黃鳳蘭，李 靜，張 茜，張 群，趙玲玲，聶民利

（1.東北林業(yè)大學生命科學學院，哈爾濱 150040；2.內蒙古民族大學生命科學學院，內蒙古 通遼 028000）

虎尾蘭（Sansevieria trifasciatavar.harnii）又稱虎皮蘭、千歲蘭，是龍舌蘭科虎尾蘭屬，多年生常綠肉質草本植物[1]，原產(chǎn)非洲西部，具有較強的耐寒性，且極少發(fā)生病蟲害，養(yǎng)護較為容易[2]。同時還有凈化空氣的功效，是優(yōu)良的室內環(huán)保植物，被人們稱為“天然的清道夫”[3-5]?；⑽蔡m的常規(guī)繁殖是用扦插或分株方法[6]，但是扦插和分株法繁殖率低，時間較長，而且不易獲得大量的植株，且會出現(xiàn)品種退化現(xiàn)象，金邊虎尾蘭金邊性狀易消失，影響觀賞質量[7]。而采用組織培養(yǎng)育苗方法具有繁殖系數(shù)高、保持原品種特性、避免種性分離、種苗不帶病毒、生長一致等優(yōu)點，從而使種苗生產(chǎn)達到規(guī)?；藴驶凸S化的目標。本試驗以短葉虎尾蘭為研究對象進行組織培養(yǎng)試驗，以葉片為外植體，誘導其再生植株，摸索虎尾蘭在不同的組織培養(yǎng)階段所需的培養(yǎng)條件，從而為短葉虎尾蘭的組織培養(yǎng)體系的建立奠定技術基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

選用生長健壯的短葉虎尾蘭葉片為試材（見圖1），2009～2010年期間在內蒙古民族大學生命科學學院組培室內進行。

1.2 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件

基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基[8-10]，加入不同的植物生長調節(jié)物質，在培養(yǎng)基中添加蔗糖30 g·L-1，瓊脂7 g·L-1，pH 5.6～5.8，室內培養(yǎng)溫度（25±2）℃，每天光照12 h，光強1 500 lx。

圖1 短葉虎尾蘭Fig.1 Short leaf orchid

1.3 方法

1.3.1 材料的消毒處理及升汞滅菌時間的篩選

剪取幼嫩的葉片，用流水沖洗30 min以上，再用75%的酒精處理30 s，在0.1%的HgCl2中滅菌，時間設定3、5和8 min共3個梯度，然后用無菌水涮洗8～10次，接種到MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)。觀察污染情況，計算污染率。污染率（%）=污染的外植體個數(shù)（個）/接種的外植體個數(shù)（個）×100%。

1.3.2 愈傷組織誘導階段植物生長調節(jié)物質（PGR）最佳濃度配比的篩選

將消毒處理過的外植體分別接種到MS+6-BA（1、2、3 mg·L-1）+NAA（0.3、0.5、0.8 mg·L-1）+2，4-D（0.3、0.5、0.8 mg·L-1）共28個處理組合的培養(yǎng)基中（見表1），25 d后統(tǒng)計各處理組合萌動的外植體數(shù)和誘導出的愈傷外植體數(shù)，計算萌動率（%）=萌動的外植體個數(shù)（個）/接種的外植體個數(shù)（個）×100%和愈傷誘導率（%）=長愈傷的外植體數(shù)（個）/接種的外植體數(shù)（個）×100%，根據(jù)結果進行下一步試驗，計算平均相對生長速率（%）=30 d增重量（g）/原有重量(g)×100%[11]。

1.3.3 愈傷組織分化階段PGR最佳濃度配比的篩選

將胚狀體分別接種到MS+6-BA（1、2、3、4 mg·L-1）+NAA（0.3、0.5、0.8、1.0 mg·L-1）共 16 個處理組合的培養(yǎng)基中（見表2），接種40 d后開始統(tǒng)計每個處理外植體長芽的個數(shù)，計算分化率。分化率（%）=芽的個數(shù)（個）/接種的胚狀體數(shù)（個）×100%，篩選出芽誘導階段的最佳PGR配比。

表1 愈傷組織誘導階段的PGR濃度配比Table 1 Ratio of PGR concentration at callus induction phase

表2 芽誘導階段的PGR濃度配比Table 2 Ratio of PGR concentration at bud induction phase

1.3.4 生根階段NAA最佳濃度的篩選

目前凈水器產(chǎn)業(yè)雖然已經(jīng)比較成熟，但產(chǎn)品依舊存在很多難點需要攻克。例如凈水器凈化速度慢、凈化效果無法確認、廢水比太高、噪音大等等問題。盡善盡美無論任何事物都無法做到，但兩全其美的凈水器卻是能夠實現(xiàn)的。

