郭 焱，崔健麗，朱 娜

（1.長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長春 130117；2.吉林大學(xué)第四醫(yī)院）

猴頭菇多糖對(duì)TGF-β1抑制的T淋巴細(xì)胞增殖的影響

郭 焱1，崔健麗2＊，朱 娜1

（1.長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長春 130117；2.吉林大學(xué)第四醫(yī)院）

＊通訊作者

猴頭菇多糖對(duì)免疫系統(tǒng)的藥理作用已有報(bào)道［1－4］，但多是有關(guān)動(dòng)物免疫功能的研究，而對(duì)人類免疫功能影響的報(bào)道尚不多見。本實(shí)驗(yàn)從細(xì)胞水平研究猴頭菇多糖對(duì)TGF－β1抑制的T淋巴細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)作用，為臨床輔助治療腫瘤提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料猴頭菇多糖、TGF-β1、淋巴細(xì)胞分離液、PHA、MTT等試劑均購自百賽生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 人外周血T淋巴細(xì)胞的分離 取正常人靜脈抗凝血10ml，淋巴細(xì)胞分離液分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）。PBMC經(jīng)PBS洗滌3次后，加RPMI 1640完全培養(yǎng)液，于無菌培養(yǎng)皿黏附貼壁培養(yǎng)6 h，收集非貼壁細(xì)胞，即為淋巴細(xì)胞，用含100ml／L胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞密度為5×108／L，備用。

1.2.2 MTT法檢測猴頭菇多糖對(duì)TGF－β1抑制下T淋巴細(xì)胞增殖的作用 設(shè)對(duì)照組、TGF-β1組、猴頭菇多糖組。取密度為5×108／L的備用細(xì)胞，接種于96孔培養(yǎng)板，每孔100μl（含細(xì)胞數(shù)為5×104）。然后，對(duì)照組加100μl含100ml／L胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，TGF-β1組加入100μl含 TGF－β1的培養(yǎng)液，猴頭菇多糖組加入100μl含TGF-β1和含猴頭菇多糖的培養(yǎng)液，每組均設(shè)3個(gè)復(fù)孔，定容為200 μl，置CO2培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)24h、48h、72h，之后各組加PHA（終濃度5mg／L）繼續(xù)孵育42h。于實(shí)驗(yàn)終止前每孔加入5g／L MTT10μl，繼續(xù)培養(yǎng)6h，棄上清液，每孔加入100μl DMSO，充分震蕩后，37℃孵育1h，用酶標(biāo)儀于570nm波長測定A值。

細(xì)胞增殖率＝ （實(shí)驗(yàn)組平均A值／對(duì)照組平均A值）×100%。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS軟件進(jìn)行方差分析兩兩比較，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

經(jīng)TGF－β1作用不同時(shí)間后，T淋巴細(xì)胞的增殖受到抑制，猴頭菇多糖與TGF－β1共同作用后，T淋巴細(xì)胞的增殖率有了不同程度的回升（P＜0.01），但仍低于正常（圖1）。

圖1 猴頭菇多糖對(duì)TGF-β1抑制的T細(xì)胞增殖的影響

3 討論

多糖類成分抑制腫瘤生長已越來越受到人們重視。多糖作為藥物其細(xì)胞毒性小，在腫瘤治療時(shí)，它不像一般化學(xué)藥物直接殺傷腫瘤細(xì)胞，而是作為一種生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，促進(jìn)細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)，達(dá)到抑制和消滅腫瘤細(xì)胞的效果。所以尋找高效生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑是當(dāng)今腫瘤免疫治療的主要方向之一［4］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，猴頭菇多糖可使TGF-β1抑制的人T淋巴細(xì)胞功能有所恢復(fù)，增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫。

TGF-β1是介導(dǎo)腫瘤免疫逃逸最有效的免疫抑制分子，可明顯抑制T淋巴細(xì)胞增殖。T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫在抗腫瘤方面中起到很重要的作用，腫瘤細(xì)胞分泌的TGF－β1對(duì)T淋巴細(xì)胞的抑制成為腫瘤免疫逃逸的機(jī)制之一，如果能夠打破腫瘤對(duì)T淋巴細(xì)胞的這方面的抑制，就可以重新恢復(fù)機(jī)體一定的T淋巴細(xì)胞免疫功能，增強(qiáng)對(duì)腫瘤的殺傷作用［5，6］。

本研究結(jié)果可為猴頭菇多糖臨床輔助治療腫瘤的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

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1007－4287（2012）01－0048－02

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