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        河南地區(qū)食管鱗癌與HPV16、18關(guān)系的研究

        2012-08-18 09:24:48劉新勝郭文濤趙國(guó)強(qiáng)
        中外醫(yī)療 2012年3期
        關(guān)鍵詞:檢測(cè)

        劉新勝 郭文濤 趙國(guó)強(qiáng)

        (1.鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 鄭州 450001; 2.漯河醫(yī)學(xué)高等??凭€學(xué)校 河南漯河 462002)

        人乳頭瘤病毒(HPV)目前已分離鑒定出118型。2003年的一項(xiàng)流行病學(xué)分類研究定義了15種高危型HPV(如HPV16、HPVl8)和12種低危型(如HPV6、HPV11)。大量研究已經(jīng)明確它是引起宮頸乳頭瘤樣病變、宮頸癌的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素。1982年Syrjanen[1]首次提出HPV感染與食管癌可能具有密切關(guān)系,之后多有報(bào)道,但因研究結(jié)果不盡一致,如崔金環(huán)等[2]在140例食管癌組織中未檢出任何基因型別的HPV,丁廣成等發(fā)現(xiàn)HPV16在食管鱗癌中有較高檢出率(84%);董忠生等在30例食管癌新鮮組織和對(duì)應(yīng)石蠟固定組織HPV檢出率為84%和53%,曹邦偉等使用Meta分析1982年至2009年關(guān)于HPV感染與食管癌關(guān)聯(lián)的病例對(duì)照研究發(fā)現(xiàn),HPV高危型別(16與18型)的感染與食管癌的發(fā)生依然顯示出明顯的易感關(guān)聯(lián)。河南地區(qū)為食管癌的高發(fā)區(qū),本研究應(yīng)用導(dǎo)流雜交技術(shù),對(duì)57例河南地區(qū)食管鱗癌組織及癌旁組織標(biāo)本進(jìn)行了高危型HPV檢測(cè),進(jìn)一步了解HPV感染與食管癌的關(guān)系。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        57例食管癌手術(shù)切除標(biāo)本取自漯河醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校第三附屬醫(yī)院、鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院、第二附屬醫(yī)院(2009年6月至2010年7月),其中男35例,女22例;年齡42~79歲,平均(58.41±7.63)歲。病理組織學(xué)證實(shí)57例食管癌均為鱗狀細(xì)胞癌,其中Ⅰ級(jí)15例,Ⅱ級(jí)20例,Ⅲ級(jí)22例;合并有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例,手術(shù)清掃的食管周圍淋巴結(jié)中發(fā)現(xiàn)癌轉(zhuǎn)移;無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例,食管周圍淋巴結(jié)中未發(fā)現(xiàn)癌轉(zhuǎn)移。浸潤(rùn)深度分2組,淺層組9例,腫瘤浸潤(rùn)深度在黏膜層、黏膜下層或淺肌層;深層組48例,腫瘤浸潤(rùn)深度在深肌層或纖維膜層。所有病例術(shù)前均無化療、放療及免疫治療史。所有標(biāo)本均在手術(shù)切除后2h內(nèi)收集。

        1.2 方法

        快速導(dǎo)流雜交法檢測(cè)HPV基因型試劑盒為中國(guó)凱普生物化學(xué)有限公司產(chǎn)品,采用快速導(dǎo)流雜交法檢測(cè)16、18兩種HPV基因型,將上述樣本按常規(guī)方法DNA提取,PCR擴(kuò)增,快速導(dǎo)流雜交,顯色后,對(duì)樣本進(jìn)行結(jié)果判斷,具體操作按照試劑盒說明書進(jìn)行。

        1.3 數(shù)據(jù)處理

        采用配對(duì)χ2檢驗(yàn)(chi-square test),檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05,數(shù)據(jù)處理采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。

        2 結(jié)果

        2.1 高危型HPV(HPV16、18)在食管磷癌組織中擴(kuò)增結(jié)果

        高危型HPV(HPV16、18)在食管鱗癌組織中的陽性率為56.14%(32/57)。男女患者高危型HPV陽性率為57.14%(20/35)和54.55%(12/22),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,χ2=0.04,P>0.05;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組感染率77.78%(21/27)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組36.67%(11/30),差異顯著,χ2=9.75,P<0.01(表1);總體上,HPV16陽性率(36.84%,21/57)明顯高于HPV18(19.30%,11/57),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,χ2=4.34,P<0.05;同樣,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,HPV16陽性率(55.56%,15/27)明顯高于HPV18(22.22%,6/27),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,χ2=6.31,P<0.05;相反,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,HPV16陽性率(20.00%,6/30)和HPV18陽性率(16.67%,5/30)之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,χ2=0.11,P>0.05;HPV在I、II、III級(jí)分化程度中的陽性率為60%(9/15)、50%(10/20)、59.09%(13/22),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,χ2=0.47,P>0.05(表2);同樣,HPV表達(dá)與患者年齡、性別及浸潤(rùn)程度均無相關(guān)性,P均>0.05。

