宋 艷，劉 勇，江遠(yuǎn)英

（1.93756部隊(duì)醫(yī)院，天津 300000；2.第二軍醫(yī)大學(xué)，上海 200433）

黃酮化合物NDH01的調(diào)脂作用及其亞急性毒性實(shí)驗(yàn)研究

宋 艷1，劉 勇1，江遠(yuǎn)英2＊

（1.93756部隊(duì)醫(yī)院，天津 300000；2.第二軍醫(yī)大學(xué)，上海 200433）

目的 研究NDH01藥物對高脂血癥大鼠的調(diào)脂作用及肝腎功能的影響。方法將46只大鼠隨機(jī)分為空白組，空白NDH01組，空白陽性藥組，高脂模型組，高脂NDH01組，高脂陽性藥組。采用高脂乳劑灌胃的方法建立高脂血癥大鼠模型。給藥2，4，8周后，測定血清脂類含量。給藥4，8周后，測血清肝腎功能指標(biāo)。結(jié)果（1）高脂NDH01組能顯著延緩高血脂大鼠模型TC、LDL-c的上升趨勢，其作用結(jié)果與高脂陽性藥組未有顯著差異。（2）空白NDH01組直接膽紅素顯著低于空白組，總膽紅素略低于空白組，但無顯著性差異。高脂NDH01組總膽紅素及直接膽紅素均顯著降低。（3）空白NDH01組總蛋白及白蛋白均顯著高于空白組。與高脂模型組相比，高脂NDH01組、高脂陽性藥組的總蛋白、白蛋白及球蛋白均顯著降低。（4）與高脂模型組相比，高脂NDH01組、高脂陽性藥組肝功能指標(biāo)有顯著差異。（5）高脂NDH01組、高脂陽性藥組的尿素、肌酐均顯著高于空白組。高脂NDH01組與高脂陽性藥組之間無顯著性差異。結(jié)論NDH01能夠降低高膽固醇血癥大鼠TC、LDL-c，其效應(yīng)總體上呈現(xiàn)劑量和時(shí)問依賴性特征。NDH01能夠降低肝臟TG含量。NDH01不良反應(yīng)小、毒性低，大鼠未產(chǎn)生明顯亞急性毒性作用。

黃酮化合物；高膽固醇血癥；低密度脂蛋白受體；亞急性毒性

（ChinJLabDiagn，2012，16：0044）

動脈粥樣硬化（AS）是冠心病（CHD）等心腦血管疾病的重要環(huán)節(jié)，高脂血癥尤其是高膽固醇血癥（HC）是導(dǎo)致AS發(fā)生的獨(dú)立因素。因此，防治高脂血癥和AS是防治心腦血管疾病的重要環(huán)節(jié)［1］。如果粥樣硬化只涉及到大動脈，對身體影響不大。最為嚴(yán)重的是腦動脈及冠狀動脈，特別在它們的入口或分叉處發(fā)生粥樣硬化，就會出現(xiàn)血流供應(yīng)不足，產(chǎn)生心絞痛、心肌缺血、腦供血不足或腦栓塞等癥［2］。20世紀(jì)80年代，血脂異常防治干預(yù)靶點(diǎn)定位為TC［3］。黃酮類化合物是一類多酚類物質(zhì)，廣泛存在于高等植物及以植物為原料的食品中，是眾多中草藥如黃芪、銀杏、沙棘等的活性成分。大量的研究資料證明植物黃酮具有降脂，抗氧化，進(jìn)而抗AS的作用［4－6］。本觀察灌喂 NDH01后，對高血脂癥大鼠肝腎功能的影響，從而初步估計(jì)藥物的最大無作用劑量和中毒閾劑量，了解有無蓄積作用，確定作用的靶器官，并為設(shè)計(jì)慢性毒性試驗(yàn)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 受試藥物與試驗(yàn)動物藥物名稱：NDH01；給藥劑量：500mg／kg.d；種屬：Wistar大鼠；性別：雄性；年齡：6－8周；體重：160－180克；數(shù)量：46只；飼養(yǎng)：第二軍醫(yī)大學(xué)動物房，合格證號：醫(yī)動字第02-64號。

