黃玉慧，郭力

我國是中藥資源大國，儲(chǔ)藏豐富，共計(jì)12,807種，其中藥用植物11,146種，藥用動(dòng)物1,581種，藥用礦物80種[1]，如何優(yōu)質(zhì)高效地利用好我國豐富的中藥資源關(guān)系到中醫(yī)藥事業(yè)的發(fā)展。長久以來，原始、單一的中藥質(zhì)量控制方法，一直制約著中藥質(zhì)量的提高，這也是制約我國中藥走向國際的障礙之一。要使中藥走出國門，真正的被全世界接受，我們就要努力提高中藥質(zhì)量并提高中藥質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)。尋找既能被國際接受又能體現(xiàn)出我國中藥特色的質(zhì)控指標(biāo)。

1 中藥質(zhì)量控制常規(guī)方法

1.1 來源鑒別[2]

來源鑒別主要是對(duì)根、莖、葉、花、果實(shí)等器官，以及孢子囊、子實(shí)體等繁殖器官進(jìn)行形態(tài)觀察[3]。來源鑒別首先保證了用藥的正確性，避免了藥物誤用的情況。但中藥品種繁多，給來源鑒別帶來了一定的困難，但DNA分子遺傳鑒別技術(shù)的引入使得這一問題迎刃而解。

1.2 顯微鑒別

顯微鑒別是利用顯微技術(shù)對(duì)中藥進(jìn)行顯微結(jié)構(gòu)分析，以確定其品種和質(zhì)量的一種鑒定方法，包括組織鑒定和粉末鑒定[4]?！吨袊幍洹?010版一部幾乎每味中藥項(xiàng)下都有顯微鑒別及其顯微特征描述。

1.3 物理常數(shù)的測定

包括相對(duì)密度、旋光度、沸點(diǎn)、熔點(diǎn)等[4]。例如用蔗糖對(duì)蜂蜜進(jìn)行摻假，經(jīng)旋光度檢查未摻假蜂蜜為左旋，摻假蜂蜜為右旋[5]。

1.4 理化鑒別

理化鑒別主要包括顯色反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、泡沫反應(yīng)、溶血指數(shù)、微量升華、熒光分析等，方法精密度不高，專屬性差，使用時(shí)需排除干擾。在檢測淀粉的存在時(shí)就常使用碘顯色實(shí)驗(yàn)[6]，李紅武等[7]使用茚三酮顯色反應(yīng)來測定煙草中氨基酸的含量。

1.5 紫外-可見分光光度法

該法主要用于主成分或有效成分在200～400 nm處有最大吸收波長的中藥。中藥化學(xué)成分多且復(fù)雜，在測定中紫外吸收光譜常常彼此干擾、重疊，因此該法主要用于提取純化后的大類成分如總黃酮、總生物堿、還原糖、皂苷類等成分的測定。

1.6 紅外光譜法

紅外光譜具有很強(qiáng)的特征性，能為中藥材的整體成分分析提供大量信息，該法具有快速、準(zhǔn)確、干擾小等特點(diǎn)，主要用于物質(zhì)的鑒別和結(jié)構(gòu)分析。圖雅[8]等人運(yùn)用該法對(duì)蒙藥草烏花藥材中有效成分進(jìn)行了鑒別和結(jié)構(gòu)分析，并對(duì)提取工藝進(jìn)行了篩選；李冰寧[9]等人利用紅外光譜測定了炮制前后水蛭化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)變化。

1.7 高效液相色譜法

高效液相色譜法具有分離效能高、分析速度快、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于中藥有效成分含量測定中。通過指標(biāo)性成分或特異性成分的含量測定可為藥材質(zhì)量的優(yōu)劣、真?zhèn)吻闆r提供一定依據(jù)。因這一方法的普遍性，《中國藥典》2010版中絕大部分藥材和制劑都采用此法來測定藥材中有效成分的含量以保證藥材的質(zhì)量[10]。

2 中藥質(zhì)量控制新方法

控制中藥中某一或某幾種成分的含量并不等同于真正意義上的中藥質(zhì)量控制，這也不能反應(yīng)中藥的整體性，因此通過某種單一的方法來對(duì)中藥實(shí)行全面的質(zhì)量控制是不科學(xué)的。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展以及各種新儀器的問世，應(yīng)用于中藥質(zhì)量控制的方法和手段也不斷增加，從原來單一的質(zhì)控指標(biāo)發(fā)展到現(xiàn)在的多質(zhì)控指標(biāo)，這使得中藥質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)全面提高。用于質(zhì)量控制的新方法主要有：