        表1 HPV及16、18型感染率分布

        表2 食管鱗癌分化程度與HPV及16、18型的感染率

        2.1 高危型HPV(HPV16、18)在癌旁組織中擴(kuò)增結(jié)果

        57例癌旁組織中,高危型HPV的陽性率為24.56%(14/57)。男女患者高危型HPV陽性率為22.86%(8/35)和27.27%(6/22),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,χ2=0.14,P>0.05;HPV16和HPV18陽性率為57.14%(8/57)和54.55%(6/57),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,χ2=0.33,P>0.05;同樣,HPV表達(dá)與患者性別、年齡及浸潤(rùn)程度均無相關(guān)性,P均>0.05。

        2.2 高危型HPV(HPV16、18)在食管磷癌和癌旁組織中擴(kuò)增結(jié)果比較

        高危型HPV在食管鱗癌組織中的檢出率為56.14%(32/57),明顯高于癌旁組織檢出率24.56%(14/57),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,χ2=11.81,P<0.05。

        3 討論

        食管鱗癌組織HPV感染率在不同地區(qū)或者同一地區(qū)研究結(jié)果差別較大(0%~84%),綜合已有文獻(xiàn)分析導(dǎo)致上述結(jié)果的原因除取材方法以及取材地區(qū)、種族的差異外,研究方法不一也是一個(gè)重要影響因素。主要的HPV檢測(cè)方法有傳統(tǒng)雜交法、型特異PCR、通用引物PCR、實(shí)時(shí)熒光PCR、雜交捕獲法、導(dǎo)流雜交基因微陣列分型檢測(cè)等。這些方法存在著或操作繁瑣,或費(fèi)時(shí)耗力,或只能進(jìn)行分組鑒定而不能進(jìn)行基因分型等缺點(diǎn)。本研究采用導(dǎo)流雜交方法檢測(cè)HPV分型,具有其它檢測(cè)方法不具備的優(yōu)點(diǎn):(1)快速,即在PCR擴(kuò)增后產(chǎn)物只需30min就可得到雜交結(jié)果;(2)可分型,可一次性檢測(cè)21種HPV亞型感染,既可以顯示具體某種亞型HPV感染,也可以顯示混合型多重感染;(3)有質(zhì)控對(duì)照,可在同一張低密度基因芯片薄膜上同時(shí)完成擴(kuò)增對(duì)照和雜交對(duì)照,對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程實(shí)行全面質(zhì)量控制。因而本實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加真實(shí)可信,有現(xiàn)實(shí)意義。

        利用導(dǎo)流雜交方法對(duì)河南地區(qū)食管癌及癌旁組織樣本進(jìn)行HPV16、18檢測(cè),結(jié)果顯示食管鱗癌高危型HPV陽性率明顯高于癌旁組織(56.14%vs24.56%),提示高危型HPV16、18與該地區(qū)食管鱗癌的發(fā)生存在明顯關(guān)聯(lián)。與有文獻(xiàn)所報(bào)道的安陽地區(qū)34例HPV18陽性的食管鱗癌組織檢出24例HPV16陽性不同,本次研究的標(biāo)本中均未檢測(cè)出HPV16、18雙重感染。但由于本次研究存在樣本量較小,取材和檢測(cè)方法單一等不足,HPV16、18雙重感染與食管鱗癌的關(guān)系尚有待進(jìn)一步討論。

        研究表明HPV16、18感染與食管鱗癌組織分化程度、腫瘤浸潤(rùn)程度、患者性別及年齡無明顯相關(guān)性,提示HPV感染可能僅作為食管鱗癌發(fā)生的危險(xiǎn)因素。

        有文獻(xiàn)[3]報(bào)道HPV16表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性,與之不同,本次研究中(表1)HPV16、18在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組感染率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(77.78%vs36.67%),提示樣本中HPV16、18可能參與了食管鱗癌的進(jìn)化步驟和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的過程,HPV與癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移關(guān)系有待進(jìn)一步的研究。

        與Li et al和劉紅彥等報(bào)道相似,本研究發(fā)現(xiàn)河南地區(qū)食管鱗癌中HPV16總體表達(dá)率明顯高于HPV18(36.84%vs19.30%),同樣的情況也出現(xiàn)在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(55.56%vs22.22%),提示HPV16與食管鱗癌發(fā)生與發(fā)展的關(guān)聯(lián)程度高于HPV18。

        食管鱗癌的發(fā)生受到多重因素影響,如遺傳、飲食習(xí)慣、地理位置等,HPV作為環(huán)境中的生物致癌因素越來越受到人們的關(guān)注,本研究檢測(cè)了河南食管鱗癌及癌旁組織高危型HPV的感染情況,這為進(jìn)一步開展預(yù)防HPV感染,減低食管癌的發(fā)病率有著重要的意義,同時(shí)在治療過程中檢測(cè)HPV病毒的感染,進(jìn)行干預(yù)治療,對(duì)降低食管癌復(fù)發(fā)有著積極的臨床意義。

        [1]崔金環(huán),楊光,蘇錫康,等.宮頸癌和食管癌組織中人乳頭狀瘤病毒基因型的檢測(cè)[J].腫瘤學(xué)雜志,2009,15(3):182~184.

        [2]曹邦偉,于晶琳,荷歡.中國(guó)人群中HPV感染與食管癌發(fā)生關(guān)聯(lián)的Meta分析[J].首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2010,31(2):258~263.

        [3]許春雷,千新來,周小山,等.HPV16型-E6、E7在食管鱗癌組織與非癌組織中的表達(dá)[J].癌癥,2004,23(2):165~168.

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