王彩冰，晉 玲，黃俊杰，黃彥峰，黃永毅（右江民族醫(yī)學(xué)院應(yīng)用生理學(xué)研究室，廣西百色 533000）

維生素E（VitaminE，VE）又稱生育酚，是一種很強(qiáng)的脂溶性抗氧化劑，其可通過清除氧自由基、抑制脂質(zhì)過氧化來保護(hù)細(xì)胞免受自由基誘導(dǎo)發(fā)生氧化損傷，維持細(xì)胞膜的正常結(jié)構(gòu)[1]。近年來研究[2～4]發(fā)現(xiàn)，VE對(duì)心、肝、腎等器官都有保護(hù)作用，但對(duì)胃黏膜損傷是否具有保護(hù)作用尚未見有文獻(xiàn)報(bào)道。本研究通過吲哚美辛誘發(fā)小鼠胃黏膜損傷模型，探討VE對(duì)其胃黏膜損傷的保護(hù)作用，為VE的進(jìn)一步開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)資料。

1 儀器與材料

1.1 儀器

722型分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；Canon PowershotA2000 IS數(shù)碼照相機(jī)（佳能（中國）有限公司）。

1.2 試藥

VE注射液（上海第九制藥廠，批號(hào)：20070801，規(guī)格：5 mg·mL－1）；吲哚美辛片（商品名：消炎痛，山西省大同云崗制藥廠，批號(hào)：20070513，規(guī)格：每片25 mg）；西咪替丁注射液（山東東明制藥廠，批號(hào)：20070402，規(guī)格：0.2 g·2 mL－1）；碳酸氫鈉（批號(hào)：20070121，分析純）、甲醛（批號(hào)：20070604）均購自成都市科龍化工試劑廠；超氧化物歧化酶（SOD）檢測(cè)試劑盒、丙二醛（MDA）檢測(cè)試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20080422、20080119）。

1.3 動(dòng)物

昆明種小鼠，♀♂兼用，體重20～25 g，由右江民族醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物生產(chǎn)合格證號(hào)：SCXK（桂）2007-0003。

2 方法

2.1 分組與給藥

取小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組（生理鹽水10 mL·kg－1）、模型組（生理鹽水10 mL·kg－1）、西咪替?。?5 mg·kg－1）組和VE低、高劑量（25、50 mg·kg－1）組，每組10只，后3組為藥物組，全部小鼠禁食24 h后，自由飲水至實(shí)驗(yàn)前2 h，灌胃給予相應(yīng)藥物。

2.2 建模

將吲哚美辛片溶于5%碳酸氫鈉溶液中，用蒸餾水稀釋成濃度2.5 mg·mL－1的混懸液。各組小鼠按“2.1”項(xiàng)下給藥30 min后，除正常對(duì)照組再灌胃給予生理鹽水10 mL·kg－1外，其余各組小鼠均灌胃給予吲哚美辛25 mg·kg－1[5]，建立胃黏膜損傷模型。

2.3 胃黏膜損傷程度檢測(cè)

建模4 h后，采用頸椎脫臼法處死所有小鼠，剖腹，結(jié)扎賁門及幽門，取出胃，向胃腔注入4 g·L－1甲醛溶液2 mL并將胃浸泡于該甲醛溶液中10 min以固定。將胃沿大彎剪開，把胃黏膜洗凈后展平于平板上，檢測(cè)胃黏膜損傷程度并用照相機(jī)微距拍片。損傷程度用損傷指數(shù)即參照Kitagawa等[6]方法表示，按黏膜損傷的面積評(píng)分并計(jì)算損傷指數(shù)：≤1.0 mm2為1分，＞1.0 mm2且≤2.0 mm2為2分，依此類推；測(cè)量、評(píng)分、記錄均由同一人進(jìn)行。全胃評(píng)分的總和為該小鼠的胃黏膜損傷指數(shù)，并按下式計(jì)算除正常對(duì)照組外各組胃黏膜損傷抑制率。損傷抑制率＝（模型組損傷指數(shù)－各藥物組損傷指數(shù)）/模型組損傷指數(shù)×100%。

2.4 血清中SOD活性、MDA含量檢測(cè)

在各組小鼠處死前采用摘除眼球法取血，分離血清，用SOD檢測(cè)試劑盒和MDA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)各組小鼠血清中SOD活性和MDA含量，按說明書要求進(jìn)行操作。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，兩組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果以±s表示。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 小鼠胃黏膜損傷外觀結(jié)果