1.2 試驗(yàn)方法試驗(yàn)參照1993年中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局審定的新藥臨床前研究指導(dǎo)原則等相關(guān)資料進(jìn)行。根據(jù)NDH01在臨床應(yīng)用的給藥途徑為口服，試驗(yàn)選擇對大鼠進(jìn)行灌胃給藥，給藥8周后觀察NDH01對大鼠脂代謝的調(diào)節(jié)及對肝腎功能的影響作用。購160－180g雄性 Wistar大鼠46只，適應(yīng)性喂養(yǎng)5－7d，禁食不禁水，取血清測量給藥前各項(xiàng)血脂水平（膽固醇，甘油三酯，低密度脂蛋白和高密度脂蛋白），根據(jù)血脂水平分組，分成空白組6只，空白NDH01組，空白陽性藥組，高脂模型組，高脂NDH01組，高脂陽性藥組各8只。除空白組外大鼠每天上午灌胃高脂乳劑1ml／100g，下午空白組及高脂模型組給予相同體積的0.5%CMC（羧甲基纖維素鈉）空白對照溶液，空白NDH01組、高脂NDH01組按500mg／kg灌胃NDH01，空白陽性藥組和高脂陽性藥組按20mg／kg灌胃阿托伐他汀，1次／d。于第2，4，8w給藥后禁食不禁水，取血清測量給藥后各項(xiàng)血脂水平，以觀察NDH01對大鼠脂代謝紊亂的預(yù)防作用，于第4，8w給藥后，取血，離心，取血清測總膽紅素（TB）、直接膽紅素、總膽汁酸、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、堿性磷酸酶、γ－谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、白蛋白、球蛋白、白蛋白與球蛋白比值觀察NDH01對大鼠肝腎功能的影響。第8w處死大鼠，取大鼠肝臟腎臟HE染色做病理切片，觀察結(jié)果。大鼠體重每周稱量一次，所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用（±s）表示，組間差異用方差分析法檢驗(yàn)（SPSS統(tǒng)計(jì)軟件）。

2 結(jié)果

2.1 大鼠一般情況觀察實(shí)驗(yàn)期間，正常組大鼠毛色光澤、活動自如、活潑、飲食正常；模型組大鼠出現(xiàn)精神萎靡、反應(yīng)遲鈍少動、毛發(fā)光澤度差、進(jìn)食量減少；給藥組有不同程度的改善。實(shí)驗(yàn)過程中各組動物均無死亡。

2.2 藥物對高脂血癥大鼠血脂代謝的影響從表1結(jié)果可以看出，高脂NDH01組能顯著延緩高血脂大鼠模型TC、LDL-c的上升趨勢，其作用結(jié)果與高脂陽性藥組未有顯著差異。

表1 藥物對大鼠血脂的影響（mmol／L）

2.3 藥物對高脂血癥大鼠肝功能的影響從表2結(jié)果中可以看出，空白NDH01組直接膽紅素顯著低于空白組，總膽紅素略低于空白組，但無顯著性差異。與高脂模型組相比，高脂NDH01組總膽紅素及直接膽紅素均顯著降低。從表3結(jié)果中可以看出，空白NDH01組總蛋白及白蛋白均顯著高于空白組。高脂模型組總蛋白、白蛋白及A／G值均顯著高于空白組。與高脂模型組相比，高脂NDH01組、高脂陽性藥組的總蛋白、白蛋白及球蛋白均顯著降低。從表4結(jié)果中可以看到，高脂模型組與空白組相比，ALT、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶及堿性磷酸酶均顯著升高。與高脂模型組相比，高脂NDH01組、高脂陽性藥組ALT、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶有顯著差異。

表2 藥物對大鼠肝功能的影響（μmol／L）

表3 藥物對大鼠血清蛋白的影響

表4 藥物對大鼠肝功能的損害（U／L）

2.4 藥物對高脂血癥大鼠腎功能的影響從表5結(jié)果中可以看到，空白NDH01組尿素要顯著低于空白組，而尿酸要顯著高于空白組，空白陽性藥組尿酸要顯著高于空白組?？瞻譔DH01組、高脂模型組、高脂NDH01組、高脂陽性藥組的尿素顯著高于空白組。高脂NDH01組、高脂陽性藥組的肌酐顯著高于空白組。高脂NDH01組與高脂陽性藥組之間無顯著性差異。

