陳弟詩，李金海，鄧永強，李 春

（四川動物疫病預(yù)防控制中心，四川 成都 610041）

豬藍耳病是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種豬繁殖障礙和呼吸系統(tǒng)的高度傳染性疾病。其以發(fā)熱，厭食，懷孕后期發(fā)生流產(chǎn)和產(chǎn)死胎、木乃伊胎及各種年齡的豬特別是仔豬的呼吸道癥狀為特征。該病1987 年自美國首先報道以來，先后在德國，加拿大，日本，荷蘭，西班牙，法國，英國等國家陸續(xù)報道，給全球養(yǎng)豬業(yè)帶來了重大的經(jīng)濟損失。1987 年郭寶清首先報道我國第一例藍耳病之后，20 多個省市發(fā)現(xiàn)本病，特別是2006 年5—9月，我國南方數(shù)省先后暴發(fā)豬“高熱病”以來，本病已蔓延至全國。目前，由于PRRSV 不斷發(fā)生變異，在同一豬場中有時會同時感染好幾種本病毒變異株，由于所使用的疫苗對其他毒株的交叉保護不佳，不論豬場條件好壞，規(guī)模大小，幾乎都無一幸免，給我國的養(yǎng)豬業(yè)帶來不可估量的經(jīng)濟損失。

1 藍耳病病毒病原學

PRRSV 屬于動脈炎病毒科動脈炎病毒屬，為有囊膜的單股RNA 病毒，基因組長度為15 kb。1991 年荷蘭中央獸醫(yī)研究中心學者首次從自然感染病豬體內(nèi)分離到本病毒。巨噬細胞是PRRSV 的專嗜細胞。PRRSV 也可在單核細胞、神經(jīng)膠質(zhì)細胞、豬睪丸細胞以及傳代細胞(MA-104、MARC-145、CL2621、HS.ZH)中增殖，但病毒對6～8 周齡仔豬的肺泡巨噬細胞（PAM）最為敏感。PRRSV 在這些細胞中增殖可產(chǎn)生細胞病變(CPE)，表現(xiàn)為細胞的圓縮，聚集脫落和迅速崩解。PRRSV病毒對pH 敏感，在pH6.5～7.5 間相對穩(wěn)定，當pH 小于5 或大于7 的條件下，其感染力下降95%以上。干燥可很快使PRRSV 失活，對有機溶劑十分敏感，經(jīng)氯仿處理后，其感染力基本完全消失。因此，常用的消毒劑即可將其殺滅。

研究表明，PRRSV 抗原性差異很大，具有快速變異的特征，而且同型分離株之間的重組概率也較高，這就導致了不同毒株間只有很少的交叉保護力。根據(jù)抗原性差異，可將PRRSV 分為歐洲型和美洲型，前者主要流行于歐洲，后者主要流行于美洲及亞太地區(qū)，但近來在歐洲也分離到美洲型毒株，在北美分離到類歐洲型的美洲型毒株。對我國而言，有人應(yīng)用多價血清和單克隆抗體檢測，證明近似于美洲型。

PRRSV 有別于其他常見病毒的一個重要特征在于其抗體依賴性增強作用(ADE)。當在培養(yǎng)物中加入PRRSV 抗體后，能增強病毒的復制能力，同樣當在病毒中加入該病毒抗體后也可使其在妊娠期的胎兒體內(nèi)的復制能力大為增強。這種現(xiàn)象稱為抗體依賴性增強作用。就其原因可能因為抗體與病毒形成的免疫復合物借助細胞表面的FC 受體與巨噬細胞結(jié)合，增加了病毒進入細胞的機會，從而導致與抗體結(jié)合的PRRSV 比正常的PRRSV 更容易進入巨噬細胞?？贵w依賴性增強作用在病毒的致病機制及免疫學上具有重要意義，當仔豬通過母源抗體獲得被動免疫力，抗體依賴性增強作用就會在母源抗體水平降至保護水平之下體現(xiàn)出來，從而增加了仔豬的易感性。同樣在疫苗的研制過程中，抗體依賴性增強作用也帶來了不少的麻煩，因為疫苗毒誘導的抗體可能會增強野毒株在豬體內(nèi)的復制力，而野毒株產(chǎn)生的抗體也同樣可能增強疫苗毒的復制力。

