng)濟技術開發(fā)區(qū)醫(yī)院 檢驗科，山東 煙臺 264006；2.青島市市立醫(yī)院；3.青島大學醫(yī)學院 附屬醫(yī)院）

目的 了解膠東地區(qū)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的耐藥情況。方法采用VITEK2compact微生物分析儀進行細菌鑒定和藥物敏感試驗；頭孢西丁Kirby-Bauer法和青霉素結合蛋白2a膠乳凝集（PBP2a）試驗對分離出的金黃色葡萄球菌進行MRSA確認；酸測定法和D試驗測定MRSA產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶和紅霉素誘導克林霉素耐藥實驗。結果頭孢西丁紙片擴散法與PBP2a膠乳凝集法對MRSA檢出率無統(tǒng)計學上差別（P＞O.05）；331株MRSA產(chǎn)β內(nèi)酰胺酶率和克林霉素誘導試驗陽性率分別為91.14%和16.62%；全部菌株對萬古霉素、替加環(huán)素和利奈唑胺敏感，但對紅霉素、克林霉素耐藥率高達82.19%和77.34%。結論MRSA耐藥機制復雜，呈現(xiàn)多重耐藥，應根據(jù)藥敏結果選用抗生素。

甲氧西林；金黃色葡萄球茵；頭孢西?。沪?內(nèi)酰胺酶

（ChinJLabDiagn，2012，16：0290）

近年來，由金黃色葡萄球菌所致醫(yī)院感染的發(fā)病率呈上升趨勢，其耐藥性也逐年增加，尤其耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin-resistant staphylococcus aureus，MRSA）已經(jīng)成為醫(yī)院感染的主要致病菌［1，2］，并且對大多數(shù)抗菌素耐藥，給臨床治療帶來極大困難。因此，我們對本地區(qū)金黃色葡萄球菌臨床分離株進一步進行β-內(nèi)酰胺酶和D試驗，以了解其耐藥特點，為合理應用抗生素和控制MRSA的傳播奠定理論基礎。

1 材料和方法

1.1 材料實驗菌株：收集經(jīng)血平板分離純培養(yǎng)物，結合菌落形態(tài)，色素、溶血特性，血漿凝固酶（＋）和經(jīng)VITEK2compact自動微生物分析儀確定為金黃色葡萄球菌且對甲氧西林耐藥，共331株（其中煙臺經(jīng)濟技術開發(fā)區(qū)醫(yī)院56株，青島大學醫(yī)學院附屬醫(yī)院180株，青島市市立醫(yī)院95株）。金黃色葡萄球菌敏感株 ATCC29213（MIC），ATCC25923（K-B）和耐藥株ATCC43300由青島大學醫(yī)學院微生物教研室饋贈。

實驗器材：VITEK2compact微生物分析儀和細菌鑒定及藥物敏感試驗卡（GP／AST-GP），DENSIMAT濁度儀均為生物梅里埃公司產(chǎn)品；頭孢西?。‵OX，30μg）、克林霉素（DA，2μg）、紅霉素（ERY，15μg）藥敏紙片及PBP2a膠乳凝集試劑盒均為0XOID公司生產(chǎn)；酚紅、枸椽酸鈉、pH試紙等由本室保存。

1.2 方法PBP2a膠乳凝集試驗嚴格按照試劑盒說明書操作，以PBP2a膠乳凝集試驗作為檢測標準，以 ATCC 43300為陽性對照，ATCC29213（MIC）和ATCC25923（K-B）為陰性對照。β-內(nèi)酰胺酶測定采用酸測定法，按有關文獻方法操作。紅霉素誘導克林霉素耐藥的D實驗和頭孢西丁紙片擴散藥敏試驗（K-B）操作方法以及判定標準按文獻說明進行，同時用ATCC25923做質(zhì)量控制。統(tǒng)計比較用配對χ2檢驗。

