趙桂芝（遼寧醫(yī)學院，遼寧錦州 121000）

煙酸占替諾是腦脈康制劑中的有效成分，是小動脈平滑肌外周血管擴張劑，適用于治療腦血管障礙性疾病、冠心病、狹心癥等。目前對于煙酸占替諾含量測定分析方法的文獻報道很少，《中國藥典》2010年版[1]中采用高效液相色譜（HPLC）法進行含量測定。筆者利用煙酸占替諾與紅紫素之間的電荷轉移反應，即兩者在乙醇-水介質中發(fā)生荷移反應，形成穩(wěn)定的1∶1型絡合物，再采用分光光度法來測定其含量。此方法與HPLC法相比，反應條件簡單、方便快捷，為煙酸占替諾的含量測定提供了新方法，且所得含量結果與文獻[1]方法結果一致。

1 儀器與試藥

7590型UV-VIS單光束自動掃描分光光度計（山東高密分析儀器廠）；752S紫外分光光度計（上海棱光技術有限公司）；HH-S數(shù)顯恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠）；FA1104N電子天平（上海精密科學儀器有限公司）。

腦脈康（錦州黑龍藥業(yè)有限公司，批號：20090526、20091029，規(guī)格：每片100 mg）；煙酸占替諾對照品（錦州制藥二廠，批號：20071112，純度：99.9%）；紅紫素（固安恒業(yè)精細化工有限公司，批號：20050522）；本試驗所用試劑均為分析純。

2 方法[2]與結果

2.1 溶液制備

2.1.1 1×10－3mol·L－1紅紫素乙醇液：準確稱取紅紫素0.051 24 g，加入乙醇，充分溶解，定容于200 mL容量瓶中，備用。

2.1.2 1.0 g·L－1煙酸占替諾水溶液：準確稱取煙酸占替諾對照品100 mg，加入純水，充分溶解，定容于100 mL容量瓶中，備用。

2.2 反應原理

電荷轉移反應發(fā)生在電子給予體和電子接受體之間，煙酸占替諾分子內電子富集，可作為電子給予體，而紅紫素是一個很強的平面π電子受體，可作為電子接受體，二者可形成n-π型絡合物，發(fā)生電荷的轉移。應用摩爾比法和等摩爾連續(xù)變換法測得紅紫素與煙酸占替諾反應生成的荷移絡合物的組成比為1∶1。反應過程如圖1：

圖1 荷移反應式Fig 1 Equation of charge transfer reaction

2.3 檢測方法

準確量取1.0 g·L－1煙酸占替諾適量（≤0.7 mL）置于5 mL比色管中，加入紅紫素乙醇液2.5 mL，用乙醇與水的混合液為溶劑，將反應液稀釋至刻度（控制乙醇與水的體積比為8∶2），搖勻，在25℃的水浴中恒溫10 min。取出后以流水冷卻，以相應的試劑空白（體積比為8∶2的乙醇-水混合液）作參比，用1 cm比色皿在538 nm波長處測吸光度值，測定時間為反應開始后10～60 min內。

2.4 反應條件的選擇

2.4.1 吸收光譜。以試劑空白作參比，取紅紫素乙醇液與“2.3”項下荷移絡合物在分光光度計上掃描，測得荷移絡合物的λmax＝538 nm，紅紫素的λmax＝485 nm，煙酸占替諾在可見光區(qū)沒有吸收，故后續(xù)試驗選定荷移絡合物的測定波長為538 nm，詳見圖2。

圖2 紫外吸收光譜圖1.紅紫素乙醇液；2.荷移絡合物Fig 2 UV absorption spectrum1.purpurin alcohol solution；2.charge transfer complexes

2.4.2 反應時間的選擇。按照“2.3”項下方法制備1組溶液，分別于反應不同時間（3、5、10、15、20、25、30、40、60、120 min）取反應液測定其吸光度值，結果分別為0.546、0.611、0.624、0.626、0.626、0.627、0.626、0.627、0.630、0.793。顯示：反應液的吸光度值在反應開始后的10～60 min內穩(wěn)定，因此在反應開始的10 min后即可進行吸光度值的測定，控制測定時間在10～60 min內。

2.4.3 反應溫度的選擇。按照“2.3”項下方法制備7份溶液，其余條件不變，分別將其放入不同溫度（15、20、25、30、35、40、45℃）的恒溫水浴中恒溫10 min，反應完全后取出以流水冷卻終止其反應，然后測定其吸光度值，結果分別為0.529、0.633、0.633、0.631、0.605、0.489、0.490。表明當反應溫度在 20～30℃時，反應液的吸光度值最高。因此，確定反應的最佳溫度為25℃。

