陳學國，田學敏，鄒 倩，曹小勇，張百珂

(解放軍第153中心醫(yī)院眼科 河南 鄭州 450042)

人工晶狀體前膜是白內障摘除及后房型人工晶狀體植入術后一種嚴重的早期并發(fā)癥。目前治療的主要藥物是皮質類固醇。但它的副作用限制了其臨床應用。本研究觀察漢防己甲素對人工晶狀體前膜形成的影響。

1 材料和方法

1.1 一般資料 選擇日本大耳白兔36只，年齡4～6月;體重(2.76±0.43)kg。5號針頭自角膜緣穿刺進入前房，劃破晶狀體前囊約5 mm長，做成雙眼外傷性白內障模型。外傷性白內障3 d后，剪開結膜，角膜緣后做鞏膜板層切口，刺入前房，分離虹膜后粘連，截囊，水解晶狀體核，擴大切開，取出晶狀體核，抽凈皮質。植入后房型人工晶狀體于囊袋內或睫狀溝內。

1.2 實驗動物分組及處理 隨機分為3組，每組12只。漢防己甲素組、地塞米松組和空白對照組分別結膜下注射漢防己甲素注射液5 mg(0.5 ml)、地塞米松注射液2 mg(0.5 ml)和生理鹽水注射液 0.5 ml，每日1 次，共7 d。

1.3 實驗指標測定 術后第3、5、7天裂隙燈顯微鏡下房水閃光分級［1］。術后第 3、7、14、28 天，裂隙燈顯微鏡下檢查人工晶狀體前膜的形成情況并分級［2］。術后第1、3、7、14 天抽取0.2 ml房水。將所得房水注入血細胞計數(shù)板的計數(shù)池中1滴，計數(shù)房水細胞總數(shù)。余離心后吸取沉淀物制成厚膜涂片，行瑞氏姬姆薩聯(lián)合染色，鏡檢，計數(shù)并分類［3］。離心后上清液稀釋2倍約0.3 ml，其中 0.2 ml稀釋上清液加入丙二醛(MDA)測定試劑中，95℃水浴40 min，然后以4 000 r/min離心10 min，上清液用721型分光光度儀在532 nm處比色，得吸光值。通過樣品含量=(測定管吸光度－測定空白管吸收光度)/(標準吸光度－標準空白管吸光度)×2×10 nmol/ml，得出房水中MDA含量。其余稀釋上清液再稀釋10倍后取0.1 ml加入考馬斯亮蘭G250染色液中，混勻后在室溫中放置15 min，用721型分光光度儀在595 nm處比色測定吸光度，從標準曲線中查出相應的蛋白質含量。

1.4 人工晶狀體病理檢查 術后第7、28天，處死實驗兔，切取角膜并摘出人工晶狀體。角膜迅速用0.25%臺盼蘭染液和0.2%茜素紅染液聯(lián)合染色共3～4 min，用生理鹽水沖洗掉染料，鏡檢，計數(shù)內皮細胞密度。第7、28天每組各取出2枚人工晶狀體，立即放入2.5%中性戊二醛固定溶液中固定8 h，磷酸緩沖液漂洗，乙醇梯度脫水，CO2臨界點干燥，裝臺，樣品處理儀上濺射金膜及導電處理，上掃描電鏡觀察。

取出的其余人工晶狀體立即固定于Bouin液中，行HE染色，觀察人工晶狀體表現(xiàn)細胞及前膜形成情況。人工晶狀體表現(xiàn)分成4個象限，每個象限隨機計數(shù)兩個高倍視野，計數(shù)細胞總數(shù)并分類［4］。

1.5 統(tǒng)計學分析 采用SPSS13.0軟件包，前房水渾濁程度及人工晶狀體前膜形成程度用成組設計多樣本秩和檢驗和兩兩比較的秩和檢驗;房水細胞數(shù)、人工晶狀體表面細胞總數(shù)、角膜內皮細胞數(shù)、蛋白質和丙二醛含量用均數(shù)±標準差(±s)表示，選用方差分析和多樣本均數(shù)兩兩比較q檢驗。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 房水閃光分級 術后第3天漢防己甲素組與地塞米松組之間比較差別無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。術后第5、7天漢防己甲素組與對照組之間比較差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);地塞米松組與對照組之間比較差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);而漢防己甲素組與地塞米松組之間比較差別無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

2.2 人工晶狀體前膜 人工晶狀體前膜術后第1天不明顯，第3天開始出現(xiàn)至28天顯著。第3、7、14、28天漢防己甲素組、地塞米松組與對照組之間比較差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。漢防己甲素組人工晶狀體前膜輕于地塞米松組，但兩兩比較結果顯示兩組間比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

2.3 房水細胞計數(shù)及分類 漢防己甲素組、地塞米松組房水細胞總數(shù)明顯低于對照組(P＜0.01);漢防己甲素組與地塞米松組相似(P＞0.05)。第1天以中性粒細胞為主，第3天后變?yōu)橐跃奘杉毎麨橹鳌?/p>

2.4 房水蛋白質含量和房水丙二醛含量 漢防己甲素組與地塞米松組房水蛋白質含量明顯低于對照組(P＜0.01);漢防己甲素組與地塞米松組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。漢防己甲素組、地塞米松組房水丙二醛含量明顯低于對照組(P＜0.01);漢防己甲素組與地塞米松組相比無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