正常對(duì)照組小鼠胃黏膜光滑，皺襞完整規(guī)律，附有較多的黏液，未見糜爛、潰瘍、出血點(diǎn)。模型組小鼠胃黏膜光滑、皺襞范圍減少，胃黏膜伴有糜爛、潰瘍、出血等損傷，呈點(diǎn)狀、條索狀、片狀或出血壞死斑，損傷部位多見于胃體和胃竇部。西咪替丁組和VE低劑量組小鼠胃黏膜糜爛、潰瘍的程度比模型組明顯降低，胃黏膜損傷表現(xiàn)以點(diǎn)狀的糜爛為主，可見少許出血點(diǎn)。與西咪替丁組和VE低劑量組比較，VE高劑量組小鼠胃黏膜糜爛、潰瘍的程度明顯降低，胃黏膜損傷表現(xiàn)以點(diǎn)狀的糜爛為主，未見出血現(xiàn)象。各組小鼠胃黏膜損傷外觀圖見圖1。

圖1 各組小鼠胃黏膜損傷外觀圖A.正常對(duì)照組；B.模型組；C.西咪替丁組；D.VE低劑量組；E.VE高劑量組Fig 1 Appearance of gastric mucosal injury of mice in each groupA.normal control group；B.model group；C.cimetidine group；D.VE low-dose group；E.VE high-dose group

3.2 小鼠胃黏膜損傷指數(shù)檢測(cè)結(jié)果

與正常對(duì)照組比較，其余4組小鼠胃黏膜損傷指數(shù)均明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，西咪替丁組和VE低、高劑量組小鼠胃黏膜損傷指數(shù)均明顯降低（P＜0.01）；與西咪替丁組和VE低劑量組比較，VE高劑量組小鼠胃黏膜損傷指數(shù)明顯降低（P＜0.01）。各組小鼠胃黏膜損傷指數(shù)比較見表1。

表1 各組小鼠胃黏膜損傷指數(shù)比較（±s，n＝10）Tab 1 Comparison of gastric mucosal injury index of mice in each group（±s，n＝10）

表1 各組小鼠胃黏膜損傷指數(shù)比較（±s，n＝10）Tab 1 Comparison of gastric mucosal injury index of mice in each group（±s，n＝10）

與正常對(duì)照組比較：＊P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.01；與西咪替丁組比較：ΔP＜0.01；與VE低劑量組比較：★P＜0.01vs.normal control group：＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.01；vs.cimetidine group：ΔP＜0.01；vs.VE low-dose group：★P＜0.01

組別正常對(duì)照組模型組西咪替丁組VE低劑量組VE高劑量組損傷抑制率/%胃黏膜損傷指數(shù)0 70.10±9.08＊18.10±3.38＊#16.60±2.63＊#10.70±2.67＊#Δ★－0 74.18 76.32 84.74

3.3 小鼠血清中SOD活性、MDA含量檢測(cè)結(jié)果

與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠血清中SOD活性、MDA含量均明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，西咪替丁組和VE低、高劑量組小鼠血清中SOD活性、MDA含量均明顯降低（P＜0.01）；與西咪替丁組比較，VE高劑量組小鼠血清中SOD活性明顯降低（P＜0.01）。各組小鼠血清中SOD活性、MDA含量比較見表2。

表2 各組小鼠血清中SOD活性、MDA含量比較（±s，n＝10）Tab 2 Comparison of SOD activity and MDA content in serum of mice in each group（±s，n＝10）

表2 各組小鼠血清中SOD活性、MDA含量比較（±s，n＝10）Tab 2 Comparison of SOD activity and MDA content in serum of mice in each group（±s，n＝10）

與正常對(duì)照組比較：＊P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.01；與西咪替丁組比較：ΔP＜0.01vs.normal control group：＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.01；vs.cimetidine group：ΔP＜0.01

MDA含量/nmol·mL－1 3.25±0.38 3.95±0.47＊3.25±0.31#3.29±0.41#3.27±0.24#組別正常對(duì)照組模型組西咪替丁組VE低劑量組VE高劑量組SOD活性/nU·mL－1 223.74±28.44 295.64±31.26＊257.53±29.66＊#234.87±25.32#224.26±24.19#Δ

4 討論

為了使胃黏膜損傷模型效果更明顯，本實(shí)驗(yàn)的吲哚美辛用量為25 mg·kg－1，比人臨床正常用量經(jīng)換算后的值稍大（臨床用量換算為20 mg·kg－1）；西咪替丁用量按臨床正常用量換算；VE用量由于目前沒有其使用在胃黏膜損傷時(shí)的明確用量，所以筆者選用其臨床用量范圍內(nèi)的最高值為高劑量，中間值為低劑量[7]。