2.1 高效毛細(xì)管電泳法

高效毛細(xì)管電泳（HPCE）是具備電泳和色譜技術(shù)兩大優(yōu)點(diǎn)的一種以樣品電荷大小、等電點(diǎn)、極性強(qiáng)弱、親和行為等為依據(jù)的新型分離分析方法[11]。具有高靈敏度、高分辨率、高柱效、速度快、樣品消耗少、成本低、重現(xiàn)性好等特點(diǎn), 被廣泛應(yīng)用于生物工程、醫(yī)學(xué)臨床檢驗(yàn)、藥物分析等領(lǐng)域。對(duì)于同分異構(gòu)體化合物的分離，高效液相色譜法的分離效果并不是很好，但使用HPCE法就可以很好的解決這一問題。黃先敏等[12]使用HPCE法測定了柴胡中丁香酚的含量；鄭一寧等[13]采用此方法分離了麻黃堿和偽麻黃堿，初步探討了分離原理，并建立了相應(yīng)的檢測方法。

2.2 指紋圖譜鑒定技術(shù)

中藥指紋圖譜是指某種或某一地區(qū)的中藥材或中成藥中所共有的、具有其特征性的某類或幾類成分的色譜或光譜圖譜。單一的研究方法無法反映中藥的復(fù)雜性和整體性，也難以全面反映和有效控制中藥材及中成藥的內(nèi)在品質(zhì)，而指紋圖譜是從藥材的全成分分析出發(fā)，這點(diǎn)符合中藥的整體性，使質(zhì)量控制從控制主要成分或有效成分過渡到對(duì)藥物整體化學(xué)成分的控制。在中藥的用藥實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)某一類或幾類有效成分含量高并不代表其藥材的質(zhì)量好、臨床療效好，這使得我們對(duì)中藥的控制必須從藥材的整體性出發(fā)。目前在中成藥的質(zhì)量控制中，一些不法商販為節(jié)約成本直接使用提取物來進(jìn)行投料，對(duì)這一類假藥就可以使用指紋圖譜鑒定技術(shù)來對(duì)其進(jìn)行檢驗(yàn)。王桂紅等[14]利用此技術(shù)對(duì)不同產(chǎn)地的青皮進(jìn)行了比較。趙欣等[15]也通過指紋圖譜鑒定技術(shù)對(duì)不同產(chǎn)地的黃精做了比較，并整體的評(píng)定了其質(zhì)量的優(yōu)劣。

2.3 多維色譜及光譜聯(lián)用技術(shù)的應(yīng)用

色譜具有分離能力強(qiáng)、檢測靈敏度高、分析速度快的優(yōu)勢，但卻不能對(duì)未知化合物進(jìn)行鑒定，而質(zhì)譜、紅外光譜、核磁共振波譜等則具有很強(qiáng)的鑒定未知化合物結(jié)構(gòu)的能力。因此，色譜和光譜的聯(lián)用實(shí)現(xiàn)了不同技術(shù)的優(yōu)勢互補(bǔ)，既能分離復(fù)雜化合物又能鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。此項(xiàng)技術(shù)的的使用使樣品的分離、定量、定性成為一個(gè)連續(xù)的過程。該法具有靈敏度高、選擇性強(qiáng)、速度快、專屬性強(qiáng)、鑒別能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。目前使用最多的為液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（LC-MS）、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（GCMS）。LC-MS主要用于不揮發(fā)性化合物、極性化合物、熱不穩(wěn)定化合物及大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多聚物等）的分析測定。劉瑞等[16]運(yùn)用LC-MS鑒定了大青葉水提液中的5種化學(xué)成分。GC-MS主要用于揮發(fā)性成分的定性定量分析，判斷化合物的分子結(jié)構(gòu)、準(zhǔn)確地測定化合物的分子量，以及農(nóng)殘的檢測。江德甜等[17]利用GC-MS對(duì)17種農(nóng)藥建立了檢測、定量和結(jié)構(gòu)確認(rèn)的方法。目前，LC-MS的譜庫不是十分完善，容易出現(xiàn)“假陽性”，如需確定化合物結(jié)構(gòu)還需要借助于液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜（HPLC-TOP-MS）全掃描模式[18]或核磁共振等儀器的分析。相比LC-MS，GC-MS的譜庫相對(duì)完善，鑒定化合物結(jié)構(gòu)更具準(zhǔn)確性。

2.4 電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）

該法主要用于測定常量元素和痕量元素的含量，相比原子吸收光譜法、原子發(fā)射光譜法，在測定微量元素方面具有噪音更小、靈敏度更高、準(zhǔn)確性更高的優(yōu)點(diǎn)。ICP-MS非常靈敏，對(duì)痕量元素也能檢出，可用于中藥中有害重金屬元素的檢測，這一方法在中藥質(zhì)量安全性控制方面起著越來越重要的作用。溫慧敏等[19]運(yùn)用ICP-MS測定了黨參、莪術(shù)、桔梗和龍膽中的重金屬元素，并初步建立了鉛、鎘、汞、砷四種有害元素的檢測方法。譚鐳等[20]也運(yùn)用此法測定了10批金銀花和白芷中的5種有害金屬元素。