2 致病機理

PRRSV 嗜好在豬肺泡巨噬細胞（PAM）和肺血管內(nèi)巨噬細胞內(nèi)復制，首先與PAM 的受體結(jié)合，造成大量PAM 裂解，機體免疫系統(tǒng)遭到損失，隨著細胞的崩潰，進入血液循環(huán)和淋巴循環(huán)，結(jié)果可導致病毒血癥的形成及全身淋巴結(jié)的感染。許多癥狀和病變都與微循環(huán)障礙密切相關(guān)，中央神經(jīng)系統(tǒng)微循環(huán)障礙致使血管通透性增強，血液的液體部分和有形成分不同程度滲出外，造成血管周圍水腫、出血或管套形成以及腦和脊髓實質(zhì)中灶狀出血，這些變化與臨床觀察所見厭食、沉郁、昏睡甚至體溫升高或死亡密切相關(guān)。由于巨噬細胞的大量破壞,使其對異物的非特異性吞噬清除功能大大降低及PAM 發(fā)揮殺菌作用的功能也隨之下降，易繼發(fā)其他細菌或病毒感染而使疾病的癥狀加重。此外，PRRSV 還可通過血液循環(huán)穿過胎盤而使妊娠中的胎豬受到感染，PRRSV 在母豬的妊娠早期感染時較難引起流產(chǎn)，可能是因為早期胎豬對病毒的致死作用有較強的抵抗力和病毒難以通過妊娠早期的胎盤有關(guān)，但在母豬妊娠的后期(后3 個月)感染則可引起流產(chǎn)、早產(chǎn)、死產(chǎn)、弱胎等繁殖障礙。該病毒還可以感染生殖細胞，并導致精細胞的缺損和死亡，而大量的未成熟的精細胞便成了藍耳病病毒的攜帶者，由此導致公豬的精子數(shù)量下降或非正常精子比例升高，公豬精液成了持續(xù)性排毒的來源，而當母豬使用這些精液時，往往不能受孕；同時該病毒也感染卵巢卵泡中的巨噬細胞。

3 現(xiàn)有的藍耳病疫苗

對于PRRS 來說，目前尚無十分有效的免疫防治措施，但在群體有PRRSV 感染史或PRRS 高風險的情況下，疫苗免疫不失為一種有效的預(yù)防控制PRRS 的有效辦法。