2 結果

2.1 頭孢西丁紙片擴散法與PBP2a膠乳凝集檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的比較三家醫(yī)院分離的經(jīng)VITEK2compact自動微生物分析儀鑒定為金黃色葡萄球菌且對甲氧西林耐藥共331株。經(jīng)PBP2a膠乳凝集實驗確證為MRSA共331株，頭孢西丁紙片擴散法則為328株。兩法對MRSA檢出率統(tǒng)計學上無顯著性差異（P＞0.05），詳見表1。

表1 頭孢西丁紙片擴散與PBP2a膠乳凝集檢測MRSA（n＝331）

2.2 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌對臨床常用抗生素耐藥結果

分離的331株耐甲氧西林金黃色葡萄球菌除了對萬古霉素、利奈唑胺和替加環(huán)素全部敏感外，對喹諾酮類、大環(huán)內(nèi)酯類和氨基糖苷藥物呈現(xiàn)較高的耐藥率，達50%以上，其中紅霉素和克林霉素耐藥率已經(jīng)超過75%。詳見表2。

表2 MRSA對臨床常用抗生素耐藥結果（n＝331）

2.3 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶及D試驗結果

實驗顯示331株 MRSA產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶率達91.14%，表明MRSA對β內(nèi)酰胺抗生素耐藥并非產(chǎn)β內(nèi)酰胺酶單一作用所致，而是多種機制共同作用結果。D試驗是檢測克林霉素誘導型耐藥簡便易行的方法，本試驗的陽性率為16.62%，見表3。

表3 MRSA產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶及D試驗結果

3 討論

隨著廣譜抗菌藥物的大量應用，金黃色葡萄球菌的感染及耐藥菌株日益增多，已成為醫(yī)院感染的重要病原菌之一。研究表明，MRSA的耐藥分別是由質(zhì)粒介導的獲得性耐藥和由耐藥基因介導的固有耐藥［3，4］。β-內(nèi)酰胺類抗生素通過與細菌的青霉素結合蛋白（PBPs）結合，抑制細菌細胞壁的合成而發(fā)揮抗菌作用。MRSA能產(chǎn)生一種特殊的PBP，即PBP2a，表現(xiàn)對大多數(shù)β-內(nèi)酰胺類抗生素親和力低，且可替代高親和力的正常PBPs催化肽聚糖交聯(lián)，使細菌表現(xiàn)耐藥。PBP2a由mecA基因編碼，只存在于耐藥菌株中。從理論上講，菌株存在mecA將對全部的青霉素、頭孢菌素、碳青酶烯類及內(nèi)酰胺類抗生素／酶抑制劑產(chǎn)生耐藥性［5］。本實驗331株MRSA產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶率達91.14%，表明它對β-內(nèi)酰胺抗生素耐藥并非產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶單一因素作用所致，而是存在多種機制的共同作用。

D試驗是檢測克林霉素誘導型耐藥簡便易行的方法。紅霉素、克林霉素均耐藥，菌株可能攜帶erm結構型基因；紅霉素耐藥，克林霉素敏感，D試驗陽性，此菌株可能攜帶的erm誘導型基因；D試驗陰性，菌株可能攜帶mrsA基因。本文實驗誘導耐藥率為16.62%，表明本地區(qū)菌株中存在erm誘導型基因。因此，如儀器藥敏卡不帶有克林霉素誘導實驗，應補加D試驗用于金葡常規(guī)藥敏檢測，并在報告中注明：“通過可誘導性克林霉素耐藥試驗，推測此菌株對克林霉素耐藥，克林霉素可能對某些患者仍然有效”。

氟喹諾酮類藥物對細菌作用的靶位酶是DNA旋轉(zhuǎn)酶和拓撲異構酶Ⅳ。對于金葡菌，氟喹諾酮類藥物主要靶位酶為DNA拓撲異構酶Ⅳ，該酶通過作用于DNA磷酸二酯鍵酪氨酸殘基，打斷DNA兩條鏈，殺滅細菌。本實驗331株MRSA對環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星耐藥率為61.93%，39.27%和26.58%，如中敏也算為耐藥，則均超過了40%的耐藥率，提示對感染者應慎重經(jīng)驗用藥。