將芽分別接種到MS+NAA（0.0、0.1、0.3、0.5、0.8、1.0 mg·L-1）共6個處理的培養(yǎng)基中，每個處理接種1瓶，3個芽，接種37 d后統(tǒng)計生根情況，篩選出根誘導階段的最佳NAA濃度。

1.3.5 煉苗、移栽

待培養(yǎng)苗的根長到3～5 cm時即可煉苗、移栽。煉苗時需要去除封口膜，在培養(yǎng)基表面加上薄薄的一層自來水，至于散射光下3～5 d。移栽后，最初10～15 d要通過噴霧或罩上透明的塑料以保持很高的濕度（90%～100%），在塑料罩上打些小孔，以利于氣體交換。在保濕數(shù)天后，可把植株搬入溫室，但仍須遮陰數(shù)日，4～6周后即可讓小苗在正常的溫室或田間條件下生長[12]。

2 結果與分析

2.1 外植體最佳升汞消毒時間的篩選結果

將外植體分別用0.1%的升汞處理3、5和8 min，15 d后統(tǒng)計外植體的污染率，統(tǒng)計結果見表3。由表3可以看出，升汞消毒3 min接種的外植體沒有污染，升汞消毒5 min和升汞消毒8 min接種的外植體污染率也很低，但是考慮到升汞對外植體有毒害，所以選擇升汞的消毒時間為3 min。

圖2 剛接種后的虎尾蘭葉片的生長狀態(tài)Fig.2 Growth state of orchid blade inoculated justly

表3 不同消毒時間對外植體生長狀況的影響Table 3 Effect of different sterilization time on explants growth state

2.2 愈傷組織誘導階段生長調節(jié)物質（PGR）最佳濃度配比的篩選

將葉片接種到MS培養(yǎng)基中，1～15號處理在10月12日接種，接種54 d后觀察生長狀態(tài)并統(tǒng)計，統(tǒng)計結果見表4。由表4可知，5、9、13號處理與其他處理相比較萌動率和愈傷誘導率均比較高。

選擇生長狀態(tài)好且狀態(tài)一致的愈傷組織材料分別接種到5、9、13、16、22、23號處理中，接種時間為1月14日，于接種后30 d觀察統(tǒng)計，計算其平均生長速率，統(tǒng)計結果見表6。由表6可以看出，5號處理與其他處理相比較，平均相對生長速率增加最多，達到42.3%，因此5號PGR濃度（1 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-12，4-D）最適合誘導愈傷組織（見圖3）。

2.3 愈傷組織分化階段PGR最佳濃度配比的篩選結果

將狀態(tài)一致的胚性愈傷組織在1月14日分別接種到1～16號處理中，接種后60 d觀察胚性愈傷組織的生芽狀況并統(tǒng)計，統(tǒng)計結果見表7。由表7可以看出，9號處理的芽分化率最高，達到233%。由此可知，9號處理PGR的配比濃度（1 mg·L-16-BA+0.8 mg·L-1NAA）適宜誘導芽的生成（見圖4）。

表4 愈傷誘導階段接種54 d后不同PGR濃度外植體的生長狀況Table 4 Growth state of explants of different PGR concentrations in callus induction stages after 54 d inoculation

表5 愈傷誘導階段接種40 d后不同PGR濃度外植體的生長狀況Table 5 Growth state of explants of different PGR concentrations in callus induction of stages after 40 d inoculation

表6 愈傷組織誘導階段外植體的增重狀況Table 6 Weight status of explants in callus induction stage

圖3 長胚性愈傷的外植體Fig.3 Explants of embryogenic callus

圖4 長芽的胚狀體Fig.4 Embryoids growing buds

表7 愈傷組織分化階段胚狀體的生長狀況Table 7 Growth state of embryoid in callus induction stage

2.4 生根階段NAA的最佳濃度的篩選結果

將幼苗轉移到不同NAA濃度的MS生根培養(yǎng)基中，2月27日接種，在接種38 d后觀察芽的生根情況并統(tǒng)計，結果見表8。由表8可知，1號處理的生根率最高達到100%，而且根的狀態(tài)很好，因此1號處理的NAA濃度（0.1 mg·L-1）適宜誘導根的生成（見圖5）。