2.5 “一測多評(píng)”技術(shù)

“一測多評(píng)”技術(shù)是通過中藥有效成分間存在的內(nèi)在函數(shù)關(guān)系和比例關(guān)系，通過測定1個(gè)成分(對(duì)照品可以得到者)，來實(shí)現(xiàn)多個(gè)成分(對(duì)照品沒有或難以得到)的同步監(jiān)控，這是“一測多評(píng)”的基本設(shè)計(jì)思想。其運(yùn)用校正因子能夠在對(duì)照品短缺的情況下，實(shí)現(xiàn)多指標(biāo)成分的含量測定?！吨袊幍洹?010版一部黃連項(xiàng)下收載了此方法用于測定小檗堿、巴馬汀、黃連堿、小檗堿、藥根堿的含量[8]。王智民[21]等通過建立人參皂苷Rb1和其他8種皂苷的紫外相對(duì)校正因子，實(shí)現(xiàn)了只有一個(gè)對(duì)照品測定三七中多個(gè)人參皂苷的含量。“一測多評(píng)”技術(shù)的運(yùn)用解決了中藥化學(xué)對(duì)照品分離難度大或單體不穩(wěn)定或價(jià)格昂貴等問題，有望成為適合中藥特點(diǎn)的多指標(biāo)質(zhì)量評(píng)價(jià)新模式。

2.6 薄層-生物自顯影技術(shù)

薄層-生物自顯影技術(shù)是一種集色譜分離、鑒定、活性測定于一體的抗菌活性物質(zhì)檢測方法，該法結(jié)合了比色法與色譜分離技術(shù)兩者的優(yōu)點(diǎn)。中藥成分十分復(fù)雜，通過薄層生物自顯影技術(shù)能使我們?cè)诒影迳铣醪搅私饪咕钚猿煞值南鄬?duì)極性，為后續(xù)分離該化合物提供了依據(jù)?！吨袊幍洹?010版一部中熟地黃中應(yīng)用了此項(xiàng)技術(shù)[8]；趙江林[22]等運(yùn)用該法對(duì)滇重樓中的抗大腸桿菌、白色念珠菌、稻瘟病菌的有效成分進(jìn)行了檢測分離。

2.7 DNA分子遺傳標(biāo)記技術(shù)

DNA分子遺傳標(biāo)記技術(shù)是以DNA分子特征作為遺傳標(biāo)記而進(jìn)行物種鑒別。傳統(tǒng)的中藥鑒別方法主要是通過對(duì)藥材的形、色、氣、味等表面特征的分辨來實(shí)現(xiàn)，然而我國中藥資源非常豐富，即便是同一種藥用植物個(gè)體間也存在較大的差異，同種藥物中也不斷有變種出現(xiàn)，這就給傳統(tǒng)的鑒別技術(shù)帶來了極大的挑戰(zhàn)。DNA分子遺傳標(biāo)記技術(shù)是建立在核酸水平上的一項(xiàng)新技術(shù)，其鑒定結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠，此法廣泛運(yùn)用于藥用植物種質(zhì)資源鑒定、藥用植物遺傳多樣性、藥用植物親緣關(guān)系分析等方面[23]。黃璐琦等[24]對(duì)興安白芷、祁白芷、杭白芷三者共29個(gè)個(gè)體的基因組進(jìn)行檢測，通過計(jì)算遺傳距離發(fā)現(xiàn)祁白芷、杭白芷屬于同一類群。曹雅男等[25]運(yùn)用此方法對(duì)4種正品龍膽的43個(gè)個(gè)體的遺傳多樣性和個(gè)體間的遺傳距離進(jìn)行了分析。《中國藥典》2010版一部中烏梢蛇、蘄蛇項(xiàng)下也運(yùn)用了本方法。

3 總結(jié)與展望

隨著科技的發(fā)展, 越來越多的新技術(shù)、新儀器不斷涌現(xiàn)，這些技術(shù)、儀器運(yùn)用在中藥質(zhì)量控制中使得中藥質(zhì)控方法不再單一、片面，而越來越趨向于多方法(包括傳統(tǒng)方法和新方法)的聯(lián)合使用。這使我們能更全面的控制中藥質(zhì)量，對(duì)中藥質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的提高起著非常重要的作用。目前中藥質(zhì)控不僅從有效成分的含量上進(jìn)行控制，也在中藥的整體性、安全性方面有了全面的控制。從2005版《中國藥典》和2010版《中國藥典》之間的差異也可看出中藥質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)的提高，質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)的提高有利于西方國家對(duì)我國傳統(tǒng)醫(yī)藥的認(rèn)可，從而為中醫(yī)藥的發(fā)展以及國際化做好鋪墊，使之更多的服務(wù)于世人。我們也應(yīng)該更加的努力鉆研，爭取在中藥質(zhì)量控制方面找到更好更科學(xué)的方法來全面、高效的控制中藥質(zhì)量。

[1] 張廷模,鄧家剛,周禎祥,等.臨床中藥學(xué)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2006:3.