表5 藥物對大鼠腎功能的影響

2.5 藥物對高脂血癥大鼠血糖的影響從表6中可以看出，與空白組相比，空白陽性藥組血糖顯著升高，而高脂模型組血糖顯著降低。與高脂模型組相比，高脂陽性藥組的血糖有顯著性的升高。

表6 藥物對大鼠血糖的影響

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用大鼠作為模型動物，有經(jīng)濟(jì)、飼養(yǎng)及管理方便、抵抗力較強(qiáng)、食性與人相近等優(yōu)點(diǎn)。此模型是經(jīng)消化道給予高脂飲食，形成時(shí)間也相對較長，與人類因膳食結(jié)構(gòu)改變而形成的高脂血癥相似。為保證模型的成功建立，乳劑中添加了膽酸鈉，能顯著增加大鼠小腸對膽固醇的吸收。同時(shí)，乳劑中添加丙基硫氧嘧啶，其作用是抑制甲狀腺功能，減少對膽固醇的代謝，保證了血清膽固醇含量的升高。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)過一周高脂乳劑灌胃造模后，模型組TC、LDL-c含量顯著升高；到造模的第三周，TC、LDL-C持續(xù)升高，HDL-C下降。由于本實(shí)驗(yàn)所采用造模材料的作用均為增加血中膽固醇含量，故造模大鼠血清TG含量未見明顯升高，所復(fù)制的模型為典型的實(shí)驗(yàn)性高膽固醇血癥大鼠模型。由于長時(shí)間給予高脂乳劑灌胃，導(dǎo)致參與造模的大鼠對正常飼料的食量下降，因此模型組和給藥組大鼠的體重普遍低于正常組。

AS的病因及發(fā)病機(jī)制雖未完全闡明，高脂血癥特別是高膽固醇血癥作為AS的重要危險(xiǎn)因素已得到醫(yī)學(xué)公認(rèn)。在血管內(nèi)皮受損的情況下，脂質(zhì)可滲入到內(nèi)皮下間質(zhì)，促進(jìn)泡沫細(xì)胞形成和細(xì)胞壞死，細(xì)胞黏附因子表達(dá)增加，促進(jìn)平滑肌細(xì)胞遷移和增殖［8］。因此，調(diào)節(jié)血脂對抗AS有著重要的意義。高脂血癥是指血中的TG或TC水平升高，實(shí)際上是血中一類或幾類脂蛋白水平升高的表現(xiàn)。血清TG、TC、LDL、HDL是血脂測定的四項(xiàng)基本指標(biāo)，其中LDL和HDL含量通常以其各自的膽固醇含量來表示，即LDL-c、HDL-c。TC包括膽固醇和膽固醇酯，其中的膽固醇以脂蛋白形式存在的，約有60%－70%存在于LDL中。TC水平增高不僅可通過LDL-c的對流運(yùn)輸穿過內(nèi)皮細(xì)胞基底膜沉積于內(nèi)膜下組織形成膽固醇結(jié)晶而難以被清除，而且嚴(yán)重?fù)p害內(nèi)皮依賴的舒張血管反應(yīng)，誘發(fā)血小板聚積以及活性物質(zhì)的釋放，并損傷內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能，使脂質(zhì)和單核細(xì)胞易于通過血管內(nèi)膜下組織，形成泡沫細(xì)胞，泡沫細(xì)胞又釋放單核細(xì)胞趨化蛋白，吸引其他單核細(xì)胞源源不斷地遷入內(nèi)膜下，在AS發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。動脈粥樣斑塊的主要成分是膽固醇和膽固醇脂，雖然動脈壁也能合成膽固醇和其他脂質(zhì)，但是粥樣斑塊中的脂質(zhì)主要來于血液中［9］。膽固醇能激活補(bǔ)體系統(tǒng)，所產(chǎn)生補(bǔ)體激活物可以引起膽固醇在動脈壁沉積［10］，促進(jìn)動脈粥樣斑塊的形成。