3.1 滅活疫苗

目前，西班牙，美國，荷蘭，加拿大和中國都已研制出滅活疫苗并已投入市場，主要用于預(yù)防后備母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬感染PRRS 所造成的繁殖障礙。PRRS 滅活疫苗具有安全、不存在散布病毒和造成PRRS 新疫源的危險，不能返祖返強，便于貯存和運輸、對母源抗體的干擾作用不敏感等優(yōu)點。因此，被作為預(yù)防和控制PRRS 的首選疫苗。加拿大的Rogan 等研究表明，用PRRS滅活疫苗免疫豬后，可刺激豬產(chǎn)生針對PRRSV 的抗體，這些抗體可減少豬病毒血癥的發(fā)生。剖解結(jié)果顯示，接種過滅活苗后，可有效阻止肺部病變。吳家強等用PRRSV SD 株制備滅活疫苗，并對這些疫苗進行了安全性實驗，結(jié)果3 個實驗組（一組為常規(guī)劑量，二組為3 倍劑量，三組為5 倍劑量）中均未見不良反應(yīng)。徐滌平等用PRRSV 滅活苗免疫繁殖母豬，結(jié)果表明，母豬在實施接種后，平均每窩多獲得活仔豬3.7 頭，免疫母豬所產(chǎn)的仔豬在哺育階段健康狀況良好，病死率較以前下降了7.2%；哺乳仔豬進入保育階段，采取接種PRRS 滅活疫苗，其病死率分別比試驗前和對照組下降6.4%和2.7%。郭寶清等用國內(nèi)分離出的PRRSV CH-1a 毒株制成PRRS 油乳劑滅活苗，試驗顯示，該疫苗免疫豬20 d 前后抗體就達到了高峰，并可持續(xù)6 個月，具有較長的免疫保持期。2005 年，王君瑋等利用山東某豬場分離的強毒株接種Marker-145細胞，經(jīng)甲醛滅活后與油乳劑乳化制成油乳劑滅活疫苗，其對初生仔豬，斷奶豬及妊娠母豬均無不良反應(yīng)，且有良好的免疫效果。但是，目前尚無資料顯示提高疫苗滴度與增強免疫保護有直接的相關(guān)性。Swenson 等報道，接種過PRRS 滅活疫苗的公豬，其精液中病毒（攻毒）的持續(xù)時間可明顯縮短，但后來Nielsen 用來源相同的滅活疫苗免疫公豬，結(jié)果卻沒能減少精液中的病毒含量。造成這種現(xiàn)象的原因可能是因為前者使用的攻毒株與疫苗株相同，而后者則不同，這表明不同滅活疫苗對不同毒株感染所能提供的交叉保護力有限。袁麗萍（2007）報道高致病性藍耳病滅活苗接種后需28 d 才可產(chǎn)生免疫力，由于產(chǎn)生的免疫空檔大不能保護仔豬，而仔豬又是主要貯存宿主。而且，滅活疫苗主要誘導的是體液免疫，對于主要靠細胞免疫來清除的PRRSV 來說很難有確實的效果。綜上所述，滅活疫苗雖然有一定效果，但其存在著不同毒株間交叉保護力弱，免疫力產(chǎn)生期較長，保護力持續(xù)時間短，加之滅活疫苗所固有的接種次數(shù)多，免疫劑量大，佐劑的副作用等缺點，想通過滅活疫苗控制和根除PRRSV 在豬場的存在和流行十分困難。

3.2 弱毒素疫苗

PRRS 弱毒疫苗具有免疫效果好、免疫力堅強、免疫期長等優(yōu)點，在控制PRRS 臨床癥狀上明顯好于PRRS滅活疫苗。研究報道，PRRS 弱毒疫苗接種仔豬后110 d 采用同源性高的強毒攻擊，可收到100%的保護力；架子免疫后7 d 即能發(fā)生保護性免疫應(yīng)答，并能持續(xù)16 周以上。最早進入中國市場的PRRS 活疫苗是由勃林格生產(chǎn)的疫苗，該疫苗是用美洲型PRRSV 2332 株經(jīng)Marc-145 細胞傳代后生產(chǎn)的，疫苗在抵抗病毒感染方面有著良好的作用。國內(nèi)方面，中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所的蔡雪輝等研究的活疫苗已經(jīng)批準投放市場，他們利用體外低溫傳代致弱技術(shù)，系對國內(nèi)分離的毒CH-1a 株進行致弱并得到了理想的致弱株而研制。該疫苗不僅能有效抵抗經(jīng)典的毒株攻擊，且對高致病性的PRRSV 也有一定的保護作用，經(jīng)3000 多萬頭份的田間試驗，表現(xiàn)出良好的安全性和免疫保護作用。后來，國內(nèi)多家單位也開展PRRS 活疫苗的研究，他們同樣是通過細胞傳代致弱PRRSV，然后用毒力致弱株來生產(chǎn)疫苗，初步實驗證明，毒力減弱的毒株仍保持良好的穩(wěn)定性和免疫原性。然而關(guān)于弱毒疫苗效果的反面報道也屢見不鮮，Botner 等報道，在丹麥對1000 多頭PRRS 血清學陰性豬使用了弱毒疫苗，可是不久后豬群發(fā)生了PRRS，而且從流產(chǎn)胎兒和死胎中分離到了疫苗病毒，發(fā)現(xiàn)疫苗病毒可經(jīng)胎盤感染胎兒，并向未接種的母豬傳播，有些豬群則表現(xiàn)出急性PRRS 樣綜合癥狀。也有研究者用該疫苗接種公豬，隨后以強毒攻擊，發(fā)現(xiàn)有精液排毒和精液質(zhì)量下降等現(xiàn)象。所以PRRS 弱毒疫苗的毒力返強的可能性是存在的。從以上結(jié)果表明，PRRS 弱毒疫苗免疫產(chǎn)生期快，在控制PRRS 臨床癥狀上明顯好于PRRS 滅活疫苗。但PRRS 強毒和弱毒在豬體內(nèi)的反應(yīng)過程是一致的，所以長期使用PRRS 弱毒疫苗所帶來的安全問題仍是目前PRRS 免疫中最大的爭議。還有報道稱，由于PRRSV 易發(fā)生突變的性質(zhì)，如果豬群存在藍耳病，帶毒弱毒苗免疫容易導致疫苗毒株與豬群原已存在的野毒毒株基因重組而出現(xiàn)新的變異毒株，使豬群中的藍耳病毒株越來越多，藍耳病越來越難以控制。基于上述原因，目前市面上PRRS 弱毒疫苗多用于感染壓力大的豬場和仔豬使用，對于PRRSV 陰性的豬場（雖然現(xiàn)在已經(jīng)很難找出）和種豬特別是在妊娠期的母豬一般不提倡使用。