[2] 國家藥典委員會(huì).中國藥典[S].一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:285.

[3] 陳閩軍,程翼宇.中藥質(zhì)量控制方法初探[J].科技通報(bào),2000.

[4] 康延國,閻玉凝,吳德康,等.中藥鑒定學(xué)[M].北京:中國中醫(yī)藥出版社,2003:33.

[5] 郭文彬,陳玲,賴曉紅.蜂蜜中蔗糖的旋光檢驗(yàn)方法[J].食品研究與開發(fā),1988:4.

[6] 鄭翠英.淀粉與碘顯色實(shí)驗(yàn)影響因素的探究[J].實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與技術(shù),2011,7(8):70.

[7] 李紅武,王璐,周桂園,等.用茚三酮顯色反應(yīng)測定煙草中氨基酸含量[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,38(27):14926.

[8] 圖雅,白金亮,周群等.蒙藥草烏花及其提取物化學(xué)成分的紅外光譜法整體結(jié)構(gòu)解析[J].分析化學(xué)研究報(bào)告,2011,4(39):481.

[9] 李冰寧,武彥文,歐陽杰,等.應(yīng)用紅外光譜技術(shù)研究中藥水蛭的炮制過程[J].光譜學(xué)與光譜分析,2011,4(31):979.

[10] 袁芳,龍泳伶.2010版《中國藥典》中藥質(zhì)量控制方法的新進(jìn)展[J].科技創(chuàng)新導(dǎo)報(bào),2010,23:211.

[11] 劉滿榮,陳少鋒.簡述毛細(xì)管電泳法在中藥分析、鑒定、檢測、分離中的應(yīng)用[J].海峽藥學(xué),2010,10(22):81.

[12] 黃先敏,伍文聰,吳銀梅,等.高效毛細(xì)管電泳法測定柴胡中丁香酚的含量[J].昭通師范高等?？茖W(xué)校校報(bào),2010,5(32):27.

[13] 鄭一寧,謝天堯,莫金垣,等.高效毛細(xì)管電泳分離/電導(dǎo)檢測麻黃堿和偽麻黃堿[J].高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報(bào),2002,2(23): 199.

[14] 王桂紅,張遠(yuǎn)遠(yuǎn),肖伊,等.不同產(chǎn)地青皮高效液相色譜指紋圖譜研究[J].醫(yī)學(xué)導(dǎo)報(bào),2011,4(30):429.

[15] 趙欣,劉曉蕾,蘭曉繼,等.黃精的高效液相色譜指紋圖譜[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2011,20(2):114.

[16] 劉瑞,袁波,劉志剛,等.HPLC-MS鑒定大青葉水提液中的5種化學(xué)成分[J].中藥材,2005,28(9):772.

[17] 江德甜,李琳,趙保成,等.水果和蔬菜中農(nóng)藥殘留的氣質(zhì)聯(lián)機(jī)分析[J].農(nóng)業(yè)與技術(shù),2009,29(4):81.

[18] 郭興杰,安芳,等.液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)與中藥現(xiàn)代化[J].世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2009,1(11):142.

[19] 溫慧敏,陳曉輝,董婷霞,等.ICP-MS法測定4種中藥材中重金屬含量[J].中國中藥雜志,2006,6(31):1314.

[20] 譚鐳,呂昊,等.微波消解-ICP-MS法測定金銀花和白芷中5中有害重金屬元素[J].中國測試,2009,6(35):78.

[21] 朱晶晶,王智民,匡艷輝,等.一測多評(píng)同步測定人參和三七藥材中多種人參皂苷的含量[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2008,43(12):1211.

[22] 趙江林,徐利劍,黃永富,等.TLC-生物自顯影-MTT法檢測滇重樓內(nèi)生真菌中抗菌活性成分[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2008,20:28.

[23] 周潔,王忠華.DNA分子標(biāo)記技術(shù)在藥用植物上的應(yīng)用[J].科技創(chuàng)新導(dǎo)報(bào),2011,4:441.

[24] 黃璐琦,王敏,付桂芳,等.中藥白芷種質(zhì)資源的RAPD分析[J].中國中藥雜志,1999,24(8):457.

[25] 曹雅男,李慶章,孫岳,等.正品龍膽遺傳多樣性的RAPD及ISSR分析[J].中草藥,2005,36(1): 100.