2.4.4 試劑用量的選擇。在其余反應條件不變的情況下，改變紅紫素的用量，分別于100 mg·L－1的煙酸占替諾水溶液中加入不同摩爾濃度（1.0×10－4、2.0×10－4、3.0×10－4、4.0×10－4、5.0×10－4、6.0×10－4mol·L－1）的紅紫素乙醇溶液，制備系列反應液，然后測定其吸光度值，結果分別為0.179、0.252、0.299、0.399、0.655、0.648。表明當紅紫素的摩爾濃度為 5.0×10－4mol·L－1時，反應進行完全。當試劑用量超過此用量時，由于背景顏色的加深，吸光度值反而隨著顏色的加深而略有降低。

2.4.5 溶劑的選擇。分別用甲醇、乙醇、異丙醇、三氯甲烷、水與丙酮作溶劑，加入到反應體系中，制備系列反應液，然后測定吸光度值。結果顯示，以乙醇與水混合液作溶劑，反應液的吸光度值高，且通過進一步的試驗證明，混合液中乙醇與水的體積比為8∶2時，此反應體系的吸光度值最高，故選用乙醇與水體積比為8∶2的混合液作溶劑。因煙酸占替諾易溶于水，反應體系為水溶液的應調節(jié)酸堿度，但紅紫素加入酸堿后即變色，所以整個反應體系盡管用水作溶劑，也無須調節(jié)酸堿度。

2.5 方法的重復性

按“2.3”項下方法制備6份平行溶液（濃度為100 mg·L－1），于試驗確定的最佳條件下進行反應。結果，RSD＝0.98%（n＝6），表明方法的重復性良好。

2.6 比爾定律線性范圍

按上述試驗確定的條件進行反應，分別向一系列紅紫素乙醇液中加入不同濃度（20、40、60、80、100、120、140、160、180、200 mg·L－1）的煙酸占替諾水溶液，測定其吸光度（y）值。結果，煙酸占替諾檢測濃度（c）在20～140 mg·L－1范圍內與吸光度呈線性關系，其回歸方程為y＝2.101 1c+0.049 8（r＝0.998 9）。表觀摩爾吸光系數(shù)為2.46×103L·mol－1·cm－1，桑德爾靈敏度為0.176 7 μg·cm－2，此數(shù)值表明此反應靈敏度較高。

2.7 干擾試驗

在上述條件下，考察了藥物制劑中常見輔料對煙酸占替諾測定的干擾情況。制備6份反應液，分別向反應液中加入相當于煙酸占替諾含量1 500倍量的萄葡糖、1 000倍量的蔗糖、1 000倍量的谷氨酸、1 000倍量的乳糖、50倍量的淀粉、20倍量的糊精等輔料，然后測定其吸光度值，結果顯示各反應液吸光度值基本不變，說明上述常見藥物輔料對主藥測定不造成干擾。

2.8 回收率試驗

按照檢測方法，取已測得實際含量的適量樣品6份置于5 mL比色管中，制備反應溶液，然后加入不同濃度煙酸占替諾水溶液，測定其吸光度值，計算回收率，詳見表1。

表1 回收率試驗結果（n＝6）Tab 1Results of recovery test（n＝6）

2.9 樣品含量測定

取腦脈康片10片，將其充分研細，精密稱定，然后準確加入100 mL純水溶解、定容、過濾，取濾液10 mL稀釋至100 mL（濃度約為1.0 g·L－1）。取適量（≤0.7 mL）置于5 mL比色管中，制備反應液，分別以本法和文獻法[1]進行含量測定，結果2種方法含量結果一致，分別為101.9%和101.8%（批號20090526）、100.4%和101.2%（批號20091029）。

3 討論

由于煙酸占替諾結構中具有含孤對電子的N原子，此結構的物質可與缺電子的醌式結構的物質發(fā)生電荷轉移反應，使反應體系的光譜發(fā)生紅移，顏色發(fā)生改變。根據(jù)這一特點，可利用缺電子的醌式結構物質與具有富含孤對電子的物質發(fā)生反應，用以測定富含孤對電子物質的含量。但應注意此反應體系中反應時間的控制與試劑的有效選擇，因不同試劑可致反應的靈敏度有很大不同。

本法與文獻[1，3]方法相比，具有成本低、操作簡便、快速、靈敏、準確的特點，從而提供了一種快速測定煙酸占替諾含量的新方法。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：859.

[2]趙桂芝，李華侃.荷移分光光度法測定煙胺羥丙茶堿[J].藥物分析雜志，2002，22（1）：32.

[3]王澤民，康 葵，馮 梅.當代結構藥物全集[M].北京：北京科技出版社，1993：1 446.