流行病學(xué)調(diào)查及動物實(shí)驗(yàn)表明，TC、LDL-c的升高具有促進(jìn)AS發(fā)生的作用，其中尤為重要的是以LDL-c增高為主的II型高脂血癥。LDL作為膽固醇的主要載體，往往伴隨著血中膽固醇的升高。HDL被認(rèn)為是一種保護(hù)性的脂蛋白，其濃度增加與CHD和腦梗塞等多種心腦血管病發(fā)生具有顯著的負(fù)相關(guān)［11］。

目前實(shí)驗(yàn)室對HDL測定通常是用檢測HDL－c來表示的，反映HDL運(yùn)載脂質(zhì)的代謝狀態(tài)。HDL主要的代謝功能是膽固醇“逆轉(zhuǎn)運(yùn)”：HDL將膽固醇從周圍組織細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟或者將膽固醇酯轉(zhuǎn)移給VLDL和LDL，由后兩者帶入肝臟分解代謝，從而將體內(nèi)過多的膽固醇排出體外，使血中膽固醇水平得到調(diào)節(jié)。HDL作為膽固醇的接受體，通過與受體相互作用介導(dǎo)膽固醇從動脈壁內(nèi)膜流出并轉(zhuǎn)運(yùn)到肝進(jìn)行代謝，因此能降低循環(huán)系統(tǒng)中的膽固醇水平，可以預(yù)防As的發(fā)生；此外，HDL還可抑制LDL的氧化，參與ox-LDL的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)，降低ox-LDL引起的損傷，通過抑制單核細(xì)胞黏附和遷移到血管內(nèi)膜、刺激內(nèi)皮細(xì)胞修復(fù)和增殖、抑制生長因子誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞的增生等機(jī)制預(yù)防As的發(fā)生；HDL可與AS形成的主要成份—LDL結(jié)合，不僅可以阻止LDL向血管壁沉積，還可以把已經(jīng)沉積在血管壁上的LDL從血管壁上“剝離”出來，攜帶到肝臟，肝臟把這類物質(zhì)合成為膽酸，排出體外［12，13］，因此被稱為“抗動脈硬化因子”、“血管的清道夫”。低HDL是致AS脂質(zhì)異常血癥的一個因素，可誘發(fā)心腦血管疾病的發(fā)生［14］。

本部分實(shí)驗(yàn)對NDH01調(diào)脂機(jī)制僅進(jìn)行了初步探討，有時(shí)要通過其他分子生物學(xué)方法和手段對其機(jī)制進(jìn)行深入研究，這對于探索脂代謝紊亂及動脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)理有著重要的意義。

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Study on Hypocholesterolemia and Subacutetoxicity Effect of Flavonoid NDH01

SONGYan，LIUYong，JIANGYuanying.（1.93756MilitaryHospital，Tianjin300000，China；2.SecondMilitaryMedicalUniversity，Shanghai200433，China）

ObjectiveTo study the lipid metabolism of the flavone compound NDH01on experimental hypercholesterolemia rats.And to detect the adverse effect and subacutetoxicity to its function of the liver and kidney.Methods46 Wistar rats were randomized into normal group，model group，atorvastatin group，and high dosage group （500mg／kg）NDH01.To establish the hyper-cholesterolemia rat model by intragastric administrating fat emulsion.Two，four，and eight weeks later，the concentrations of TC，TG，LDL-c，HDL-c in serum were detected by enzyme methods.The livers were harvested to obtain the TI and the levels of hepatic TC，TG were detected by enzyme methods after the last treatment.Results（1）Two and four weeks 1ater，compared with the model group，the levels of TC，LDL-c in high dosage group were decreased，while the levels of HDL-c were increased p＜0.05.The levels of serum TG in high dosage group were lower than the model group after four-week-treatment（P＜0.01）.（2）After the last treatment，compared with the normal group，the levels of hepatic TC，TG in the model group are higher（P＜0.05）.The hepatic TG in the high dosage group is lower than the model group（P＜0.05）.ConclusionThe possible mechanism might be that NDH01can increase the presence of LDLR in liver.The increased quantity and activity of LDLR induced the infected elimination of serum LDL.NDH01could decrease the hepatic TG and improved liver function.

Flavonoid；hypercholesterolemia；low density lipoprotein receptor；subacutetoxicity

R589.2

A

1007－4287（2012）01－0044－04

＊通訊作者

2011－04－09）