3.3 基因工程苗

由于滅活疫苗與弱毒疫苗存在著或多或少的不足，人們迫切需要找到一種適用于各類豬群，免疫效果好，不存在散毒隱患、使用安全的PRRS 疫苗，不少學者將目光轉(zhuǎn)向了基因工程技術(shù)。近年來關(guān)于PRRSV 的基因工程的研究不乏報道，其中包括陳煥春、方六榮、寧宜寶等，他們的研究也取得了喜人的進展，但由于種種原因國內(nèi)尚沒有正式批準的PRRS 基因工程苗上市。

4 藍耳病免疫疑云重重

4.1 PRRSV 變異異常頻繁

藍耳病病毒作為一種RNA 病毒，極易發(fā)生基因突變和重組。越來越多的報道表明不同的PRRSV 分離株特別是來源于不同地區(qū)或國家的分離株在毒力，生物學特性、抗原性和遺傳特性上存在很大差異。最極端的報道出現(xiàn)在2002 年，Chang 等在其研究中發(fā)現(xiàn)：用PRRSV 接種3 頭SPF 豬后，PRRSV 在第7 天即發(fā)生變異。用接種豬病料連續(xù)傳遞6 代之后，在7 代所有21 頭試驗豬中均分離到3～6 個核苷酸發(fā)生變異的藍耳病病毒，報道還稱變異后的PRRSV 在基因型上即便僅有l(wèi)%的差異2 個亞型之間的抗體也可能沒有交叉保護。這可能導致某些豬場使用弱毒苗時開始收到了明顯的效果，但過段時間又沒有效果?；谏鲜鲈蛞詥我籔RRSV 毒株制備的疫苗完全不能保護豬免受異源毒株的感染，這無疑為PRRS 的有效預(yù)防帶來了困難。

4.2 致病機理尚不十分明了

人們對PRRSV 致病機理中仍存在很多亟待解決的問題。疫苗開發(fā)研究首先是要詳細了解參與保護性免疫力產(chǎn)生的T 細胞和B 細胞的表位，最終確定中和表位。2010 年，Darwich 等在其研究報道中仍然指出：與其他一些經(jīng)典病毒，如流感病毒、反轉(zhuǎn)錄病毒、皰疹病毒相比，人們對PRRSV 的了解存在太多的未知數(shù)，尤其是涉及到致病機制方面的內(nèi)容：病毒侵入細胞的過程、各種結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)在病毒復制過程中的作用以及病毒粒子包裝出芽等。正因為如此，藍耳病的免疫機理至今也不完全清楚。