表8 生根階段根的生長狀況Table 8 Growth state of roots in rooting stage

圖5 生根的芽Fig.5 Buds grow root

3 討 論

3.1 葉片的選擇時期

試驗選材應選擇生長一段時間的嫩葉片。在試驗過程中，選取的材料有新生長出來的幼嫩葉片，生長一段時間的嫩葉片和老葉片，觀察時發(fā)現(xiàn)，老化的葉片，雖然未受到升汞的傷害但是愈傷誘導率非常低。剛生長出來的嫩葉片，容易受到升汞的傷害導致死亡而不能萌動產(chǎn)生愈傷組織。

3.2 組織培養(yǎng)苗的退化

虎尾蘭的品種有很多，繁殖的方法有扦插和分株法，但是金邊和銀邊虎尾蘭要保持其優(yōu)良品種特性，避免出現(xiàn)返祖現(xiàn)象，只能用分株法，這就使其繁殖速率大大的降低，不能滿足市場的需求，而利用組織培養(yǎng)方法快繁虎尾蘭植株，既能提高植株繁殖速率，又能保持原品種的特性。

3.3 升汞的消毒時間

升汞雖然是劇毒物質，但是對外植體有很好的消毒效果，一般在組織培養(yǎng)時都會選擇升汞對外植體進行消毒。消毒時間的長短隨植物的不同而有差異，本試驗對虎尾蘭葉片的消毒時間進行了摸索，以保證既能達到很好的消毒效果，又不會對外植體造成傷害，本試驗得出的結果是0.1%升汞消毒時間為3 min。但是1987年婁淵祥等以虎皮蘭葉片為外植體快繁虎皮蘭，其0.1%的HgCl2的消毒時間為8 min[9]，為了避免外植體造成傷害，消毒時間越短越好，所以既然消毒3 min的效果也很好，最好選擇3 min。

3.4 IBA對生根的影響

IBA也同NAA一樣可誘導芽快速的生根，本試驗沒有對其進行研究，對于IBA的濃度對生根率的影響有待于進一步的研究。

4 結 論

虎尾蘭葉片表面用0.1%升汞消毒3 min，污染率低，褐化/死亡率低，成活率高，效果最好。愈傷組織誘導培養(yǎng)基以MS+1 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-12，4-D最有利于愈傷組織的生成。誘導芽的培養(yǎng)基以MS+1 mg·L-16-BA+0.8 mg·L-1NAA為最佳，不僅生成的芽多，而且健壯。生根培養(yǎng)基以MS+0.1 mg·L-1NAA最有利于根的生成，根的生長速度快，質量好。

[1] 李澤鴻,張璐,劉文濤,等.虎皮蘭中4種重金屬元素的含量測定[J].北方園藝,2010(1):153-154.

[2] 周宇,閆國華,張開春,等.虎尾蘭葉片切段扦插育苗技術[J].中國花卉園藝,2006(4):25-26.

[3] 林麗仙,謝志南,蘇明華,等.虎尾蘭吸收甲醛及其保護酶活性的初步研究[J].福建農(nóng)業(yè)學報,2009,24(3):258-261.

[4] 李慶軍.觀賞植物吸收居室甲醛能力的比較[D].哈爾濱:東北林業(yè)大學,2006:22.

[5] 吳華芬.健康花卉—虎尾蘭室內養(yǎng)護技術和應用[J].現(xiàn)代園藝,2009(9):23-24.

[6] 劉英文,付世猛.虎尾蘭養(yǎng)護管理要點[J].河北農(nóng)業(yè)科技,2008(17):33.

[7] 謝怡青,溫清英.金邊虎尾蘭的組織培養(yǎng)和快速繁殖[J].農(nóng)業(yè)科技通訊,2007(6):56.

[8] 李勇,楊建芬,張朝成.狐尾龍舌蘭的組織培養(yǎng)和快速繁殖[J].植物生理學通訊,2003(10):474.

[9] 洪向平,陳玉生,黃麒參.劍麻的組織培養(yǎng)快繁技術[J].廣西熱帶農(nóng)業(yè),2007(5):29.

[10] 張翠玲,文慧婷.龍血樹組織培養(yǎng)和快速繁殖[J].云南農(nóng)業(yè)科技,2006(3):27-28.

[11] 王忠.植物生理學[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2005:336.

[12] 李浚明.植物組織培養(yǎng)教程[M].北京:中國農(nóng)業(yè)大學出版社,2002:267-268．