SOD是有氧代謝細(xì)胞生存所必需的一種酶，其能有效地清除代謝過程中產(chǎn)生的超氧陰離子自由基（O2－）。O2－是一種活潑的氧化劑，其能使細(xì)胞膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)生成脂質(zhì)過氧化物（LPO），造成組織細(xì)胞損傷。在正常情況下，體內(nèi)自由基生成與清除能力處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，一旦自由基生成過多或清除能力下降，都會(huì)打破這一平衡，致使組織細(xì)胞損傷。一般在疾病急性期，SOD被緊急動(dòng)員而活性往往高于正常水平。通過SOD活性的測(cè)定能反映氧自由基含量，LPO的中間代謝產(chǎn)物MDA含量的測(cè)定能反映脂質(zhì)過氧化物濃度[8，9]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組小鼠胃黏膜損傷指數(shù)和血清中SOD活性、MDA含量均明顯高于正常對(duì)照組，表明吲哚美辛誘發(fā)胃黏膜損傷后，機(jī)體內(nèi)氧自由基和LPO生成增多，而機(jī)體在急性胃黏膜損傷期緊急動(dòng)員體內(nèi)的SOD來清除氧自由基，這與鄒雄[9]報(bào)道結(jié)果一致，但仍誘發(fā)了胃黏膜損傷，說明LPO生成過多，體內(nèi)氧自由基生成大于清除能力，引起強(qiáng)烈的胃黏膜脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，造成明顯的胃黏膜損傷。這些都提示氧自由基參與了吲哚美辛誘發(fā)的胃黏膜損傷過程。此外，吲哚美辛還能通過抑制前列腺素合成酶使前列腺素生成減少，從而引起胃黏膜屏障低下，使胃黏膜易受損傷因子攻擊，導(dǎo)致胃黏膜損傷[1，5]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，VE低、高劑量組小鼠血清中SOD活性、MDA含量均明顯低于模型組，而與正常對(duì)照組比較無顯著性差異，說明VE參與抗氧化、清除氧自由基和抑制脂質(zhì)過氧化過程，提高胃黏膜的抗氧化和防御保護(hù)功能，從而維持胃黏膜的穩(wěn)定性，起到保護(hù)胃黏膜的作用。隨著VE用量的增大，吲哚美辛誘發(fā)的胃黏膜損傷指數(shù)明顯降低，提示VE預(yù)防吲哚美辛誘發(fā)胃黏膜損傷的保護(hù)作用可能存在一定量效正相關(guān)關(guān)系；但VE能否通過促進(jìn)前列腺素合成參與對(duì)胃黏膜損傷保護(hù)，有待進(jìn)一步研究。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，西咪替丁抑制胃黏膜損傷可能與清除氧自由基相關(guān)。西咪替丁是臨床上常用治療消化道潰瘍病的藥物，其通過抑制胃泌素及胃蛋白酶等的分泌，從而減少胃酸生成，減輕氫離子逆向彌散及胃蛋白酶對(duì)胃黏膜的破壞[1]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，VE低劑量（25 mg·kg－1）組對(duì)胃黏膜損傷的保護(hù)作用與西咪替丁（25 mg·kg－1）組比較無顯著性差異，而VE高劑量（50 mg·kg－1）組對(duì)胃黏膜損傷的保護(hù)作用強(qiáng)于西咪替?。?5 mg·kg－1）組，從而為VE預(yù)防胃黏膜損傷的臨床開發(fā)應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[1]楊寶峰，蘇定馮，周 宏，等.藥理學(xué)[M].第7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：183、271、323.

[2]郭文萃，許立新，謝 偉.維生素E對(duì)大劑量維生素D3所致心肌損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)性研究[J].內(nèi)科急危重癥雜志，2009，15（3）：146.

[3]徐 明，孫 申，張 洋.維生素C和維生素E單用及聯(lián)用對(duì)慢性酒精性肝損傷模型大鼠的預(yù)防性保護(hù)作用[J].中國藥房，2010，21（45）：4 240.

[4]毛曉明，王愛萍.維生素E對(duì)糖尿病患者腎臟的保護(hù)作用[J].中華內(nèi)分泌代謝雜志，2000，16（5）：315.

[5]李國平，鄧長(zhǎng)生，杜意平，等.TNF-α參與消炎痛誘導(dǎo)大鼠胃粘膜損傷機(jī)制的探討[J].中國病理生理雜志，1999，15（9）：814.

[6]Kitagawa H，F(xiàn)ujiwara M，Qsumi Y.Effects of water-immersion stress on gastric secretion and mucosal blood flow in rats[J].Gastroenterology，1979，77（2）：298.

[7]陳新謙，金有豫，湯 光.新編藥物學(xué)[M].第16版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：193、462、691.

[8]顧鳳英，季健平，童正本，等.非何杰金淋巴瘤患者紅細(xì)胞超氧化物歧化酶、血清脂質(zhì)過氧化物、維生素E的變化及其臨床意義的探討[J].腫瘤防治研究，1994，21（6）：346.

[9]鄒 雄.自由基的實(shí)驗(yàn)室檢查[J].山東醫(yī)藥，1994，34（2）：42.