分離的331株MRSA除了對萬古霉素、利奈唑胺和替加環(huán)素全部敏感外，對大環(huán)內(nèi)酯類和氨基糖苷藥物也呈現(xiàn)較高的耐藥率，達50%以上，其中紅霉素和克林霉素耐藥率已經(jīng)超過75%。按照衛(wèi)生部辦公廳2009年關于抗菌藥物臨床應用管理的通知中的規(guī)定：對主要目標菌耐藥率超過50%的藥物，應參照藥敏實驗結果選用；對主要目標菌耐藥率超過75%的藥物，應暫停該類抗菌藥物的臨床應用。

總之，本地區(qū)MRSA耐藥機制復雜，呈現(xiàn)多重耐藥特點，提示臨床醫(yī)生應根據(jù)藥敏結果選用抗生素，以減少抗生素選擇性壓力。

［1］蘇維奇，朱元祺，孔繁榮.青島地區(qū)耐亞胺培南銅綠假單胞菌金屬β-內(nèi)酰胺酶檢測及耐藥性分析［J］.中華醫(yī)院感染學雜志，2009，19（2）：205.

［2］趙金英，路 娟，羅文濤，等.2007-2009年神經(jīng)外科耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌耐藥性分析［J］.中國實驗診斷學，2011，15（2）：298.

［3］張連芝，王 欣，周 密，等.醫(yī)院耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染現(xiàn)狀的分析［J］.中國實驗診斷學，2011，14（6）：892.

［4］SW Olarte NM，Valderrama IA，Reyes KR，et al.Methicillin-resistant Staphylococcus aureus colonization in a Colombian hospital intensive care unit：phenotypic and molecular characterization［J］.Biomedica，2010，30（3）：353.

［5］Yamada K，Yanagihara K，Hara Y，et al.Clinical features of bacteremia caused by methicillin-resistant Staphylococcus aureus in a tertiary hospital［J］.Tohoku J Exp Med，2011，224（1）：61.

Study on multi-drug resistance of clinical methicillin-resistant staphylococcus aureusin isolates in Jiaodong distrcit

LIDujun，SUWei-qi，ZHUYuan-qi.（Dep.ofClinicalLaboratory，theHospitalofEconomicTechnologicalDevelopment AreaofYantai，Yantai264006，China）

ObjectiveTo study the situation of methicillin-resistant staphylococcus aureus（MRSA）resistant to multi-antibiotics in the local area，Methods The identification and drug susceptibility test were performed by VITEK2 compact automatic microbial analysis system.The MRSA were verified by cafoxitin disk diffusion and penicillin binding protein 2alatex agglutination.The erythromycin inducible clindamycin resistanc was tested by D-test.ResultsThere are no significance（P＞0.05）between cafoxitin disk diffusion and penicillin binding protein 2alatex agglutination for verified MRSA.β-lactamase producing rate and the ratio of erythromycin inducible clindamycin resistance were 91.14%，16.62%，respectively.All S.aureus isolates were susceptible to vancomycin，tigecycline and linezolid，but the majority were resistant to erythromycin（82.19%）clindamycin（77.34%）.ConclusionMRSA isolates were resistant to multiple antibiotics.And there is an urgent needs on antibiotics be adopted according to antimicrobial susceptibility tests.

methicillin；staphylococcus aureus；cefoxitin；β-lactamase

R378.5＋1

A

1007－4287（2012）02－0290－03

山東省科技發(fā)展計劃項目（2009GG10002057）

李篤軍，男，副主任檢驗師，科主任，主要研究方向為醫(yī)院感染病原菌耐藥機制。

2011－01－19）