4.3 抗體依賴性增強作用

抗體依賴性增強作用的機理前已述及?？梢灶A(yù)見到假如豬群處于亞健康狀態(tài)或是豬群在接種疫苗之前已經(jīng)感染了PRRSV，尚未表現(xiàn)出臨床癥狀。這時候接種疫苗反而起反作用，疫苗刺激機體抗體上升過程中產(chǎn)生的亞中和狀態(tài)抗體將促進帶毒豬體內(nèi)潛在的藍耳病病毒加速復制，加劇藍耳病發(fā)病，造成豬只發(fā)病甚至死亡。同時，豬群中藍耳病陰性豬只經(jīng)藍耳病疫苗免疫后，因體內(nèi)存在藍耳病抗體而對藍耳病易感，受群體中藍耳病感染或發(fā)病豬感染而至發(fā)生藍耳病。

4.4 抗體水平與保護力沒有明顯的相關(guān)性

時至今日，對于PRRSV 尚沒有用來預(yù)測和分析機體受保護的免疫學方法，至于PRRSV 中和抗體的作用及有無中和作用仍有爭論。有研究結(jié)果表明,在中和抗體產(chǎn)生之前,豬體內(nèi)的病毒血癥已經(jīng)消失，很顯然中和抗體不是終止病毒血癥的原因。在免疫方面到底是什么原因使病毒血癥消失,Tom Duinhof博士認為,目前業(yè)內(nèi)也還沒有分析清楚。此外，作為以細胞免疫為主的PRRSV，抗體水平只能評估體液免疫，不代表細胞免疫水平。因此，評價疫苗的免疫保護力，最確實的方法是動物攻毒保護試驗。另一方面，研究結(jié)果表明PRRSV 的變異多有發(fā)生，研究資料尚不能證明不同變異株之間的交叉免疫作用、達到陽性的抗體水平就能夠有效保護強毒攻擊。最重要的是，目前用來檢測PRRSV 抗體水平的試劑盒不能像偽狂犬試劑盒一樣區(qū)分野毒與疫苗抗體，有可能感染導致的抗體水平比疫苗免疫后的抗體水平還要高，所以檢測到藍耳病抗體陽性并不代表可以對強毒攻擊達到有效保護。

4.5 救命藥還是奪命針

由于PRRS 疫苗的本身性質(zhì)及疫苗生產(chǎn)過程中問題，導致豬不接種沒事接種后反而發(fā)病的問題頻見報道。對于PRRS 疫苗的效果仍有許多專家和養(yǎng)殖戶持懷疑和觀望的態(tài)度。持懷疑態(tài)度的專家認為，現(xiàn)剛開發(fā)出的PRRS 疫苗的實驗數(shù)據(jù)是在藍耳病病毒抗原、抗體陰性的條件下得出的。但是目前國內(nèi)大部分豬群都是藍耳病抗原、抗體陽性豬場，而新疫苗在陽性豬場的實驗數(shù)據(jù)還沒有得到；另外很多豬場去年已經(jīng)發(fā)病，這些豬場現(xiàn)在使用新疫苗，效果無法把握。

5 結(jié)語

自1996 年第一株P(guān)RRSV 分離以來，盡管采取了很多的預(yù)防控制措施，PRRS 仍在我國流行和蔓延，且有愈演愈烈之勢。目前國內(nèi)己很難找到PRRS陰性的豬場，成為危害我國養(yǎng)豬業(yè)的一個最重要的傳染病。到目前為止，對于PRRS 的防控尚沒有形成安全有效切實可行的方案，對于當前我們所面臨的形勢，一方面需要廣大科技工作者應(yīng)保持樂觀的態(tài)度、努力攻關(guān)，在現(xiàn)有的基礎(chǔ)上深化對PRRSV 在分子生物學，免疫學，遺傳變異等方面的認識以開發(fā)出切實有效、使用安全的疫苗；另一方面，在實踐生產(chǎn)過程中應(yīng)建立健全生物安全體系，定期對豬舍和環(huán)境進行消毒，保持豬舍、飼養(yǎng)管理用具及環(huán)境的清潔衛(wèi)生，通過嚴格的衛(wèi)生消毒措施把豬場內(nèi)的病原微生物的污染降低到最低限，防止外面疫病的傳入和最大限度地控制和降低PRRSV 感染豬群的發(fā)生率和繼發(fā)感染機會。

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