2.5 人工晶狀體表面細胞、角膜內皮細胞密度分析結果及人工晶狀體表面光鏡及電鏡檢查結果 人工晶狀體表面主要由巨噬細胞和成纖維細胞組成。漢防己甲素組、地塞米松組人工晶狀體表面巨噬細胞、成纖維細胞、異物巨細胞明顯低于對照組(P＜0.01);漢防己甲素組與地塞米松組相比無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。漢防己甲素組、地塞米松組與對照組角膜內皮細胞密度基本一致，比較差別無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。對照組人工晶狀體表面可見大量且較厚的纖維蛋白膜。膜中間摻雜有大量的細胞成分，以巨噬細胞為主。巨噬細胞胞呈高活化狀態(tài)。漢防己甲素組人工晶狀體表面纖維蛋白膜較少且菲薄，細胞成分小，以巨噬細胞為主，呈非活化狀態(tài)。地塞米松組同漢防己甲素組相似。

3 討論

3.1 漢防己甲素的抗炎、抗氧化作用 漢防己甲素是由防己科植物防己中提取的雙芐基異喹啉類生物堿。含有多個烷氧基。對炎癥的多個環(huán)節(jié)有抑制作用［5］。本研究發(fā)現(xiàn)，術后房水中有大量的白細胞聚集。第1天以中性粒細胞為主，術后第1～14天隨時間推移白細胞數(shù)逐漸減少，而單核巨噬細胞數(shù)逐斷增多。漢防已甲素組和地塞米松組術后細胞總數(shù)、嗜中性粒細胞、巨噬細胞、淋巴細胞計數(shù)明顯低于對照組(P＜0.05)，漢防已甲素組與地塞米松組相比差別無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，提示漢防已甲素能夠廣泛抑制術后房水中各種類型的白細胞聚集，無明顯特異性，且與地塞米松作用相似。漢防已甲素組的蛋白質含量明顯減少，與對照組相比差別有統(tǒng)計學意義(P ＜0.01)，提示漢防已甲素能夠減輕血－房水屏障的紊亂和降低炎癥反應的程度。本研究發(fā)現(xiàn)，術后各組房水中丙二醛的含量隨著損傷的修復而逐漸減少。漢防己甲組丙二醛的含量明顯少于對照組(P＜0.01)。表明漢防已甲素明顯抑制術后前房中脂質過氧化反應，減輕眼局部組織損傷，因而對術后眼組織產(chǎn)生保護作用。

3.2 漢防已甲素抑制人工晶狀體表面細胞反應的作用 白內障摘除人工晶狀體植入術后，人工晶狀體表面出現(xiàn)一系列細胞反應。漢防己甲素具有免疫抑制作用，主要對遲發(fā)型過敏反應好發(fā)生和慢性肉芽腫性炎形成中起關鍵作用的巨噬細胞和細胞因子起作用。能明顯降低白介素-1和α－轉化因子的mRNA的表達水平，阻滯其合成。并且抑制單核細胞的增生和白介素-2、白介素-4和γ-干擾素的產(chǎn)生，抑制巨噬細胞的活化，降低其氧耗量，抑制其呼吸爆發(fā)的過程［6］。本實驗人工晶狀體植入術后，其表面發(fā)生巨噬細胞、成纖維細胞、異物巨細胞、超大巨細胞和淋巴細胞參與的細胞反應，以巨噬細胞為主，早期尚有中性粒細胞參與。吞噬細胞胞質內吞噬較多的顆粒，表面突起多，微絨毛豐富，可謂高活化狀態(tài)。超大巨細胞、異物巨細胞表面均有大量巨噬細胞粘附，并有融合趨勢。局部應用漢防已甲素后人工晶狀體表面巨噬細胞、異物巨細胞、成纖維細胞數(shù)均明顯少于對照組，巨噬細胞呈非活化狀態(tài)，異物巨細胞、超大巨細胞表面突起少，提示局部應用漢防已甲素可顯著減輕人工晶狀體表面細胞反應，抑制細胞的活性，并且抑制巨噬細胞、成纖維細胞、異物巨細胞、超大巨細胞的轉化，阻斷其演變過程，從而達到抑制人工晶狀體表面細胞反應的目的。

3.3 漢防已甲素對人工晶狀體前膜的抑制作用 人工晶狀體前膜的形成是多因素參與或介導的結果。與術后炎癥反應、免疫反應和細胞增生等多種因素有關。本研究結果顯示，人工晶狀體植入術后，均發(fā)生不同程度的炎癥反應，主要以細胞聚集和蛋白質滲入為主，3 d就形成Ⅱ級人工晶狀體前膜的實驗兔，其術后炎癥反應時間長，人工晶狀體表面可見大量細胞沉積 ，且細胞成高活化狀態(tài)。局部應用漢防已甲素后，炎癥明顯減輕，人工晶狀體表面增生減弱，細胞呈非活化狀態(tài)，人工晶狀體前膜與空白對照組比較差別有統(tǒng)計學意義(P ＜0.01)?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，漢防己甲素既是一種Ca2+通道阻滯劑，又是鈣調蛋白拮抗劑。推測漢防己甲素抑制人工晶狀體抑制人工晶狀體前膜的機制為:①抑制了術后眼內炎癥反應。②抑制了術后眼內免疫反應。③抑制了成纖維細胞的增生［7］。值得提出的是，漢防已甲素抑制人工晶狀體前膜的程度與地塞米松作用相似(P＞0.05)，但由于漢防已甲素無明顯毒副作用，可長期使用［8，9］，因而可認為漢防已甲素可能成為一種很有前途的抑制人工晶狀體前膜的藥物。

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