李敬果，翟曉翔，張翠俠，陳向輝

(徐州市中醫(yī)院皮膚科，江蘇徐州221003)

Livin是近年來發(fā)現(xiàn)的人類凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptos protein，IAP)家族的新成員，特異性高表達(dá)于某些實(shí)體腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞系，能抑制許多凋亡刺激劑誘發(fā)的細(xì)胞凋亡。Ki-67是反映腫瘤細(xì)胞增殖活性的指標(biāo)，與腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后高度相關(guān)。作者應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)皮膚鱗狀細(xì)胞癌(cutaneous squamous cell carcinoma，CSCC)組織中 Livin 的表達(dá)，并探討其表達(dá)與細(xì)胞增殖及CSCC臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 40例CSCC標(biāo)本取自徐州市中醫(yī)院病理科2003年至2010年存檔蠟塊。40例患者中，男性22例，女性18例;年齡38～81歲，平均年齡66歲;面、頸等暴露部位27例，胸、背、四肢及陰部等非暴露部位13例;根據(jù)Broders分類，Ⅰ級(jí)12例，Ⅱ級(jí)18例，Ⅲ～Ⅳ級(jí)10例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者8例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者32例。另取10例正常皮膚組織作為對(duì)照。

1.2 檢測(cè)方法 采用免疫組織化學(xué)S-P法檢測(cè)Livin及Ki-67的表達(dá)。Livin單克隆抗體購(gòu)自武漢博士徳公司，Ki-67單克隆抗體、S-P試劑盒、DAB酶底物顯色試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。檢測(cè)具體步驟按試劑盒說明書進(jìn)行，用已知陽性切片作為陽性對(duì)照，PBS代替一抗作陰性對(duì)照。Livin以腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性信號(hào);Ki-67以腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性信號(hào)，隨機(jī)選擇10個(gè)高倍鏡(×400)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，計(jì)算陽性細(xì)胞數(shù)占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的百分比，即Ki-67的增殖指數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 11.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn) α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 Livin的表達(dá) 40例CSCC組織中Livin的陽性率為70.00%(28/40)，而正常皮膚組織中無表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 Livin的表達(dá)與Ki-67增殖指數(shù)的關(guān)系 CSCC組織中Ki-67的陽性率為75.00%(30/40)，Livin陽性表達(dá)CSCC的Ki-67增殖指數(shù)為(36.15±20.27)%，Livin陰性者的Ki-67增殖指數(shù)為(20.36±10.82)%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.3 Livin的表達(dá)與CSCC臨床病理特征的關(guān)系Livin的表達(dá)與CSCC的病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均＜0.05)，而與患者性別、年齡及腫瘤部位無關(guān)(P均 ＞0.05)。見表1。

3 討論

CSCC在我國(guó)的發(fā)病率居皮膚惡性腫瘤之首，占皮膚惡性腫瘤的78.5% ～90.9%［1］，且發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。目前，CSCC發(fā)病機(jī)制仍不十分清楚，但多數(shù)腫瘤的發(fā)生是細(xì)胞凋亡與增殖失衡所致，受細(xì)胞內(nèi)外多種因素控制。隨著腫瘤分子生物學(xué)的研究進(jìn)展，人們?cè)噲D從分子水平揭示腫瘤發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制，并期望通過調(diào)節(jié)細(xì)胞的凋亡和增殖達(dá)到治療腫瘤的目的。

越來越多的研究表明，Livin基因在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，并逐漸成為人們研究的熱點(diǎn)［2－3］。Livin是凋亡抑制因子，在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)，其抑制細(xì)胞凋亡主要作用機(jī)制如下:BIR區(qū)與Caspases家族結(jié)合，抑制其活性，尤其是抑制Caspase-3、Caspase-7和Caspase-9的活性，阻止Caspases家族蛋白在細(xì)胞凋亡時(shí)執(zhí)行蛋白切除功能，進(jìn)而阻斷凋亡受體及以線粒體為基礎(chǔ)的凋亡途徑［4］，使有利于細(xì)胞的增殖及異?；蜻M(jìn)一步積聚，從而促進(jìn)細(xì)胞向惡性方向轉(zhuǎn)化及腫瘤的發(fā)展。目前針對(duì)CSCC組織中Livin表達(dá)狀況的研究較少。本研究結(jié)果顯示，Livin在正常皮膚組織中不表達(dá)，而在CSCC組織中的陽性率為70.00%，提示其可能通過抑制腫瘤細(xì)胞凋亡對(duì)CSCC的發(fā)生、發(fā)展起重要作用，檢測(cè)Livin可能對(duì)CSCC的診斷有重要價(jià)值;病理分級(jí)Ⅲ～Ⅳ級(jí)的CSCC組織中Livin的陽性率為90.00%，明顯高于Ⅰ、Ⅱ級(jí)的41.67%和77.78%;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的CSCC組織中Livin的陽性率為100.00%，明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的62.50%。這些均表明檢測(cè)Livin的表達(dá)對(duì)CSCC惡性程度及預(yù)后的判斷有一定的參考價(jià)值，對(duì)CSCC的發(fā)生、臨床進(jìn)展和生物學(xué)行為評(píng)估也可能具有一定指導(dǎo)意義。

Ki-67是反映腫瘤細(xì)胞增殖活性的指標(biāo)，其表達(dá)隨細(xì)胞周期不同而發(fā)生改變，在有絲分裂G1期到晚期出現(xiàn)，S期和G2期逐漸增加，M期達(dá)到最高值，在細(xì)胞分裂晚期很快消失，G0期不表達(dá)。Ki-67僅在增殖細(xì)胞核中表達(dá)，其半衰期短，脫離細(xì)胞周期后迅速降解，已成為檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖活性的可靠指標(biāo)［5］。Ki-67增殖指數(shù)高低與許多腫瘤的分化程度、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)［6］。本研究結(jié)果顯示，Ki-67在CSCC組織中的陽性率為75.00%，且Livin表達(dá)與Ki-67增殖指數(shù)有關(guān)，提示Livin蛋白促進(jìn)細(xì)胞的增殖，兩者有可能在CSCC的發(fā)生、發(fā)展中共同發(fā)揮作用。

綜上所述，Livin不僅參與了凋亡的調(diào)控，還促進(jìn)了細(xì)胞的增殖，在CSCC的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，可作為判斷CSCC惡性程度、評(píng)價(jià)預(yù)后的指標(biāo)。

［1］趙辨.臨床皮膚病學(xué)［M］.3版.南京:江蘇科學(xué)技術(shù)出版社，2001:1106－1110.

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